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Construction of Multi-Specific Antibody by Genetic Engineering and Its Progress in Tumor Therapy
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作者 Zhenqi Xu Can Gao +1 位作者 Mengru Jian Wei Du 《Journal of Biosciences and Medicines》 CAS 2023年第3期127-135,共9页
Targeted treatment of cancer with monoclonal antibodies increases the benefit for patients. In order to improve the anti-tumor activity of monoclonal antibodies, multi-specific antibodies have entered the research fie... Targeted treatment of cancer with monoclonal antibodies increases the benefit for patients. In order to improve the anti-tumor activity of monoclonal antibodies, multi-specific antibodies have entered the research field. The emergence of various techniques to produce multi-specific recombinant antibody molecules has led to the selection of target combinations in various forms. To date, only a few multi-specific constructs have entered phase III clinical trials, in contrast to classical monoclonal antibodies. Some of the format options are outlined from a technical point of view. We focus on the achievements and prospects of the underlying technologies for generating biand multispecific antibodies. 展开更多
关键词 genetically engineered Multi-Specific antibody Tumor Therapy
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Next generation of antibody therapy for cancer 被引量:1
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作者 Zhenping Zhu1 and Li Yan2,3 1Kadmon Pharmaceuticals,New York,New York 10016,USA 2Merck Research Laboratory,Merck & Co.,Inc.,Rahway,New Jersey 07065-4646,USA 3School of Oncology,Peking University,Beijing 100142,P.R.China. 《Chinese Journal of Cancer》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2011年第5期293-302,共10页
