脓毒症患者连续性血液净化治疗前后PCT Trx-1D-Lac表达及意义

目的:探讨脓毒症患者连续性血液净化(CBP)治疗前后血清降钙素原(PCT)、硫氧还蛋白-1(Trx-1)、D-乳酸(D-Lac)水平变化,分析其对CBP疗效的预测价值及临床意义。方法:选取2021年1月至2022年12月本院100例脓毒症患者作为观察组,另遵循1∶1配对原则,选取100例健康体检者作为对照组。统计两组血清PCT、Trx-1、D-Lac水平。观察组接受CBP治疗,依据治疗效果分为存活亚组、死亡亚组。比较不同亚组血清PCT、Trx-1、D-Lac水平、急性生理学与慢性健康状况Ⅱ评分(APACHEⅡ)及治疗前后其变化差值。Pearson分析各血清指标水平变化差值与APACHEⅡ评分相关性。采用受试者工作特征曲线(ROC)及曲线下面积(AUC)分析各血清指标水平变化差值对疗效的预测价值。采用卡普兰-迈耶(Kaplan-Meier)分析不同血清表达者28d内生存状况。结果:观察组血清PCT、Trx-1、D-Lac水平高于对照组(P<0.05);治疗1周后,死亡亚组血清PCT、Trx-1、D-Lac水平及APACHEⅡ评分高于存活亚组,且变化差值小于存活亚组(P<0.05);各血清指标水平变化差值与APACHEⅡ评分呈正相关(P<0.05);各血清指标水平变化差值联合预测CBP疗效的AUC分别大于单一指标预测、各血清指标联合预测(P<0.05);PCT、Trx-1、D-Lac水平变化差值高表达者死亡风险分别是低表达的4.828、3.600、2.318倍,且生存率高于低表达者(P<0.05)。结论:脓毒症患者CBP治疗前后血清PCT、Trx-1、D-Lac水平变化可反映病情严重程度,且与28d内生存情况密切相关,联合检测其变化差值对CBP疗效具有一定预测价值。

五味子乙素预处理对过氧化氢诱导的H9c2细胞焦亡及TXNIP/NLRP3/Caspase-1通路的影响

目的基于硫氧还蛋白互作蛋白(TXNIP)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)/半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)通路观察五味子乙素对过氧化氢(H 2O 2)诱导的大鼠H9c2心肌细胞氧化损伤及焦亡的影响,探讨五味子乙素的心肌保护作用机制。方法体外培养H9c2心肌细胞,实验设4组:正常组细胞常规孵育,五味子乙素组细胞加入40μmol/L五味子乙素孵育24 h,H 2O 2组细胞加入1000μmol/L的H 2O 2孵育30 min,H 2O 2+五味子乙素组细胞加入40μmol/L五味子乙素孵育24 h后再加入H 2O 2孵育30 min。CCK-8法检测细胞活力,DCFH-DA探针检测细胞中活性氧(ROS)含量,试剂盒检测细胞培养上清中乳酸脱氢酶(LDH)含量和细胞中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)含量,Western blot法检测细胞中TXNIP、硫氧还蛋白(Trx)、NLRP3、裂解的半胱氨酸蛋白酶-1(Cleaved Caspase-1)、消皮素D(GSDMD)-N蛋白表达情况,ELISA法检测细胞培养上清中白细胞介素-18(IL-18)、白细胞介素-1β(IL-1β)含量。结果与正常组比较,H 2O 2组细胞活力明显下降(P<0.05),细胞中ROS、MDA含量和TXNIP、NLRP3、Cleaved Caspase-1、GSDMD-N蛋白相对表达量及细胞培养上清中LDH、IL-1β、IL-18含量均明显升高(P均<0.05),细胞中SOD、GSH-Px含量和Trx蛋白相对表达量均明显降低(P均<0.05);与H 2O 2组比较,H 2O 2+五味子乙素组的细胞活力明显升高(P<0.05),细胞中ROS、MDA含量和TXNIP、NLRP3、Cleaved Caspase-1、GSDMD-N蛋白相对表达量及细胞培养上清中LDH、IL-1β、IL-18含量均明显降低(P均<0.05),细胞中SOD、GSH-Px含量和Trx蛋白相对表达量均明显升高(P均<0.05)。结论五味子乙素可能通过影响TXNIP/NLRP3/Caspase-1通路,从而减轻H 2O 2诱导的H9c2细胞氧化损伤,抑制心肌细胞焦亡。

