Establishment of Somatic Cell Clones in Thesium chinense Turcz and Its in vitro Rooting Technique

[Objective] The aim of this study is to establish the rapid micro-propagation system in Thesium chinense Turcz.[Method]With stem fragments of wild Thesium chinense Turcz as explants,different culture media were designed to conduct induction culture,strengthening plantlet culture and in vitro rooting.[Result]The optimum medium for inducing clustered shoots was determined to be MS medium appended with 1.5 mg/L 6-BA,0.01 mg/L NAA and 0.3 mg/L 2,4-D;in addition,60 mg/kg ABT was suitable for rooting,by which the percentage of rooted plantlets reached 76.6%.[Conclusion]This study simplified the procedures of tissue culture in Thesium chinense Turcz and enhanced the proliferation rate,providing basis for artificial cultivation and resource protection of Thesium chinense Turcz.

不同颜色百蕊草种子生物学特性研究

为探究不同种皮颜色的百蕊草种子生物学特性,本研究以野生百蕊草种子为实验材料,开展种子表型特征、重量和大小、吸水率和含水量、生活力和萌发率、贮藏物质及生物酶活性等方面研究。结果表明,百蕊草黄色种子生物学特性指标表现较好,生活力94.51%、长2.69 mm、宽2.04 mm、厚2.03 mm,百粒重0.5406 g、五百粒重2.7072 g、裂口率45.90%。黄色种子可溶性蛋白含量最高为2.13 mg/g,显著(p<0.05)高于绿色种子;绿色种子可溶性糖和粗脂肪含量最高分别为8.75 mg/g和0.36 g/g;黄色种子POD酶、β-淀粉酶含量最高分别为204.33 U/g和11.83 U/g;黄绿色种子SOD含量为13201.83 U/g,显著(p<0.05)高于绿色种子;绿色种子的CAT含量最高为41.46 U/g。本研究初步明确了百蕊草种子的生物学特性,不同种皮颜色(黄色、黄绿色、绿色)的种子其生理指标差异较大,黄色和黄绿色种子萌发特性较好,可为以后百蕊草种子采收和制定质量标准提供依据。

过氧化氢和活性炭脱色对百蕊草多糖结构及应用特性影响的比较分析

采用过氧化氢氧化和活性炭吸附对百蕊草多糖进行脱色,得到HTP(过氧化氢脱色处理)和CTP(活性炭脱色处理)两种样品,采用现代仪器手段(X射线衍射仪、热重分析仪、激光粒度仪、流变仪)分析二者的物理特性,并比较CTP和HTP抑制肝癌细胞增殖活性,及其对κ-卡拉胶凝胶温度的影响。结果表明,CTP在X射线衍射图谱中表现出更加明显的晶体结构;相同添加量下,其表观黏度也高于HTP;热重曲线表明,HTP热分解程度高于CTP(HTP质量损失率59.33%,CTP质量损失率53.21%);CTP达到一定质量浓度(6~10 mg/mL)时,表现出抑制人肝癌细胞Hep G2增殖的活性,而HTP在实验质量浓度范围内(1~10 mg/m L)没有表现出抑制癌细胞增殖活性;同时,CTP对复配胶的温度滞后增加幅度大于HTP。因此,不同脱色方法会影响百蕊草多糖的结构及应用特性。

百蕊草扩繁和栽培利用研究进展

百蕊草(Thesium chinense Turc.)是我国重要的中草药植物,具有清热解毒功效,有“植物抗生素”之美誉。针对百蕊草半寄生性、种子深度休眠、植株生长期短、休眠期长及繁殖效率低等特点,本文综述了百蕊草寄生生物学特性、实生植株的生长、组织培养快速繁殖、栽培利用及相关基础研究进展,得出限制人工栽培种植百蕊草的因素主要有:气候、土壤类型、种子萌发和植株根部养分积累量等,并提出相关栽培方法,为深入研究百蕊草组培扩繁和栽培利用提供参考依据。