Monoclonal antibodies(mAbs) have become a major class of therapeutic agents providing effective alternatives to treating various human diseases.To date,15 mAbs have been approved by regulatory agencies in the world fo... Monoclonal antibodies(mAbs) have become a major class of therapeutic agents providing effective alternatives to treating various human diseases.To date,15 mAbs have been approved by regulatory agencies in the world for clinical use in oncology indications.The selectivity and specificity,the unique pharmacokinetics,and the ability to engage and activate the host immune system differentiate these biologics from traditional small molecule anticancer drugs.mAb-based regimens have brought clinical benefits,including improvements in overall survival,to patients with a variety of cancers.Many challenges still remain,however,to fully realize the potential of these new medicines.With our further understanding of cancer biology,mechanism of antibody action,and advancement of antibody engineering technologies,many novel antibody formats or antibody-derived molecules are emerging as promising new generation therapeutics.Carefully designed and engineered,they retain the advantage of specificity and selectivity of original antibodies,but in the meantime acquire additional special features such as improved pharmacokinetics,increased selectivity,and enhanced anticancer efficacy.Promising clinical results are being generated with these newly improved antibody-based therapeutics. 展开更多
关键词 单克隆抗体 治疗药物 癌症 药代动力学 临床使用 抗癌药物 人类疾病 监管机构
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Cloning and Sequencing of Kappa Light Chain Gene of a Mouse Monoclonal Antibody Directed Against Potato Virus Y
3
作者 刘德虎 《High Technology Letters》 EI CAS 1995年第2期103-107,共5页
A cDNA library was constructed in λgt11 vectors, complementary to the mRNA isolated from a mouse hybridoma raised against potato virus Y(PVY). Thirty cDNA clones were selected from the cDNA library by in situ immunoh... A cDNA library was constructed in λgt11 vectors, complementary to the mRNA isolated from a mouse hybridoma raised against potato virus Y(PVY). Thirty cDNA clones were selected from the cDNA library by in situ immunohybridization with goat anti-mouse kappa-chain-specific antibody conjugated to alkaline phosphatase, from which one clone, k6, having the largest insert was characterized