电针干预脑缺血再灌注模型大鼠的神经保护机制

背景:前期研究表明,针刺督脉治疗缺血性脑卒中的疗效确切,可通过减轻细胞焦亡改善脑缺血再灌注损伤,但上游调控机制尚不完全明确。目的:分析电针对脑缺血再灌注损伤模型大鼠的脑保护作用机制。方法:采用随机数字表法将27只SD大鼠随机分为假手术组、模型组和电针组,每组9只。取模型组和电针组大鼠,采用改良线栓法建立脑缺血再灌注损伤模型,验证造模成功后,对电针组大鼠施予电针干预,选取百会、风府、大椎3个穴位,1次/d,20 min/次,连续干预7 d。电针干预结束后,利用神经功能缺损评分、爬杆实验评估大鼠行为学改变,TTC染色评估大鼠脑梗死体积,苏木精-伊红染色观察大鼠梗死侧脑皮质组织形态学变化,免疫荧光染色分析梗死侧脑皮质中Iba-1及活性氧表达,ELISA法检测梗死侧脑皮质组织中白细胞介素1β、白细胞介素6和肿瘤坏死因子α水平,RT-qPCR及Western blot检测大鼠梗死侧脑皮质组织中硫氧还蛋白互作蛋白、NLRP3、Caspase-1、白细胞介素1β的mRNA和蛋白表达,免疫共沉淀法分析大鼠梗死侧脑皮质组织中硫氧还蛋白互作蛋白与NLRP3的相互作用。结果与结论:①与假手术组比较,模型组大鼠神经功能缺损评分、爬杆实验评分及脑梗死体积均升高(P<0.05),Iba-1、活性氧免疫荧光表达增强(P<0.05),白细胞介素1β、白细胞介素6、肿瘤坏死因子α水平均升高(P<0.05),硫氧还蛋白互作蛋白、NLRP3、Caspase-1、白细胞介素1β的mRNA和蛋白表达均升高(P<0.05),苏木精-伊红染色显示模型组大鼠梗死侧脑皮质神经元变性坏死,细胞核出现碎裂溶解及细胞空泡现象;②与模型组比较,电针组大鼠神经功能缺损评分、爬杆实验评分及脑梗死体积均降低(P<0.05),Iba-1、活性氧免疫荧光表达减弱(P<0.05),白细胞介素1β、白细胞介素6、肿瘤坏死因子α水平均降低(P<0.05),硫氧还蛋白互作蛋白、NLRP3、Caspase-1、白细胞介素1β的mRNA和蛋白表达均降低(P<0.05),苏木精-伊红染色显示电针组大鼠梗死侧脑皮质神经元病理学损伤明显减轻,细胞坏死及空泡现象明显减少;③免疫共沉淀检测显示,模型组大鼠梗死侧脑皮质组织中硫氧还蛋白互作蛋白与NLRP3存在相互作用;④结果表明,电针干预可能通过抑制活性氧/硫氧还蛋白互作蛋白/NLRP3细胞焦亡信号通路及小胶质细胞的活化来减少炎症因子释放,进而发挥抗脑缺血再灌注损伤作用。

动态心电图与血清FOXO3、TXNIP蛋白水平对慢性心力衰竭的诊断价值

目的 探讨叉头转录蛋白O亚族3(FOXO3)、硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)在慢性心力衰竭患者血清中的表达及联合动态心电图检查对慢性心力衰竭的诊断价值。方法 前瞻性选取2022年6月至2023年1月期间于湖北省鄂州市中心医院收治的68例慢性心力衰竭患者作为心力衰竭组,另选取68例同期门诊健康体检者为对照组。比较两组血清FOXO3,TXNIP蛋白水平;ROC曲线分析血清FOXO3、TXNIP对慢性心力衰竭的诊断效能;四表格法分析动态心电图联合血清FOXO3,TXNIP对慢性心力衰竭的诊断效能。结果 心力衰竭组血清FOXO3蛋白表达水平为(1.28±0.34)ng/ml低于对照组(1.73±0.36)ng/ml(P<0.05),TXNIP蛋白表达水平为(126.42±12.98)pg/ml高于对照组(108.86±12.73)pg/ml,差异有统计学意义(P<0.05)。动态心电图联合血清FOXO3,TXNIP诊断慢性心力衰竭的准确率为94.85%,敏感性为97.06%,特异性为92.65%;三项联合诊断的准确率和敏感性均高于单独诊断(P<0.05)。结论 慢性心力衰竭患者血清FOXO3表达水平降低,TXNIP表达水平升高,动态心电图联合血清FOXO3,TXNIP蛋白水平对慢性心力衰竭具有较高的诊断价值。

