嗜热毛壳菌内切β-葡聚糖酶的分离纯化及特性

探讨了液体发酵嗜热毛壳菌 (Chaetomiumthermophile)产生的内切 β 葡聚糖酶的分离纯化及特性。粗酶液经硫酸铵分级沉淀、DEAE SepharoseFastFlow阴离子层析、Pheny1 Sepha rose疏水层析、Sephacry1S 1 0 0分子筛层析等步骤便可获得凝胶电泳均一的内切 β 葡聚糖酶。经 1 2 5 %SDS PAGE和凝胶过滤层析法分别测得所分离纯化酶蛋白的分子量约为 6 7 8kD和6 9 8kD。该酶反应的最适温度和pH分别为 6 0℃和 4 0～ 4 5在pH5 0条件下 ,该酶在 6 0℃下稳定 ;70℃保温 1h后 ,仍保留 3 0 %的活性 ;在 80℃的半衰期为 2 5min。金属离子对内切β 葡聚糖酶的活性影响较大 ,其中Na+ 对酶有激活作用 ;Fe2 + 、Ag+ 、Cu2 + 、Ba2 + 、Zn2 + 等对酶有抑制作用。该酶对结晶纤维素没有水解能力。

嗜热子囊菌光孢变种Thermoascus aurantiacus var.levisporusβ-葡萄糖苷酶的分离纯化及特性研究

采用室内培养、测定方法,对嗜热子囊菌光孢变种Thermoascus aurantiacus var.levisporus产生的β-葡萄糖苷酶进行了分离纯化及特性研究。粗酶液经硫酸铵沉淀、DEAE-SepharoseFastFlow阴离子层析、Phenyl-Sepharose疏水层析等步骤获得了凝胶电泳均一的β-葡萄糖苷酶。结果表明,经12%SDS-PAGE测得酶的单亚基分子量约为118kDa,凝胶过滤层析测得酶的分子量约为350kDa。该酶反应的最适温度和最适pH分别为80℃和4.5￣5.0,在pH5.0条件下,该酶在70℃条件下基本稳定,80℃保温30min,剩余酶活为15%。金属离子对β-葡萄糖苷酶活性影响较大,其中Ca2+、Ba2+对酶有激活作用;Ag+、Fe3+、Cu2+对酶有显著的抑制作用。该酶对水杨苷具有很强的底物特异性。