by sequence analysis. The result shows that the immunoglobulin messenger RNA corresponding to k6 is 956 nucleotides in length excluding the poly(A) region, among which 31 bases code for the 5’ non-coding region, 57 for the leader sequence of the protein, 657 for the mature protein and 211 for the 3’ non-coding region. Comparison of deduced amino acid sequences of the protein and other kappa light chains shows that they share a 100% identity in their constant regions(CL) and 93.7% identity in their variable regions(VL). The kappa light chain encoded by k6 is considered to be specific to PVY since only one type of light chain is expressed in the hybridoma. 展开更多
关键词 IMMUNOGLOBULIN POTATO virus Y KAPPA chain Gene CLONING Sequence analysis
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鼠抗人DCP单克隆抗体的类型转换与表达
4
作者 廖凯 张智萍 +1 位作者 丁笠 张新跃 《扬州大学学报(农业与生命科学版)》 CAS 北大核心 2024年第3期72-81,共10页
为建立抗体类型转换和表达体系,以最新制备的1株IgM类抗体——鼠抗人DCP单克隆抗体7C2为研究对象,首先从7C2杂交瘤细胞中克隆IgM轻重链可变区,再将IgM可变区序列与鼠IgG1恒定区序列融合克隆至真核表达载体,并转入293细胞系中。利用蛋白... 为建立抗体类型转换和表达体系,以最新制备的1株IgM类抗体——鼠抗人DCP单克隆抗体7C2为研究对象,首先从7C2杂交瘤细胞中克隆IgM轻重链可变区,再将IgM可变区序列与鼠IgG1恒定区序列融合克隆至真核表达载体,并转入293细胞系中。利用蛋白质免疫印迹技术,成功检测到IgG1抗体在细胞内的表达并分泌至培养上清。在进一步优化密码子、宿主细胞和信号肽等影响抗体表达的因素后,建立了双质粒瞬转和基于双顺反子表达方式的稳转表达体系,可用于将鼠源IgM类抗体转换为IgG类抗体并进行表达。该研究为拓展非IgG类抗体的应用范围提供重要途径,同时为提高重组抗体在真核体系中的表达效率提供参考。 展开更多
关键词 单克隆抗体 基因工程 抗体类型转换 表达条件优化
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肌酸激酶同工酶CK-MB的构建表达、抗体制备及初步鉴定
5
作者 李琳钰 姚新欣 +2 位作者 刘俊伶 陶倩倩 杨娟 《实验动物科学》 2024年第3期55-64,共10页
目的 构建异源二聚体CK-MB重组蛋白并制备其特异性基因工程抗体,以此作为CK-MB定量检测试剂盒的诊断原料,从而辅助临床急性心肌梗死的早期诊断,提高诊断的准确性。方法 通过共表达载体获取异源二聚体CK-MB并进行动物免疫,从而获取小鼠... 目的 构建异源二聚体CK-MB重组蛋白并制备其特异性基因工程抗体,以此作为CK-MB定量检测试剂盒的诊断原料,从而辅助临床急性心肌梗死的早期诊断,提高诊断的准确性。方法 通过共表达载体获取异源二聚体CK-MB并进行动物免疫,从而获取小鼠浆细胞;进一步使用单细胞光导系统分离抗原特异性小鼠单个B细胞,并通过单细胞PCR获取抗体轻重链的可变区基因序列后构建基因工程抗体。基于初步的功能验证筛选出候选抗体,并进一步通过棋盘滴定法探究最佳的配对方案,并利用双抗夹心ELISA原理初步组装CK-MB定量检测试剂盒。结果 成功获取CK-MB免疫原;通过单B细胞光导技术筛选出CK-MB抗原特异性小鼠单个浆细胞并制备出2株小鼠源基因工程抗体,且均具有识别天然CK-MB的能力;经由双抗夹心ELISA法筛选出两种配对方案,其拟合曲线的R~2均大于0.99。结论 成功制备出靶向CK-MB的小鼠源基因工程抗体,经由ELISA初步验证抗体的特异性和亲和力,为进一步开发高特异性、高灵敏度的CK-MB新型定量检测试剂盒奠定了坚实基础。 展开更多