T2DM患者外周血氧化应激变化及其与合并NAFLD的关系研究

目的检测2型糖尿病(T2DM)患者外周血氧化应激变化,并分析其与合并非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的关系。方法选取本单位2016年1月至2017年12月收治的133例T2DM患者,随访5年,统计NAFLD发生率。根据是否发生NAFLD记为发生组(n=98)和未发生组(n=35),比较2组患者一般资料和外周血超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、硫氧还蛋白互作蛋白(TXNIP)水平;采用Logistic回归分析探讨T2DM患者并发NAFLD的危险因素;绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析外周血SOD、MDA、GSH-PX、TXNIP水平单独与联合对T2DM患者并发NAFLD的预测价值。结果T2DM患者中NAFLD发生率为73.68%(98/133);NAFLD发生患者外周血MDA、TXNIP水平均高于NAFLD未发生患者(P<0.05),SOD、GSH-PX水平低于NAFLD未发生患者(P<0.05);病程>5年,未进行胰岛素降糖,空腹血糖,外周血SOD、MDA、GSH-PX、TXNIP水平均是T2DM并发NAFLD的影响因素(OR=3.062、3.725、4.350、0.649、4.328、0.551、4.697,P<0.05);外周血SOD、MDA、GSH-PX、TXNIP水平联合预测T2DM并发NAFLD的灵敏度均高于单独预测(P<0.01),AUC均高于单独预测(P<0.05),特异度均与单独预测差异无统计学意义(P>0.05)。结论外周血氧化应激水平升高可增加T2DM并发NAFLD的风险,外周血SOD、MDA、GSH-PX、TXNIP水平联合预测并发NAFLD的效能高。

原发性喉癌患者血清TXNIP、BIRC5水平在临床分期判断及疗效监测中的价值

目的 探讨原发性喉癌(PLC)患者血清硫氧还蛋白结合蛋白(TXNIP),凋亡抑制因子5(BIRC5)水平在临床分期判断及疗效监测中的价值。方法 选取本院2020年6月至2023年1月期间收治的68例PLC患者为PLC组,将80例良性病变患者设为良性肿瘤组,患者治疗6个月后根据RECIST实体瘤疗效评价标准将PLC组患者分为治疗有效组(50例)和治疗无效组(18例)。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组血清TXNIP、BIRC5水平;TXNIP、BIRC5对PLC分期诊断效能及PLC患者疗效预测效能采用受试者工作特征(ROC)曲线进行分析。结果 PLC组和良性肿瘤组患者血清TXNIP、BIRC5水平比较,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗有效组血清TXNIP水平[(99.52±14.12)pg/mL]显著高于治疗无效组[(85.19±15.17)pg/mL],差异有统计学意义(t=3.621,P<0.05),BIRC5水平[(15.26±3.65)pg/mL]显著低于治疗无效组[(19.13±3.74)pg/mL],差异有统计学意义(t=3.833,P<0.05)。早期PLC患者血清TXNIP水平[(101.39±12.85)pg/mL]显著高于晚期患者[(91.27±13.36)pg/mL],差异有统计学意义(t=3.154,P<0.05),BIRC5水平[(14.43±3.07)pg/mL]显著低于晚期患者(17.74±3.04),差异有统计学意义(t=4.439,P<0.05)。血清TXNIP、BIRC5诊断PLC分期的线下面积(AUC)分别为0.829(95%CI:0.718~0.909)、0.795(95%CI:0.679~0.883),灵敏度分别为81.58%、89.47%,且TXNIP、BIRC5联合诊断PLC分期的AUC为0.899(95%CI:0.802~0.959),灵敏度为94.74%;血清TXNIP、BIRC5预测PLC患者疗效的AUC分别为0.818(95%CI:0.705~0.901)、0.761(95%CI:0.642~0.856),二者联合AUC为0.921(95%CI:0.830~0.973),具有更高的预测效能(P<0.05)。结论 TXNIP在PLC患者血清中呈低表达,BIRC5PLC患者血清中呈高表达,TXNIP和BIRC5二者联合检测对PLC分期的诊断和PLC患者疗效的预测具有一定效能。