百蕊草体细胞胚的分化及其内源生长调节物质的变化特性

【目的】探明百蕊草体细胞胚发生过程中的组织细胞特征及内源生长调节物质的变化规律,为建立百蕊草体细胞胚组培苗快繁技术体系提供理论参考,并为丰富百蕊草细胞分化和器官形态建成等基础理论提供基础信息。【方法】采用显微观察方法对叶片外植体诱导的百蕊草愈伤组织及不同分化培养时期的体细胞胚进行组织细胞学观察,并检测不同分化时期的体细胞胚内源激素和类似物含量、抗氧化酶活性及可溶性蛋白质含量。【结果】胚性和非胚性愈伤组织的形态和细胞结构差异明显。体细胞胚分化经历的时期有多细胞原胚(PM)、球形胚(GE)、心形胚(HE)、鱼雷形胚(TE)和子叶胚(CE)等。内源激素及类似物中反式玉米素(tZT)含量与玉米素核苷(ZR)和吲哚-3-乙酸(IAA)含量呈显著正相关(r=0.421^(*),r=0.536^(*)),与脱落酸(ABA)含量呈极显著负相关(r=-0.688^(**)),tZT与IAA、ZR对百蕊草体细胞胚发生的作用相同。ABA含量与IAA和ZR含量呈显著负相关(r=-0.401^(*),r=-0.430^(*))。赤霉素3(GA_(3))含量与IAA含量呈弱正相关性(r=0.313),作用类似,均可促进细胞和器官的伸长。水杨酸(SA)含量变化呈波浪形变化,且最高值4.56 ng/g和最低值3.29 ng/g分别出现在PM和GE时期,说明与体细胞胚发生有关。抗氧化酶中过氧化物酶(POD)和过氧化氢酶(CAT)活性持续升高,并且保持在较高水平,尤其是在胚分化后期。超氧化物歧化酶(SOD)活性从PM至GE时期迅速上升并于GE出现峰值29.19 U/(g·min)之后下降,但其活性较POD和CAT低。可溶性蛋白(SP)含量由PM至GE时期稍有下降,于HE时期升高达最大值2.24 ng/g,之后缓慢降低。SP含量呈波动性变化。【结论】百蕊草体细胞胚的发育过程与合子胚的发育过程相似,并且内源激素及类似物异戊烯腺嘌呤(IP)、tZT、ZR、IAA、GA 3、ABA、SA及抗氧化酶(POD、CAT、SOD)和SP具有不同程度的影响和调控作用。

百蕊草野生苗与组培苗抑菌抗炎实验比较的研究

通过观察百蕊草野生苗和组培苗提取物的体外抑菌和对二甲苯致小鼠耳肿胀的急性炎症、大鼠棉球肉牙肿的慢性炎症和蛋清所诱发的大鼠足肿胀炎症的影响。研究百蕊草野生苗和组培苗的抗炎抑菌作用。结果表明:百蕊草野生苗与组培苗提取物在体外对大肠杆菌、金葡萄球菌、苏云金杆菌均有一定的抑制作用;两组百蕊草提取物对几种炎症均有明显的抑制作用。其抗炎抑菌作用具有等效性。

苯酚-硫酸法测定百蕊草中多糖的含量

目的 建立苯酚-硫酸法测定百蕊草多糖的含量。方法 采用60％乙醇除去黄酮类成分，再以水提醇沉的方法分离纯化百蕊草多糖，最后用苯酚-硫酸法测定百蕊草多糖的含量。结果 在0．01—0.07mg／mL内，浓度与吸收度呈良好线性。回归方程：A=15．644C-0．0053，r=0．9995，平均回收率为99．6％，RSD为1．92％（n=9）。百蕊草多糖的含量为15．9％，RSD为1．56％（n=5）。结论 方法简便，结果准确，为百蕊草多糖的进一步研究奠定良好的基础。

百蕊草总黄酮的含量测定

目的 建立百蕊草总黄酮中黄酮类成分含量测定的方法。方法 以百蕊草素Ⅰ为对照品 ,三氯化铝显色 ,选择波长 4 0 1nm ,分光光度法测定。结果 回归方程 y =- 6 4 5× 10 -3 +2 0 4x(r=0 9999) ,总黄酮含量为 6 1 8% ,RSD为 1 2 3% ,加样回收率为 10 1 3% ,RSD为 1 6 4 %。结论 测定方法简便易行 ,结果较满意 ,可作为百蕊草总黄酮质量控制的方法。