关键词 肌酸激酶同工酶CK-MB 急性心肌梗死 基因工程抗体
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TP53基因工程抗体的构建、表达筛选及表征鉴定
6
作者 蒋道梅 姚新欣 +1 位作者 杨琴 张鹏 《赣南医学院学报》 2024年第6期571-579,共9页
目的:利用基因工程抗体技术制备TP53重组抗体,并进行临床病理诊断应用的初步探究。方法:将杂交瘤来源的TP53单克隆抗体重链及轻链可变区基因分别与pGEM-T载体连接,测序分析并选择有效重链及轻链序列分别与pFUSEss-CHIg-mG2B、pFUSE2ss-C... 目的:利用基因工程抗体技术制备TP53重组抗体,并进行临床病理诊断应用的初步探究。方法:将杂交瘤来源的TP53单克隆抗体重链及轻链可变区基因分别与pGEM-T载体连接,测序分析并选择有效重链及轻链序列分别与pFUSEss-CHIg-mG2B、pFUSE2ss-CLIg-mk及pcDNA3.4载体连接。利用ExpiCHO-S™Expression System进行真核表达,经Protein A柱纯化获得TP53重组抗体。最后将TP53重组抗体和商品化TP53抗体进行蛋白质免疫印迹(Western blot,WB)和免疫组织化学(Immunohistochemistry,IHC)应用的初步探究。结果:通过抗体表达纯化获得TP53重组抗体,液相色谱-质谱测定结果显示TP53轻链/重链分子量分别为25 kDa和53 kDa,ELISA效价为1∶2180000,亲和力测定Ka值为6.6×10^(10) L·mol^(-1)。WB结果显示TP53重组抗体与商品化TP53抗体表达结果一致。IHC结果显示TP53重组抗体和商品化TP53抗体识别靶标均定位于细胞核,在人肾癌、人乳腺叶状腺癌、人乙状结肠腺癌及小鼠肝癌中的检测结果一致,且TP53重组抗体在人高分化鳞癌、人肝细胞癌和人乳腺癌中的免疫组化检测效果优于商品化的TP53抗体。结论:本研究成功制备了小鼠抗人TP53重组抗体,并为临床病理诊断提供初步的数据支持。 展开更多
关键词 TP53单克隆抗体 抗体 单克隆 基因工程抗体技术 载体构建 免疫组织化学
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基因工程抗体研究进展 被引量:20
7
作者 李菁 林彤 +5 位作者 宋帅 高闪电 邵军军 丛国政 独军政 常惠芸 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期40-44,共5页
随着对分子生物学研究和抗体分子结构功能的深入研究,利用细胞工程和遗传工程对抗体分子进行改建并赋予其新的功能,进而开发了新的抗体应用领域,使单克隆抗体技术又向前发展了一步。基因工程抗体是按人类设计所重新组装的新型抗体分子,... 随着对分子生物学研究和抗体分子结构功能的深入研究,利用细胞工程和遗传工程对抗体分子进行改建并赋予其新的功能,进而开发了新的抗体应用领域,使单克隆抗体技术又向前发展了一步。基因工程抗体是按人类设计所重新组装的新型抗体分子,可保留或增加天然抗体的特异性和主要生物学活性,去除或减少无关结构,从而可克服单克隆抗体在临床应用方面的缺陷。 展开更多
关键词 基因工程抗体 人源化抗体 小分子抗体 核糖体展示
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基因工程抗体在食品安全检测中应用进展研究 被引量:11
8
作者 何扩 张秀媛 +2 位作者 杜欣军 王俊平 王硕 《中国粮油学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2014年第8期124-128,共5页
基因工程抗体是近年来发展起来的一种新型抗体,将其应用于食品安全检测是目前食品学科领域研究的热点之一。因基因工程抗体具有分子小、免疫原性低、可塑性强、成本低以及可大批量生产等诸多优点,所以在食品污染物检测方面具有潜在的巨... 基因工程抗体是近年来发展起来的一种新型抗体,将其应用于食品安全检测是目前食品学科领域研究的热点之一。因基因工程抗体具有分子小、免疫原性低、可塑性强、成本低以及可大批量生产等诸多优点,所以在食品污染物检测方面具有潜在的巨大应用价值。本文综述了基因工程抗体的分类、对污染物的检测原理、展示技术以及目前基因工程抗体在食品污染物检测方面应用的一些最新进展和存在的不足之处。 展开更多
关键词 基因工程抗体 噬菌体抗体库 食品污染物 SCFV
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生物制药的现状和未来(二):发展趋势与希望 被引量:32
9
作者 胡显文 陈惠鹏 +1 位作者 汤仲明 马清钧 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期86-93,共8页