日本血吸虫thioredoxin基因的克隆和表达

目的结合分子生物学和生物信息学方法筛选鉴定日本血吸虫新基因。方法从日本血吸虫(Schistosomajaponicum,大陆株)成虫cDNA文库中获取表达序列标签(expressedsequencetag,EST),用电子拼接的方法延伸序列,用NCBI提供的BLASTx程序和Genbank数据库进行同源性分析以筛选基因;设计特异性引物从日本血吸虫成虫mRNA中扩增筛选基因并预测和分析;扩增产物克隆到原核表达载体并表达。结果筛选出日本血吸虫Thioredoxin全长基因并对其进行了序列分析,克隆全长cDNA至PET原核载体并表达成功。结论结合EST、电子延伸和传统的分子生物学方法是高效筛选S.japonicum功能基因的有效策略。

基于TXNIP/NLRP3炎性小体通路研究芪归通络颗粒对2型糖尿病大鼠坐骨神经的保护作用

目的:基于硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白(NLRP)3炎性小体通路研究芪归通络颗粒对2型糖尿病大鼠坐骨神经的保护作用及潜在机制。方法:90只雄性SD大鼠随机选取10只为空白组,其余大鼠采取高脂饲料喂养联合STZ腹腔注射方法构建2型糖尿病周围神经病变大鼠模型,将造模成功大鼠随机分为模型组、硫辛酸组(60 mg/kg)、芪归通络颗粒高、中、低剂量组,剂量分别为9、4.5、2.25 g/(kg·d)。各给药组给予相应剂量药物灌胃,持续12周。实验过程中观察大鼠一般状态及血糖水平;处死前检测大鼠机械痛阈值(PWMT)和坐骨神经运动传导速度(MNCV);通过酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清炎症因子白介素(IL)-1β、IL-18、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、环氧合酶-2(COX-2)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)水平,苏木素-伊红(HE)染色观察坐骨神经形态,Western blot检测坐骨神经组织TXNIP/NLRP3通路相关蛋白表达水平。结果:与空白组相比,模型组大鼠血糖、IL-1β、IL-18、IL-6、TNF-α、COX-2、iNOS明显升高(P<0.05),PWMT和MNCV明显下降(P<0.05),坐骨神经TXNIP、NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β蛋白相对表达显著上调(P<0.05)。与模型组比较,用药治疗组的PWMT和MNCV明显增加(P<0.05),TXNIP、NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β蛋白相对表达显著下调(P<0.05),血清IL-1β、IL-18、IL-6、TNF-α、COX-2、iNOS水平下降(P<0.05),坐骨神经病理形态明显改善。结论:芪归通络颗粒可增强2型糖尿病大鼠的坐骨神经功能,改善糖尿病周围神经病变,其潜在作用机制可能与抑制TXNIP/NLRP3炎性小体通路的激活有关。

血清OSM、Trx-1及HBP与脓毒症严重程度相关性及对临床转归的预测研究

目的分析血清抑癌蛋白M(OSM)、硫氧还蛋白-1(Trx-1)及肝素结合蛋白(HBP)与脓毒症严重程度相关性及对临床转归的预测。方法回顾性选取2021年1月至2023年6月乐山市市中区人民医院收治的120例脓毒症患者作为研究对象,根据Sepsis-3.0脓毒症诊断标准,分为脓毒症组(n=82)和脓毒症休克组(n=38)。检测所有患者血清OSM、Trx-1及HBP水平,并进行急性生理学和慢性健康状况评价Ⅱ(APACHEⅡ),比较2组患者及不同APACHEⅡ评分分层组间血清OSM、Trx-1及HBP水平,使用Spearman相关性分析对血清OSM、Trx-1及HBP水平与APACHEⅡ评分的相关性进行分析;根据患者的临床转归,将患者分为死亡组和存活组,比较两组血清OSM、Trx-1及HBP水平,使用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清OSM、Trx-1及HBP对脓毒症临床转归的预测效能。结果脓毒症休克组血清OSM及HBP水平分别为(503.68±123.54)pg/mL、(145.53±36.71)ng/mL,均高于脓毒症组[(300.12±56.26)pg/mL、(45.21±10.29)ng/mL],Trx-1水平为(3.23±1.01)ng/mL,低于脓毒症组[(6.89±2.57)ng/mL],差异均有统计学意义(P<0.05)。随着脓毒症患者APACHEⅡ评分升高,血清OSM及HBP水平随之升高,Trx-1水平随之降低;血清OSM、Trx-1及HBP水平在APACHEⅡ评分各分层组间比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。经Spearman相关性分析,脓毒症患者APACHEⅡ评分与血清OSM及HBP水平呈正相关(P<0.05),与Trx-1水平呈负相关(P<0.05)。死亡组患者血清OSM及HBP水平分别为(600.23±156.86)pg/mL、(168.42±52.31)ng/mL,均高于存活组[(180.16±28.79)pg/mL、(25.09±7.15)ng/mL],Trx-1水平为(1.89±0.52)ng/mL,低于存活组[(10.45±3.84)ng/mL],差异均有统计学意义(P<0.05)。经ROC曲线分析,血清OSM、Trx-1联合HBP预测脓毒症患者28 d死亡的曲线下面积为0.921,大于单项指标OSM的0.630、Trx-1的0.686和HBP的0.606(P<0.05)。结论血清OSM、Trx-1及HBP与脓毒症严重程度密切相关,三者联合可以提高对患者临床转归的预测效能,值得进一步研究应用。

