啤酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)营养缺陷型的筛选及原生质体融合

本文采用营养缺陷型的互补进行了啤酒酵母原生质体融合产物的筛选。从DNA含量分析看,融合子多为三倍体,少数为四倍体,融合子的生长速度和酒精产率都比亲株高,种内原生质体融合率为1.21×10^(-4)。

构建直接发酵淀粉产生酒精的酵母融合菌株的研究

以酒精酵母和热带假丝酵母为亲本 ,通过单亲灭活原生质体融合技术 ,获得了既具有糖化酶活性又能高产酒精的稳定的酵母融合株 ,并测定和比较了融合子的细胞大小、DNA含量以及比增长率 μ、淀粉利用能力、乙醇耐受性、α 淀粉酶和糖化酶活力等生产性能。属间原生质体融合率为 9 2× 10 -6。F 1和F 5两株融合子性状较好 ,酒精发酵产量可达 8 8%和 11 5 % ,具有良好的应用前景。

酵母属间融合构建高温发酵木糖生产乙醇优良菌株

通过单倍体分离和诱变获得 8株休哈塔假丝酵母 1 766和高温酿酒酵母G47的营养缺陷型突变株。并通过聚乙二醇 (PEG)和电诱导融合等方法 ,实现了能发酵木糖产生酒精的休哈塔假丝酵母和高温酿酒酵母之间的融合。融合子经DNA含量、细胞体积测定和稳定性能试验证明为稳定的融合子。F 71融合子能在 45℃下发酵木糖生产酒精 ,其在 45℃发酵木糖所产酒精体积分数为 1 .675 % ,其转化率为 68.8%。且与亲株比较 ,F 71的酒精耐受能力提高了 1 %。

双歧杆菌和酿酒酵母原生质体融合子筛选方法的探讨

目的:探讨双歧杆菌(Bifidobacterium)和酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)原生质体融合子的筛选方法。方法:将双歧杆菌和酿酒酵母原生质体进行原生质体融合,采用10%乳糖中性红培养基进行融合子的初筛,并分析融合子传代稳定性、生物学特性,采用双歧杆菌属特异性寡核苷酸探针对亲本菌和融合子进行了荧光原位杂交检测比较。结果:结果表明,筛选得到的融合子具有双歧杆菌的特异性序列和亲本菌的生物学特性。结论:双歧杆菌和酿酒酵母原生质体融合,实现了厌氧菌和酵母的跨界融合,为双歧杆菌生物学功能的开发提供新思路、新途径。

光合细菌与酵母跨界融合（杂合）子发酵味精废水研究

光合细菌球形红假单胞菌（Ｒｈｏｄｏｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｓｐｈａｅｒｏｉｄｅｓ）和酿酒酵母（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）细胞分别经溶茵酶和蜗牛酶脱壁形成原生质体，在聚乙二醇（ＰＥＧ）和Ｃａ２＋诱导下实现了真核与原核细胞的超远缘杂交．经抗菌素培养基初步鉴定，融合产物能同时在含有链霉素和制霉茵素的培养基中生长，而双亲细胞只能在含有单一抗菌素的培养基中生长，经初筛与复筛后，获得高絮凝性融合（杂合）子菌株Ｆ１３－１，Ｆ１５－１和Ｆ２０－１，将它们分别引入味精废水进行发酵反应，测定菌体转化有机废物生成生物量的效率即观察产率系数Ｙｏｂｓ；测定单位菌体单位时间内在ＢＯＤ５为３７５６ｍｇ／Ｌ味精废水中的菌体比增长率和有机污染物的比降解率．结果表明，３株杂种细胞在高浓度废水中能呈现出较高的合成生物量活性，而降解去除ＢＯＤ５的性能不及双亲或介于双亲之间．

酵母菌属间原生质体融合构建高温酵母菌株

酿酒酵母（Ｓａｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）Ａ００１和克鲁维酵母（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓｓｐ．）Ｙ０３４属间原生质体融合构建高温酵母菌株。对制备高再生活性原生质体及融合子细胞形态、生理化特征、同工酶性质、遗传稳定性和高温发酵等方面进行了研究。结果表明，融合子ＡＹ０２３和ＡＹ６８０遗传性能稳定，表达了双亲优良性状，获得了在４５℃培养条件下产酒率７４％的属间融合菌株，是目前已见文献报道的产酒率最高的高温（４５℃）酵母菌株。