随着基因组和蛋白质组研究的深入,越来越多的与人类疾病发展相关的靶标被确定,使得我们能够研发更精确的药物来防治这些疾病。这意味着生物制药将有更多机会获得突破性进展,最终将使更多更好的生物技术药物被批准上市。综述了生物制药... 随着基因组和蛋白质组研究的深入,越来越多的与人类疾病发展相关的靶标被确定,使得我们能够研发更精确的药物来防治这些疾病。这意味着生物制药将有更多机会获得突破性进展,最终将使更多更好的生物技术药物被批准上市。综述了生物制药发展的几个趋势,主要有:(1)哺乳动物细胞表达的产品将在相当长的时间内占统治地位;(2)治疗性抗体将会是生物制药领域第二次创新高潮;(3)越来越多分子量大、结构复杂的功能蛋白将被开发成生物技术药物,尤其是用于治疗遗传性疾病的药物;(4)对已批准上市的生物技术药物的化学修饰尤其是PEG化以改善药物性能;(5)通过某些药物的定点突变获得第二代新生物技术药物,如胰岛素、EPO和t-PA的突变体;(6)组织工程、细胞治疗和基因治疗充满了机遇和挑战。 展开更多
关键词 生物制药 发展现状 发展趋势 哺乳动物细胞培养 治疗性抗体 功能蛋白 化学修饰 基因治疗
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基于公共信息资源的p185抗体人源化设计 被引量:5
10
作者 程联胜 邢毅 刘兢 《中国科学技术大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期591-600,共10页
通过计算机辅助分子设计的手段 ,综合序列分析和结构分析的结果对抗体的结构完成了计算机模拟 ,并对其进行了人源化的模建和改造 ,从而建立了一套快速可行的抗体人源化设计方案 .对一株抗p1 85neu/Her 2 单克隆抗体进行了克隆测序 ,并... 通过计算机辅助分子设计的手段 ,综合序列分析和结构分析的结果对抗体的结构完成了计算机模拟 ,并对其进行了人源化的模建和改造 ,从而建立了一套快速可行的抗体人源化设计方案 .对一株抗p1 85neu/Her 2 单克隆抗体进行了克隆测序 ,并采用此方案进行了人源化设计 .此设计方案完全使用可公共访问的生物信息学工具和数据库 ,具有良好的实用性和推广价值 . 展开更多
关键词 公共信息资源 P185 人源化设计 基因工程抗体 计算机模拟 抗体人源化 计算机辅助分子设计
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重组乙型肝炎疫苗(酿酒酵母)免疫新生儿13年后的效果观察 被引量:4
11
作者 姚晴青 董晓莲 +6 位作者 王学才 王法弟 徐海涛 王晓丽 陈胜玉 范建良 郑英杰 《复旦学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期238-242,252,共6页
目的对重组乙肝疫苗的长期有效性进行研究。方法乙肝母亲(35例)和健康母亲(100例)所生的新生儿按照0-1-6月的程序于1996年10月至1997年5月进行重组乙肝疫苗(酿酒酵母)免疫接种,免疫后13年(2010年)随访并进行乙肝相关血清学指标的检测和... 目的对重组乙肝疫苗的长期有效性进行研究。方法乙肝母亲(35例)和健康母亲(100例)所生的新生儿按照0-1-6月的程序于1996年10月至1997年5月进行重组乙肝疫苗(酿酒酵母)免疫接种,免疫后13年(2010年)随访并进行乙肝相关血清学指标的检测和定量分析。结果成功随访到101例少年。3.96%(4/101)的少年出现天然的乙肝病毒感染(即HBcAb阳性),其母亲均为具高感染性的乙肝感染者,其中1例同时为乙肝携带者。婴儿乙肝疫苗免疫13年后其anti-HBs阳性率为82.2%(83/101),其中起始疫苗应答者中anti-HBs阳性率为83.5%(76/91)。乙肝感染母亲和健康母亲所生少年anti-HBs阳性率无统计学差异,但母亲乙肝感染所生的少年anti-HBs水平较高。结论重组乙肝疫苗(酿酒酵母)免疫后13年仍具有保护性,母亲乙肝感染长期影响着其子女处于较高的anti-HBs水平。 展开更多
关键词 乙型肝炎疫苗 基因工程 有效性 乙型肝炎抗体
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抗氨基末端脂多糖结合蛋白基因工程抗体库的构建及体外表达筛选 被引量:2
12
作者 王长松 刘友生 +3 位作者 李红 葛晓冬 邓军 陈燕平 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2005年第3期177-181,共5页