新孢子虫硫氧还蛋白的生物信息学分析及其原核表达的鉴定

为研究新孢子虫硫氧还蛋白(Trx)的生物学特性,本研究利用PCR扩增犬新孢子虫Trx(NcTrx)基因的编码区序列,构建pET-32a(+)-NcTrx原核表达载体,经双酶切与测序鉴定正确后,利用系列生物信息学软件分析NcTrx基因及其编码氨基酸序列的生物信息学特征,并对其蛋白互作网络中排名前100的蛋白进行GO功能和KEGG信号通路的富集分析。重组质粒中NcTrx基因的测序结果显示,NcTrx基因片段为1 287 bp,编码428个氨基酸;该蛋白含1个信号肽,1个跨膜区,主要位于内质网上;NcTrx蛋白的二、三级结构主要由α-螺旋、无规则卷曲组成,有12个B细胞抗原表位;该蛋白属于硫氧还蛋白家族,存在典型的氧化还原基序“-CXXC-”,有38个磷酸化位点、10个O-糖基化位点;与NcTrx蛋白互作最强的为酪氨酸激酶样蛋白,二者通过氢键和静电作用实现相互对接;GO功能及KEGG信号通路的显著性富集分析结果显示,NcTrx与其互作的蛋白主要参与蛋白质转运、蛋白质二硫键异构酶活性等生物学过程,与内质网蛋白质加工、硫代谢等信号通路密切相关。将pET-32a(+)-NcTrx转化BL21(DE3)感受态细胞,并经IPTG诱导表达后采用镍亲和层析法纯化重组NcTrx蛋白(rNcTrx),经SDS-PAGE检测该蛋白的表达及纯化效果,采用Bradford法测定纯化蛋白的浓度。采用western blot鉴定rNcTrx的反应原性。SDS-PAGE结果显示,rNcTrx分子量约66 ku,主要以包涵体的形式表达,且纯化效果较好,浓度为0.8 mg/mL。Western blot检测结果显示,纯化的rNcTrx能够与鼠His MAb、新孢子虫感染的小鼠血清发生特异性反应,在66 ku处出现特异性条带。本研究首次经PCR扩增NcTrx基因,对NcTrx基因及其蛋白进行了生物信息学分析,并经原核系统表达及鉴定了NcTrx蛋白,为后续深入探究该蛋白的生物学功能提供参考依据。

抗细菌硫氧化还原蛋白Thioredoxin单克隆抗体的制备、鉴定与初步应用

硫氧化还原蛋白Ｔｈｉｏｒｅｄｏｘｉｎ(Ｔｒｘ)是一类存在于细菌、植物及动物等多种生物体内的耐热蛋白[1],含有保守的ＷＣＧＰＣ序列。还原态的Ｔｒｘ具有很强的蛋白二硫键氧化还原酶活性,作为核酸还原酶的供氢体在ＤＮＡ的合成与复制中起重要作用。大肠杆菌Ｔｒｘ蛋白...