百蕊草中黄酮类化合物研究

目的:研究百蕊草抗炎有效部位中的黄酮类化合物。方法:采用多种层析分离方法进行分离纯化,通过HPLC-DAD对黄酮类化合物进行快速定性,并结合1H-NMR1、3C-NMR和ESI-MS等技术确定了化合物的结构。结果:分离并鉴定了5个黄酮类化合物分别为紫云英苷(Ⅰ)、芸香苷(Ⅱ)、木樨草素7-O-葡萄糖苷(Ⅲ)、5-甲基山奈酚(Ⅳ)、芹菜素-5-O-葡萄糖-鼠李糖苷(Ⅴ)。结论:其中化合物Ⅳ和Ⅴ为首次从该植物中分离得到。

白蕊草组织培养和快速繁殖的研究

通过对白蕊草组织培养的培养基种类、激素配比、添加物汁液、碳源的研究 ,得出适合白蕊草侧芽分化生长的最佳培养基为 MS+6 - BA2 .0 mg/ L +NAA0 .5 mg/ L +狗牙根汁液。诱导愈伤组织以 2 ,4 - D浓度在 0 .5 mg/ L -2 m g/ L之间最佳。碳源以蔗糖 ,浓度 3%最佳。生根实验表明 :较低浓度的生长素不利于生根 ,最佳生根培养基为MS+6 - BA 0 .5 mg/ L +NAA2 m g/ L +狗牙根汁液或 MS+6 - BA 0 .5 m g/ L +IBA2 m g/ L

百蕊草中总黄酮的提取工艺研究

用正交试验法优选百蕊草中总黄酮的提取工艺.以50 g原药材的总黄酮提取量为评价指标,选择提取用水量(倍)、提取时间(h)、提取次数(次)、醇沉浓度(%)为考察因素,采用正交试验法L9(34)确定百蕊草中总黄酮的最佳提取工艺,采用分光光度法对干浸膏中总黄酮的含量进行了测定,检测波长274 nm.最佳提取工艺条件为提取所用水量为15倍,提取次数为2次,回流提取时间为1 h,醇沉浓度为75%,芦丁在2.06-12.22μg/Ll浓度范围之内呈良好的线性关系.平均回收率为99.57%,RSD为0.83%.总黄酮正交提取工艺的研究,结果比较可靠,含量测定方法简便、准确,可用于百蕊草干浸膏中总黄酮的含量测定.

百蕊草野生苗与组培苗山萘素含量的研究

利用HPLC测定百蕊草野生苗和组培苗中山萘素含量,得知:不同地区百蕊草中山萘素的含量不同;同一地区的百蕊草采收后,放置的时间越长,山萘素含量越低;百蕊草组培苗中山萘素含量与野生苗中的相差不大。

百蕊草的化学成分研究

目的 研究百蕊草 Thesium chinense的化学成分。方法 采用反复柱色谱和制备性 HPL C百蕊草的醋酸乙酯萃取物中分离得到 5种化合物 ,通过理化和光谱分析鉴定其化学结构 ,并研究其抗氧化活性。结果 自百蕊草的醋酸乙酯萃取物中分离得到 5种黄酮苷类化合物 ,分别鉴定为 :山柰素 - 3- O-葡萄糖苷 (kaem pferol- 3- O- glucoside, ) ,柚皮素 - 4 - O-葡萄糖苷 (naringenin- 4 - O- glucoside, ) ,芹菜素 - 7- O-葡萄糖苷 (apigenin- 7- O- glucoside, ) ,木犀草素 - 7- O-葡萄糖苷 (luteolin- 7- O- glucoside, ) ,芸香苷 (rutinoside, )。抗氧化实验结果表明 ,化合物 的抗氧化作用最强 ,3个浓度中以 1× 10 - 4mol/ L 作用最明显。结论 化合物 具有较强的抗氧化作用。

百蕊草种子内源抑制物质的初步研究

目的:研究百蕊草种子内源抑制物质活性及其存在的部位。方法:将百蕊草种子不同浓度、不同浸提次数、不同部位的浸提液用白菜、小麦种子进行生物活性测定。结果与结论:百蕊草种子浸提液可显著抑制小麦和白菜种子的萌发及幼苗生长,且抑制物的活性随质量浓度的增大而增强。当质量浓度达到0.32 g.mL-1时,小麦种子萌发率为0。随浸提次数的增加,浸提液的抑制活性呈现先减弱,后增强的趋势。种壳与种仁都含有活性极强的抑制物质,后者强于前者。本研究首次证明了百蕊草种子中存在活性较强的内源抑制物。