目的构建人源化的单链可变区抗体库,运用体外表达技术翻译并筛选特异性的抗NHLBP抗体。方法分离健康人外周血单核细胞,抽提总RNA设计引物,扩增抗体轻重链的可变区,通过一段柔性片段将其连接成单链抗体库;应用体外表达技术翻译抗体库,并... 目的构建人源化的单链可变区抗体库,运用体外表达技术翻译并筛选特异性的抗NHLBP抗体。方法分离健康人外周血单核细胞,抽提总RNA设计引物,扩增抗体轻重链的可变区,通过一段柔性片段将其连接成单链抗体库;应用体外表达技术翻译抗体库,并筛选出与NHLBP高度结合的单链抗体片段。结果扩增的单链抗体可变区片段分别为340bp和325bp,经连接后约为750bp。经过体外表达得到了约27000的抗体片段,经过5轮筛选进化,得到了可与NHLBP高度结合的抗体。结论已成功构建了人源化的单链抗体库;通过体外表达技术筛选到可与NHLBP高度结合的抗体。 展开更多
关键词 体外表达 脂多糖结合蛋白 抗体库 筛选 构建 基因工程 外周血单核细胞 氨基 单链抗体 可变区 总RNA 人源化 片段 特异性 技术 健康人 高度 翻译 连接 引物 进化
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猪“O”型口蹄疫基因工程苗免疫猪的免疫效力、安全性及抗体消长 被引量:3
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作者 徐泉兴 尤永进 +10 位作者 葛艳 饶忠 吴永明 何志华 邵水龙 王其泉 朱宝仙 周金鑫 盛祖恬 孙理云 何永强 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 2000年第S1期133-136,共4页
对猪“O”型口蹄疫基因工程疫苗进行免疫效力和安全性的观察,同时检测了免疫猪的抗体消长。结果表明,该基因工程疫苗对猪体是安全、有效的。免疫猪抗体乳鼠中和指数在免疫后4个月仍可达2.0,血凝价仍达27.5。
关键词 口蹄疫 基因工程疫苗 免疫效力 安全性 抗体消长
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基因工程抗体抗CD19(Fab)-LDM的制备及生物学活性研究 被引量:5
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作者 姜琳琳 张孝云 +4 位作者 马莉 颜次慧 齐怀丰 熊冬生 范冬梅 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第10期1363-1368,共6页
目的构建及表达抗CD19(Fab)-LDP(LDP为LDM辅基蛋白)融合蛋白,制备强化融合蛋白anti-CD19(Fab)-LDM,进行体外生物活性的研究。方法采用基因克隆技术,构建基因重组质粒pAZYanti-CD19(Fab)-LDP,测序进行鉴定,转化至大肠杆菌进行表达,表达... 目的构建及表达抗CD19(Fab)-LDP(LDP为LDM辅基蛋白)融合蛋白,制备强化融合蛋白anti-CD19(Fab)-LDM,进行体外生物活性的研究。方法采用基因克隆技术,构建基因重组质粒pAZYanti-CD19(Fab)-LDP,测序进行鉴定,转化至大肠杆菌进行表达,表达产物经Protein G亲和层析柱纯化后,进行SDS-PAGE分析和Western blot鉴定;采用流式细胞检测技术(FACS)和激光共聚焦显微镜技术,检测融合蛋白与B淋巴瘤Raji细胞的结合活性;采用间接免疫荧光法,检测CD19介导细胞内化的情况;采用MTT法检测强化融合蛋白anti-CD19(Fab)-LDM对CD19+Raji细胞的靶向杀伤活性;采用彗星电泳的方法,检测强化融合蛋白对Raji细胞DNA的损伤程度。结果用基因工程方法成功的构建、表达融合蛋白anti-CD19(Fab)-LDP,Protein G亲和层析柱纯化后在SDS-PAGE上表现为相对分子质量约60 ku蛋白条带,且融合蛋白可与Raji细胞特异结合,并能介导细胞的内化;强化融合蛋白对Raji细胞具有较强的细胞毒性,并能引起细胞DNA损伤。结论强化融合蛋白anti-CD19(Fab)-LDM可以靶向作用于B淋巴瘤细胞,并具有较强的抗肿瘤活性,在恶性B淋巴瘤生物治疗中具有潜在的应用价值。 展开更多
关键词 CD19 力达霉素 B性恶性淋巴瘤 基因工程抗体 DNA损伤 强化融合蛋白
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重组葡激酶在大鼠静脉注射给药后的药代动力学 被引量:2
15
作者 许长江 刘骁 +3 位作者 李端 黄阳滨 于敏 莫炜 《复旦学报(医学版)》 EI CAS CSCD 北大核心 2002年第4期308-310,共3页