酵母属间原生质体融合改进菌株木糖发酵性能

通过单倍体分离和紫外诱变，获得了１４株树干毕赤酵母（Ｐｉｃｈｉａｓｔｉｐｉｔｉｓ）７１２４和酿酒酵母（Ｓａｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）１３００的营养缺陷型突变株。用聚乙二醇（ＰＥＧ）和电诱导融合及致死融合等方法，实现了树干毕赤酵母和酿酒酵母的属间原生质体融合。融合子能发酵木糖产生酒精，其厌氧发酵木糖和木糖葡萄糖混合液的能力明显优于亲株，耐酒精的性能也比亲株树干毕赤酵母７１２４有所提高。融合子经ＤＮＡ含量、细胞体积测定和稳定性能实验证明为稳定融合子。

多耐性酒精酵母菌的选育及特性研究

以酿酒酵母spc1,Y14,S16为出发菌株,经紫外线诱变和筛选,获得了3株对温度、乙醇浓度、pH耐性有所提高的正向突变株UVs,UV14,UV16;以这些菌株为出发菌株,进行三轮原生质体融合,最终获得了能耐受48°C,19%vol乙醇浓度和耐酸(pH 2.6)的酵母菌TT33。该突变株对温度和耐酒精能力分别提高了17.1%和58.3%。该菌株在35°C下发酵72h酒精产量为101.58g/L,比出发菌株spc1在35°C发酵液中最高乙醇浓度83.82g/L提高了21.1%。

原生质体电诱导融合构建高温酿酒酵母

研究了采用原生质体电融合构建高温酿酒酵母。对影响电融合效率的几个参数、高温浓醪发酵和融合子遗传稳定性等方面进行了研究。确定了进行电诱导融合的最佳条件 ,并选出了 1株融合株。

克鲁维酵母与酿酒酵母属间原生质体融合构建高温酵母菌株

通过PEG诱导碘乙酸灭活呼吸缺陷克鲁维酵母（Kluyveromycessp．Y034）原生质体与酿酒酵母（SaccharomycescerevisiaeA001）原生质体融合，获得45℃发酵产酒率高达8．7％的高温酵母菌株AY006。线粒体缺失和氯霉素抑制可显著降低高密度原生质体回复抑制效应。对融合子菌落形态、同工酶性质和高温发酵等方面分析，融合株表达了耐温和高产酒率双亲优良性状，证实其杂种特征。

生产纤维素乙醇的原生质体融合菌株的构建

为了获得耐发酵抑制剂、耐乙醇并利用木糖的纤维素乙醇生产菌种,以实验室保藏菌种Saccharomyces cerevisiaeY5和Pichia stipitis CBS6054为亲本,采用双亲灭活原生质体融合技术,选育出了共代谢葡萄糖和木糖,且耐受发酵抑制剂的酵母菌株Y10-F。该菌在以木糖为唯一碳源的培养基中培养96h,木糖的利用率达到58.8%,乙醇浓度为5.2g/L。在外加6.0、8.0g/L乙醇的培养液中,Y10-F的生长优于亲株。外加3.0g/L的糠醛时,Y10-F的延滞期较亲本Y5和CBS6054分别缩短了6h和18h。对融合菌株Y10-F进行了汽爆法预处理玉米秸秆的酶解液发酵实验,具有较好的耐毒和产乙醇能力。

用原生质体融合构建高产酒精酵母株

用单孢子分离、单倍体诱变、原生质体融合等手段，获得了酵母菌株———科生９０６４。用该菌的固定化细胞进行发酵玉米糖化醪生产酒精的扩大试验。经８个月的吨级生物反应器运转试验结果证明，该酵母凝胶粒子活性稳定，在玉米糖化醪液初糖浓度为１８％～２０％，ｐＨ值４０～５０，温度为３８～４０℃的条件下，发酵时间约为２０ｈ，终酒精含量达９％～１１％（Ｖ／Ｖ），残糖含量为１０％以下，理论转化率达９０％以上。并对新菌株的培养形态及生理生化特征等进行了研究。

降解苹果酸葡萄酒酵母融合株的构建及特性研究

以葡萄酒酵母和降解苹果酸裂殖酵母为亲本,通过正交实验优化了亲本原生质体的制备、再生以及融合的最佳条件,融合率为1.76×10-6,经筛选获得一株降解苹果酸能力强且发酵性能优良的融合菌株。融合株的体积较亲株大,为47.5489μm3,融合子的DNA含量约为二亲株之和,为7.36×10-8μg/cell,证明确为融合子;连续15次传代,融合子各项性能稳定。