大孔吸附树脂纯化百蕊草总黄酮工艺研究

目的:研究D101大孔吸附树脂分离纯化百蕊草总黄酮的工艺条件。方法:以总黄酮转移率和质量分数为指标,采用动态试验考察D101大孔吸附树脂对百蕊草总黄酮的分离纯化效果及影响因素。结果:D101大孔吸附树脂对百蕊草总黄酮的最佳纯化工艺条件为:上柱液总黄酮浓度为2.259 mg/mL,上柱液速度为1 BV/h,洗脱剂为70%乙醇,洗脱速度为1 BV/h,洗脱剂量为4 BV。总黄酮转移率为94.44%,质量分数为12.45%,此质量分数较百蕊草浸膏中总黄酮的含量(2.91%)提高了4倍多。结论:D101大孔吸附树脂对百蕊草总黄酮有显著的富集作用,且该纯化工艺简单稳定。

正交设计优选百蕊草的提取工艺

目的优选百蕊草的最佳提取工艺。方法采用正交试验法,以干膏得率及山奈酚含量为指标,考察溶剂浓度、溶剂用量、提取时间以及提取次数的影响,确定最佳提取工艺。结果最佳提取工艺参数为:加8倍量80%乙醇,提取3次,每次1h。结论优选的提取工艺切实可行,可以作为百蕊草的提取工艺。

抗菌中草药百蕊草的研究进展

百蕊草是一种有着较高医用价值的广谱抗菌中草药。阐述百蕊草的有效成分、药理作用、有效成分的提取工艺及组织快繁技术的可行性等方面的研究近况,提出运用现代中医药研究的新方法及新技术研究比较天然与人工繁殖的百蕊草组织在成分上的差异,清楚了解其抗菌消炎作用机制,以加快百蕊草有效成分生物合成的产业化发展。

百蕊草生物碱成分的分离与鉴定

目的研究百蕊草中的生物碱成分。方法应用多种色谱手段进行分离纯化,通过IR、MS、HR-MS、NMR、2D-NMR技术鉴定化合物结构。结果从百蕊草总生物碱部位分离得到3个化合物,分别鉴定为N-甲基金雀花碱(1)、白金雀儿碱(2)和槐果碱(3)。结论化合物N-甲基金雀花碱、白金雀儿碱、槐果碱均为首次从该植物中分离得到。

百蕊草对阿霉素肾病大鼠治疗作用的实验研究

目的观察百蕊草对大鼠肾病综合征的治疗作用。方法 SD大鼠40只,10只为空白对照组,余下分为模型组,低剂量组(1.0 g/(kg.d)),高剂量组(5.0 g/(kg.d)),每组10只,尾静脉注射阿霉素6.0 mg/kg建立肾病模型。连续灌胃给药5周,观察百蕊草对肾病大鼠尿量、24 h尿蛋白、血液生化指标、肾组织病理学等方面的影响。结果百蕊草能够减轻ADR大鼠肾病综合症烂尾、水肿等症状。与模型组相比,百蕊草治疗第2周以后,尿量显著增加(P<0.01),治疗3周后,24 h尿蛋白浓度下降(P<0.05),低剂量组尿蛋白浓度显著下降(P<0.01)。治疗5周后,低剂量组的血清总蛋白(TP)、血清蛋白(ALB)水平显著高于模型组(P<0.01),总胆固醇(TCH)、甘油三酯(TG)水平则显著降低(P<0.01)。结论百瑞草具有利尿、消除水肿、降低尿蛋白、降血脂、提高血清蛋白等作用,改善病理组织学变化,减轻肾脏损害,对肾病综合征大鼠具有良好的治疗效果。

百蕊草药材高效液相特征图谱的研究

目的建立百蕊草高效液相色谱(HPLC)特征图谱,为百蕊草药材的质量控制提供依据。方法采用ACQUITY UPLC BEH C18柱(2.1 mm×100 mm,1.7μm),以乙腈(A)—0.2%甲酸(B)为流动相,梯度洗脱,检测波长为265 nm,柱温35℃,流速0.4 m L·min-1,进样2.0μL。结果百蕊草药材HPLC特征图谱中主要成分得到有效分离,得到12个共有峰,选其中4个作为其特征峰。10批百蕊草药材的特征图谱与对照图谱相似度均在0.9以上,可用于百蕊草药材的定性鉴别。结论建立了百蕊草药材特征图谱,该方法简单,准确,重复性好,可用于百蕊草药材的质量控制。