目的 研究重组葡激酶 (r Sak)在大鼠静脉注射后的药代动力学。方法 大鼠静注r Sak 10 0、30 0与90 0 μg·kg-1,采用生物免疫发色底物法和牛奶板溶圈法测定活性 ,以单抗测定含量。结果 r Sak静注后 ,在大鼠体内过程符合二室模型... 目的 研究重组葡激酶 (r Sak)在大鼠静脉注射后的药代动力学。方法 大鼠静注r Sak 10 0、30 0与90 0 μg·kg-1,采用生物免疫发色底物法和牛奶板溶圈法测定活性 ,以单抗测定含量。结果 r Sak静注后 ,在大鼠体内过程符合二室模型。测定活性表明 ,3种剂量r Sak的T1/2α分别为 (1.79± 0 .76 )、(1.99± 0 .6 0 )及(2 .2 2± 1.0 1)min ;T1/2 β分别为 (2 0 .2 4± 11.15 )、(2 5 .32± 9.2 6 )及 (2 6 .45± 11.6 4)min ;AUC0 T 分别为(182 .88± 6 4.0 7)、(376 .2 6± 71.14)及 (1311.4± 36 9.4)HI·min·mL-1;测定含量表明 ,3种剂量r Sak的T1/2α分别为 (1.5 8± 0 .86 )、(1.2 2± 0 .5 7)及 (1.49± 0 .47)min ;T1/2 β分别为 (16 .5 8± 6 .75 )、(12 .94± 3.13)及 (15 .5 4± 3.88)min ;AUC0 T分别为 (2 .0 5± 0 .75 )、(5 .6 5± 2 .5 3)及 (13.18± 5 .43) μg·min·mL-1。结论 r Sak在大鼠体内过程符合二室模型 ,经方差检验 ,各剂量间药代动力学参数均无显著性差异 (P >0 .0 5 )。 展开更多
关键词 重组葡激酶 大鼠 静脉注射 药代动力学
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Rh抗原Fab抗体库的构建与筛选 被引量:2
16
作者 陈琦 张嘉敏 +2 位作者 张海燕 朱自严 李厚达 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第9期805-807,810,共4页
目的:构建抗体库并筛选Rh抗原的Fab抗体。方法:收集5份血清中抗Rh抗体效价在1∶256~512的人淋巴细胞,提取RNA,用多对引物PCR扩增VH、Vκ、Vλ基因,并分别从pComb3xTT和pComb3xλ噬粒中扩增CH1、Cκ、Cλ,通过重叠PCR,构建重链Fd基因及... 目的:构建抗体库并筛选Rh抗原的Fab抗体。方法:收集5份血清中抗Rh抗体效价在1∶256~512的人淋巴细胞,提取RNA,用多对引物PCR扩增VH、Vκ、Vλ基因,并分别从pComb3xTT和pComb3xλ噬粒中扩增CH1、Cκ、Cλ,通过重叠PCR,构建重链Fd基因及完整的kappa、Lamda轻链,并进一步重叠PCR,获得Fab抗体片段。Fab经酶切、连接并电转化到噬菌体抗体表达载体pComb3xSS中,构建获得抗Rh的Fab抗体库,经4轮Rh(-)/Rh(+)红细胞阴/阳淘筛,获得的阳性克隆分别进行血凝试验、Western blot分析及测序鉴定。结果:构建获得总库容为7.4×106的Fab抗体库,并从中筛选得到1株能特异结合Rh抗原的Fab抗体。结论:应用基因工程抗体技术,成功获得了1株能与Rh(+)红细胞特异凝集的Fab抗体,为制备能用于临床的特异性强、效价高,并具有自主知识产权的Rh抗体打下基础。 展开更多
关键词 RH血型 基因工程抗体 噬菌体抗体库 FAB
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靶向模拟Bt Cry1C蛋白抗虫功能的人源化基因工程抗体筛选及鉴定 被引量:2
17
作者 徐重新 张霄 +5 位作者 刘媛 仲建锋 谢雅晶 卢莉娜 高美静 刘贤金 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期191-200,共10页
Bt蛋白制剂及其转基因作物长时间推广应用,害虫抗药性等问题日益凸显,探索新型安全抗虫材料已成为竞先研究的热点。基于抗体免疫网络学说的抗独特型抗体技术被证实可用于研发抗原生物活性类似物,有望成为靶向创制模拟Bt蛋白抗虫功能材... Bt蛋白制剂及其转基因作物长时间推广应用,害虫抗药性等问题日益凸显,探索新型安全抗虫材料已成为竞先研究的热点。基于抗体免疫网络学说的抗独特型抗体技术被证实可用于研发抗原生物活性类似物,有望成为靶向创制模拟Bt蛋白抗虫功能材料的新途径。以Bt Cry1C蛋白多克隆抗体为包被抗原,从人源化噬菌体单链抗体库中获得9个阳性单克隆,其中E8-Anti-Id scFv经鉴定为β型抗独特型基因工程单链抗体。