应用原生质体融合技术改善双歧杆菌的耐氧性

利用原生质体融合技术将专性厌氧的短双歧杆菌和典型上面发酵的啤酒酵母进行原生质体细胞融合,通过研究两亲本原生质体的形成与再生,并进行跨界融合,成功初筛出兼具两亲本生物学性状、较稳定的融合子BSF1和BSF2,改善了双歧杆菌的耐氧性。

双亲灭活原生质体融合选育高性能酒精酵母菌的研究

为了选育高性能的酒精酵母菌,利用双亲灭活和PEG诱导,对酿酒酵母GGFS16和GJ2008单倍体细胞进行了原生质体融合。从42株融合子中筛选得到了2株融合菌株RH3和RH5,分别适合于木薯粉和甘蔗汁酒精发酵,且较好的保持了亲本的特性。其中RH3在耐酸能力上,RH5在酒精耐受能力上要优于亲本,RH3的遗传稳定性要优于RH5。

多优良性状工业化酿酒酵母的选育及其特性研究

通过双亲灭活的原生质体融合技术,将高效的酿酒酵母gxas02和絮凝酿酒酵母A3融合育种,得到的融合子R2-4能在短时间内产生高浓度酒精(发酵液中酒精含量为16.20%vol),发酵时间至少缩短8h,残糖0.076g/L,糖的利用接近理论值,耐酒精能力提高,有一定的工业应用潜力。

基因重组酵母在葡萄酒酿造中的应用前景

基因重组技术是菌种改良的重要手段。就基因重组酵母在葡萄酒酸度调解、增香、抗氧化及果胶分解方面的潜在应用价值及近年来相关研究成果进行了概述。

木糖发酵重组酿酒酵母研究进展(英文)

近年来针对木质纤维素类原料生物转化乙醇的研究引起了广泛关注。乙醇的高产依赖于木质纤维素水解液中六碳糖和五碳糖的共同发酵。但是,传统产乙醇酵母酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae既不能发酵木糖,也不能利用该五碳糖生长。因此,研究人员尝试各种方法构建重组酵母菌以提高木糖发酵能力。作者综述了木糖发酵重组酿酒酵母菌的研究进展,包括天然木糖发酵微生物、木糖代谢途径、S.cerevisiae的代谢工程、原生质体融合以及基因组改组技术,同时也对目前研究存在的问题及研究前景进行了讨论。

利用原生质体融合技术构建耐酸絮凝性产乙醇酿酒酵母

为获得具有多种优良性状的高效乙醇生产菌株,以絮凝性酿酒酵母RHZ-1及耐酸耐温酿酒酵母SEB2为亲本,通过紫外诱变获得营养缺陷型标记菌株,并利用原生质体融合技术选育耐酸絮凝性酿酒酵母。通过对融合子的筛选获得一株优秀的耐酸絮凝性酿酒酵母菌株RS-1;该菌株在30℃,pH2.2,15%YPD条件下发酵24 h,乙醇产生量为47.87 g/L,糖消耗速率和基于糖消耗的乙醇收率分别比亲本菌株RHZ-1提高了19.5%和9.8%。在35℃,p H2.2,15%YPD条件下发酵48 h,乙醇产生量为38 g/L,糖消耗速率和乙醇收率分别比亲本菌株RHZ-1提高了46.8%和21.6%。结果表明,获得的菌株可为提高燃料乙醇的生产效率奠定基础。

原生质体融合法构建蜂蜜桑椹酒酿造酵母的研究

以发酵性能优良的酿酒酵母Y1和风味优良的酿酒酵母HM为亲本菌株,通过对原生质体融合中各种技术条件进行研究,结果表明:含2.0mg/mlCuSO4的完全培养基为区别两亲本Y1(n)和HM(n)的选择性培养基;在最佳酶解条件下,亲本Y1(n)原生质体的形成率和再生率为94.2%和27.1%,亲本HM(n)原生质体的形成率和再生率为95.4%和22.2%;将Y1(n)原生质体在60℃水浴中灭活20min,可完全抑制其活性;对融合子酿造蜂蜜桑椹酒的感官品质和主要香气成分进行分析,采用模糊综合评判法,最终优选出了融合子F6和F10;并对融合子进行了细胞体积、DNA含量和抗药性能方面的鉴定。融合子F6和F10具有发酵能力强、风味优良的双亲优点,为适合酿造蜂蜜桑椹酒的酵母菌株。