有氧运动上调硫氧还蛋白系统抑制衰老大鼠心肌细胞凋亡

背景:研究表明,心肌细胞凋亡与心脏功能减退及心脏衰老过程密切相关,适宜的运动可以改变心力衰竭患者的心泵功能以及减轻衰老引起的心肌细胞凋亡、肥大和纤维化损伤。目的:探究长期有氧运动对衰老大鼠心肌细胞凋亡及硫氧还蛋白系统的影响。方法:选取雄性SD大鼠36只,按照鼠龄分为青年组(3月龄)、中年组(9月龄)、老年组(18月龄),每组12只;每组又分为安静、运动2个亚组,每组6只,安静组常规饲养,运动组进行有氧运动训练(45 min/d,5 d/周,训练10周)。末次训练后24 h,采用ELISA法检测大鼠血清肌钙蛋白Ⅰ和血清肌酸激酶同工酶MB水平,TUNEL染色检测心肌细胞凋亡,Western Blot检测大鼠心肌组织中Bax、Bcl-2、Caspase 3、硫氧还蛋白1、硫氧还蛋白2、硫氧还蛋白还原酶1、硫氧还蛋白还原酶2、硫氧还蛋白相互作用蛋白、凋亡信号调节激酶1、P38丝裂原活化激酶的蛋白表达。结果与结论:(1)老年安静组大鼠血清肌钙蛋白Ⅰ和肌酸激酶同工酶MB水平高于青年安静组、中年安静组、老年运动组(P <0.01),老年运动组大鼠血清肌钙蛋白Ⅰ和肌酸激酶同工酶MB水平高于青年运动组、中年运动组(P <0.01);(2)无论是安静状态还是运动训练后,随着鼠龄的增加,大鼠凋亡心肌细胞数量及Bax、Caspase 3蛋白表达逐渐升高,Bcl-2蛋白表达逐渐降低;与同龄段安静组相比,运动组大鼠凋亡心肌细胞数量及Bax、Caspase 3蛋白表达均不同程度降低,Bcl-2蛋白表达均不同程度升高;(3)老年安静组大鼠心肌硫氧还蛋白1、硫氧还蛋白2、硫氧还蛋白还原酶1、硫氧还蛋白还原酶2蛋白表达低于青年安静组、中年安静组、老年运动组(P <0.05,P <0.01);老年运动组大鼠心肌硫氧还蛋白1、硫氧还蛋白2、硫氧还蛋白还原酶2蛋白表达低于青年运动组(P <0.05,P <0.01),硫氧还蛋白还原酶1、硫氧还蛋白还原酶2蛋白表达低于中年运动组(P <0.01);(4)老年安静组大鼠心肌硫氧还蛋白相互作用蛋白、凋亡信号调节激酶1、P38丝裂原活化激酶蛋白表达高于青年安静组、中年安静组、老年运动组(P <0.01),老年运动组大鼠心肌硫氧还蛋白相互作用蛋白、凋亡信号调节激酶1、P38丝裂原活化激酶蛋白表达高于青年运动组、中年运动组(P <0.01);(5)结果表明,有氧运动可能通过下调硫氧还蛋白相互作用蛋白表达来增强硫氧还蛋白的表达,下调凋亡信号调节激酶1及P38丝裂原活化激酶蛋白的表达,从而减轻衰老大鼠心肌细胞的凋亡。

橡胶树硫氧还蛋白基因HbTRXo2克隆、表达及功能分析

硫氧还蛋白(thioredoxin,TRX)作为氧化还原调节蛋白在植物抵御非生物逆境胁迫中发挥重要作用。本研究采用RT-PCR从橡胶树(Heveabrasiliensis)中克隆了硫氧还蛋白基因HbTRXo2,该基因编码区长594bp,编码197个氨基酸。预测HbTRXo2蛋白的分子量为21.90 kDa,理论等电点为7.59。蛋白保守结构域和系统进化分析结果显示,HbTRXo2含有TRX保守结构域,与其他植物o型硫氧还蛋白聚在一起,表明该蛋白属于o型硫氧还蛋白。实时荧光定量PCR分析表明,HbTRXo2基因在橡胶树根、树皮、胶乳、成熟叶、衰老叶、新梢、雌花和雄花组织中均表达,其中在胶乳中的表达量显著高于其他组织。同健康橡胶树相比,割面干涸橡胶树树皮和胶乳中HbTRXo2的表达量显著降低。在低温、聚乙二醇(PEG)诱导的干旱以及过氧化氢(H_(2)O_(2))和甲基紫精(MV)诱导的氧化胁迫处理下,HbTRXo2基因的表达显著上调,表明该基因参与了橡胶树对非生物胁迫的应答。为了研究HbTRXo2在抗逆中的功能,本研究构建其酵母表达载体,并转入酿酒酵母INVSc1菌株中,获得重组酵母INVSc1(pYES2-HbTRXo2)。比较重组酵母INVSc1(pYES2-HbTRXo2)和转空载体对照酵母INVSc1(pYES2)在H_(2)O_(2)、PEG和低温胁迫处理后的存活差异。结果显示,重组酵母INVSc1(pYES2-HbTRXo2)在PEG和H_(2)O_(2)处理后的存活率明显高于对照酵母,而在低温胁迫处理后的存活率明显低于对照酵母,表明转HbTRXo2基因提高了重组酵母对干旱和氧化胁迫的抗性,但降低了对低温胁迫的抗性。以上研究结果证明,HbTRXo2在橡胶树产排胶和抗逆过程中起着重要作用。本研究为进一步解析HbTRXo2在橡胶树中的生物学功能提供重要的参考依据。