Bt Cry1C蛋白多克隆抗体、小菜蛾(Plutella xylostella)刷状缘膜囊泡(brush border membrane vesicles,BBMV)蛋白和稻纵卷叶螟(Cnaphalocrocis medinalis)BBMV蛋白对E8-Anti-Id scFv的竞争抑制中浓度(IC_(50))分别为2.625、3.638和4.605μg/mL。室内生物测定显示,噬菌体展示形式的E8-Anti-Id scFv在滴度为1.2×10^(8) CFU/mL浓度条件下,对供试的小菜蛾和稻纵卷叶螟在72 h内的校正死亡率为58.69%和52.82%,其抗虫活性分别达到浓度为20μg/mL的原Bt Cry1C蛋白的77.87%和73.21%。由此表明,获得的E8抗独特型基因工程单链抗体材料初步具备模拟Bt Cry1C蛋白抗虫功能的特性,为后期深入研究和推进应用奠定了技术和材料基础。 展开更多
关键词 Bt Cry1C蛋白 抗独特型抗体 噬菌体抗体库 基因工程抗体
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全人源食管癌单链抗体scFv基因文库的构建 被引量:2
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作者 段红 唐树彬 +2 位作者 庞华 彭志平 李少林 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 北大核心 2007年第7期486-489,共4页
目的制备全人源化食管癌单链抗体scFv基因文库。方法取食管癌病人癌肿周围淋巴结作为B细胞的来源,提取总RNA,用RT-PCR的方法获得抗体可变区基因cDNA文库。首先分别网格筛选确定扩增VH和VL基因片段的引物对,以cDNA为模板扩增VH和VL基因片... 目的制备全人源化食管癌单链抗体scFv基因文库。方法取食管癌病人癌肿周围淋巴结作为B细胞的来源,提取总RNA,用RT-PCR的方法获得抗体可变区基因cDNA文库。首先分别网格筛选确定扩增VH和VL基因片段的引物对,以cDNA为模板扩增VH和VL基因片段,再以它们为模板分别扩增VH-linker与VL-linker,用SOE-PCR技术将它们拼接成scFv,再引入酶切位点SfiI和NotI,胶回收PCR产物获得scFv。将scFv基因克隆入噬菌粒载体pCANTAB-5E后电转入EcoliTG1。PCR法鉴定抗体基因插入率,1.5%琼脂糖凝胶电泳鉴定阳性克隆酶切产物。结果食管癌周围淋巴结的提取总RNA琼脂糖电泳结果中可见清晰的28S、18S条带;VH基因的大小约为450bp,VL基因为350bp,组装后的scFv基因约为850bp。PCR连接产物的转化效率为2×107cfu/μg,scFv的阳性插入率为91.7%(22/24)。结论食管癌相关的人源单链抗体基因文库的构建为进一步筛选单链抗体库奠定了基础。 展开更多
关键词 噬菌体抗体库 单链抗体 食管癌 基因工程抗体
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鼠源单克隆抗体人源化研究进展 被引量:4
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作者 王臣 温文彦 张春杰 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2006年第11期2336-2337,2343,共3页
杂交瘤技术诞生以来,鼠源单克隆抗体为人类疾病的研究起到了重大的推动作用,而鼠源单克隆抗体用于疾病的治疗时却有严重的不足,单克隆抗体人源化已是当前研究的热点。对单克隆抗体人源化的有关实验研究进展进行了综述。
关键词 单克隆抗体 抗体人源化 基因工程
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基因工程抗体亲和力成熟的策略 被引量:8
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作者 胡晓林 张春明 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期702-704,共3页
近年来,抗体因其高度的特异性在诊断和药物的靶向治疗上备受青睐,相关行业的发展也极为迅猛。在体内诊断和治疗上,基因工程抗体具有众多鼠源性单克隆抗体无可比拟的优势,但前者亲和力低是制约其实际应用的瓶颈问题,作者将就基因工程抗... 近年来,抗体因其高度的特异性在诊断和药物的靶向治疗上备受青睐,相关行业的发展也极为迅猛。在体内诊断和治疗上,基因工程抗体具有众多鼠源性单克隆抗体无可比拟的优势,但前者亲和力低是制约其实际应用的瓶颈问题,作者将就基因工程抗体亲和力成熟的策略及其应用进行综述。 展开更多
关键词 亲和力成熟 基因工程抗体 突变
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