菥蓂总黄酮提取工艺的优化

目的:优化菥蓂总黄酮的索氏提取工艺。方法:采用紫外可见分光光度法,以提取出的总黄酮含量作为评价指标,先后通过单因素实验和正交实验来确定提取菥蓂总黄酮的最佳工艺条件。结果:四因素影响顺序为提取温度>提取时间>料液比>乙醇浓度,菥蓂全草料液比为1∶13,温度180℃下,50%乙醇索氏提取回流2.5h为最佳提取条件,此时,总黄酮提取率为89.047mg/20g。结论:该工艺作为菥蓂提取总黄酮的一种有效手段,可为其工业化提取提供参考。

败酱草水提物对石斑鱼虹彩病毒的抗病毒作用

石斑鱼是名贵的海水养殖鱼类,随着高密度、集约化养殖的发展,各类水产疫病频繁暴发。石斑鱼虹彩病毒(Grouper iridovirus)是石斑鱼养殖中最严重的病毒性病原之一,会导致鱼大量死亡,因此研究可抑制此病毒感染的药物对石斑鱼养殖业具有重大意义。败酱草为我国传统中药,现代药理学证明,败酱草及其活性成分具有抗病毒、抗菌、抗肿瘤等多种生物活性。本研究首先采用光学显微镜观察、细胞活力测定实验确定败酱草水提物的细胞安全浓度;然后结合实时荧光定量PCR技术(RT-qPCR)和基于核酸适配体Q5的荧光分子探针检测技术(Aptamer Q5-based fluorescent molecular probe assay,Q5-AFMP)等方法分析败酱草水提物在细胞水平对石斑鱼虹彩病毒的抗病毒效果。其结果显示,低于2.50 mg/mL的败酱草水提物对细胞无明显的毒性作用,即败酱草水提物对石斑鱼细胞的安全浓度为≤2.50 mg/mL,高于2.50 mg/mL的败酱草水提物会降低细胞活力,并对细胞有显著的毒性作用。光学显微镜观察、细胞活力测定、RT-qPCR和Q5-AFMP技术的检测结果均证明败酱草水提物在体外对石斑鱼虹彩病毒感染具有良好的抑制作用。说明细胞安全浓度的败酱草水提物具有良好的抗石斑鱼虹彩病毒作用,具有开发为高效的抗病毒渔用药物的潜力。

菥蓂正丁醇部位抑制TLR-4/NF-κB信号通路抗脂多糖诱导的RAW264.7细胞炎症反应作用研究

目的研究菥蓂Thlaspi arvense水提醇沉部位、正丁醇部位的抗炎活性以及正丁醇部位的作用机制。方法将菥蓂水提物经过乙醇、正丁醇萃取后制得菥蓂水提醇沉部位、正丁醇部位。采用MTT法确定水提醇沉部位、正丁醇部位(15.625、31.25、62.5、125、250、500、1000μg/mL)对RAW264.7细胞的毒性。采用脂多糖(LPS)1μg/mL诱导RAW264.7细胞产生炎性反应,建立体外炎症细胞模型。Griess法检测水提醇沉部位、正丁醇部位(7.8125、15.625、31.25、62.5、125、250、500、1000μg/mL)对LPS诱导RAW264.7细胞后NO释放量的影响;ELISA法检测水提醇沉部位、正丁醇部位(125、250、500μg/mL)对白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)释放量的影响;Western Blotting法检测正丁醇部位(125、250、500μg/mL)对环氧合酶-2(COX-2)、一氧化氮合酶(iNOS)、白细胞介素1β(IL-1β)、核因子-κB(NF-κB)p-P65、Toll样受体4(TLR-4)、磷酸化NF-κB抑制蛋白(p-IκBα)蛋白表达的影响。结果菥蓂水提醇沉部位、正丁醇部位质量浓度在1000μg/mL以下时对RAW264.7细胞几乎无毒性作用。与模型组比较,菥蓂水提醇沉部位、正丁醇部位62.5、125、250、500、1000μg/mL组NO释放量显著下降(P<0.01);菥蓂水提醇沉部位、正丁醇部位125、250、500μg/mL组IL-6、TNF-α的分泌量显著降低(P<0.01),且正丁醇部位作用优于水提醇沉部位;菥蓂正丁醇部位500μg/mL组的iNOS和250、500μg/mL组COX-2、IL-1β、NF-κB p-P65、TLR-4、p-IκBα蛋白表达量显著降低(P<0.01),作用均呈浓度相关性。结论菥蓂正丁醇部位显著抑制LPS诱导的RAW264.7细胞NO的释放,IL-1β、IL-6、TNF-α的分泌以及COX-2、iNOS蛋白的表达,其抗炎作用机制可能与抑制TLR-4/NF-κB信号通路相关。