精胺氧化酶靶向调控硫氧还蛋白还原酶1促进结肠癌恶性进展

目的探讨精胺氧化酶(spermine oxidase,SMOX)靶向调控硫氧还蛋白还原酶1(thioredoxin reductase 1,TR1)对结肠癌恶性进展的影响。方法收集2018年9月至2019年6月就诊于南京市第一医院的30例结肠癌患者的结肠癌组织及其癌旁组织。采用免疫组织化学染色检测组织中的SMOX表达。采用Western blot实验检测结肠癌细胞株(HCT116、SW480、DLD-1、SW620、Caco-2、HCT-15、T84和LS123)和正常结肠细胞株NCM460的SMOX表达。利用基因表达谱互作分析(Gene Expression Profiling Interactive Analysis,GEPIA)网站查询SMOX在结肠癌组织与癌旁组织中的表达情况和SMOX表达水平与患者总生存的关系。采用Western blot实验检测上述细胞和组织中代谢产物亚精胺合成酶的水平。利用2',7'-二氯二氢荧光素二乙酸酯(2',7'-dichlorodihydrofluorescein diacetate,DCFH-DA)结合流式细胞术和组织免疫荧光实验分别检测结肠细胞和组织中代谢副产物活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平。选取SMOX表达水平最高的结肠癌细胞株HCT116和SW480为实验对象,构建慢病毒载体,用PLKO.1-puro-shCtrl、PLKO.1-puro-shSMOX、PLKO.1-puro-shSMOX+pcDNA3.1和PLKO.1-puro-shSMOX+pcDNA3.1-TR1分别转染细胞,分别为shCtrl组、shSMOX组、shSMOX+pcDNA3.1组和shSMOX+TR1组。Western blot实验检测HCT116和SW480细胞shCtrl组和shSMOX组SMOX与TR1的表达情况,以及HCT116细胞shSMOX+pcDNA3.1组和shSMOX+TR1组的TR1表达水平。利用细胞计数试剂盒(Cell Counting Kit-8,CCK-8)检测细胞增殖活力。碘化丙啶(propidium iodide,PI)单染结合流式细胞术检测肿瘤细胞周期变化。PI/异硫氰酸荧光素-膜连蛋白(PI/fluorescein isothiocyanate-Annexin V,PI/FITC-Annexin V)双染结合流式细胞术检测细胞凋亡/坏死情况。Transwell体外侵袭实验分析细胞侵袭能力。shCtrl组、shSMOX组、shSMOX+pcDNA3.1组和shSMOX+TR1组的HCT116细胞稀释至浓度为1×107个/mL的细胞悬液分别向裸鼠右侧腋窝皮下注射0.2 mL细胞悬液,建立裸鼠结肠癌移植瘤模型。4周后处死裸鼠,分离组织,剥取肿瘤称重。运用免疫组织化学染色检测裸鼠结肠肿瘤组织中Ki-67阳性细胞数。结果SMOX在8种结肠癌细胞株和结肠癌组织中的表达水平均高于正常结肠细胞株和癌旁组织,且与不良预后有关(均P<0.05)。与正常结肠细胞和癌旁组织比较,8种结肠癌细胞和结肠癌组织中的代谢产物亚精胺合成酶和ROS水平随SMOX的高表达同步升高(均P<0.05)。与shCtrl组比较,shSMOX组G_(0)/G_(1)期细胞数目增多,PI/Annexin V双阳性细胞数目增加,细胞增殖活性降低,侵袭数量减少,SMOX和TR1表达水平降低(均P<0.05)。与shSMOX组和shSMOX+pcDNA3.1组比较,shSMOX+TR1组TR1表达水平升高,S期细胞数目增多,PI/Annexin V双阳性细胞数目减少,细胞增殖活性升高(均P<0.05)。裸鼠结肠癌移植瘤模型显示,注射后14 d,与shCtrl组比较,shSMOX组和shSMOX+pcDNA3.1组肿瘤体积和重量均降低,结肠肿瘤组织中Ki-67阳性细胞数减少,而shSMOX+TR1组肿瘤体积、重量和结肠肿瘤组织中Ki-67阳性细胞数则较shSMOX+pcDNA3.1组增加(均P<0.05)。结论SMOX在结肠癌细胞和组织中表达上调,可能通过靶向提高TR1的表达促进细胞周期运转,抑制细胞凋亡,促进细胞增殖和侵袭能力及肿瘤生长,进而促进结肠癌恶性进展。

苯乙酰胺衍生物的合成及其对棕榈酸诱导的胰岛细胞损伤的保护作用

目的以不同取代的苯乙酸为原料设计合成一系列苯乙酰胺衍生物,并考察化合物对棕榈酸(palmitate acid,PA)诱导的胰岛细胞损伤的保护作用。方法培养Min6细胞,分为B空白对照组、PA处理组、PA+化合物组,采用CCK-8法检测细胞活性;通过Western blot观察细胞TXNIP、NLRP3的蛋白表达;MDA、SOD试剂盒检测MDA含量以及SOD活性;胰岛素试剂盒检测Min6细胞胰岛素的分泌量。结果共设计合成10个苯乙酰胺衍生物,结构经1H NMR、ESI-MS确证;药理活性研究表明,大多数化合物对胰岛细胞有保护作用,化合物LY-6和LY-8相较PA模型组(细胞活力为61.4%)保护作用较强,其中LY-6细胞活力最高,达到104.9%;与PA组相比,LY-6和LY-8组TXNIP和NLRP3蛋白表达降低,MDA含量减少,SOD活性增加,胰岛素分泌量增加。结论LY-6和LY-8可通过抑制TXNIP的表达,减少对NLRP3炎性小体的激活,减少MDA的产生、增加SOD的活性,最终减少胰岛β细胞的凋亡,增加胰岛素的分泌量。故化合物LY-6可以作为潜在的抗糖尿病新化学实体。

外阴硬化性苔藓病变中的抗氧化酶变化

目的:外阴硬化性苔藓(vulvar lichen sclerosus,VLS)是一种外阴皮肤瘙痒、变白的自身免疫性慢性炎症性疾病。目前VLS的发病机制尚不清楚,有研究表明其可能与氧化应激有关。本研究旨在通过探讨锰超氧化物歧化酶(Mn superoxide dismutase,MnSOD)、细胞质内过氧化物酶2(peroxidase 2,PRDX2)、硫氧还蛋白1(thioredoxin 1,TRX1)3种抗氧化酶在VLS中的表达情况及其与VLS发生和发展的关系。方法:选取中国医科大学附属第一医院妇科门诊手术切除的VLS组织标本40例(其中早期20例,进展期20例),外阴整形术切除的正常外阴皮肤组织标本20例。采用免疫组织化学SP方法检测MnSOD、PRDX2和TRX1蛋白在外阴皮肤组织中的表达情况,并在高倍显微镜下测定平均光密度值。采用Pearson相关分析计算VLS组织中MnSOD、PRDX2、TRX1三者之间的相关性。结果:VLS组织中MnSOD的平均光密度值低于正常外阴皮肤组织(P<0.05),早期VLS组织中MnSOD平均光密度值高于进展期VLS组织(P<0.05);VLS组织中PRDX2的平均光密度值高于正常外阴皮肤组织(P<0.05),早期VLS组织中PRDX2的平均光密度值低于进展期VLS组织(P<0.05);VLS组织中TRX1的平均光密度值高于正常外阴皮肤组织(P<0.05),早期VLS组织中TRX1平均光密度值低于进展期VLS组织(P<0.05)。Pearson相关分析结果显示:MnSOD和PRDX2(r=-0.615)、MnSOD和TRX1(r=-0.881)的表达均呈负相关(均P<0.05);PRDX2和TRX1表达呈正相关(r=0.670,P<0.05)。结论:在VLS病变进展中,抗氧化酶MnSOD表达减少,PRDX2和TRX1表达增加。

Gly33的缺失和突变对hTrx-1抗氧化活性的影响

为探讨人硫氧还蛋白hTrx-1活性位点保守序列中Gly33残基在还原氧化性蛋白过程中是否必不可少,通过合成突变基因对hTrx-1的Gly33残基进行缺失和替换(G→A)。合成的突变基因随后在原核细胞中表达并进一步纯化及检测抗氧化活性,结果表明,无论是Gly33残基的缺失还是突变为Ala,突变的hTrx-1均能在原核细胞中高效表达,暗示2种突变型hTrx-1均能形成“Trx折叠”结构。抗氧化活性检测表明Gly33残基缺失的情况下,其抗氧化能力有所下降,当Gly33突变为Ala时,其抗氧化能力大幅下降到接近失去抗氧化能力。推测Trx-1活性中心保守氨基酸残基的改变影响了活性中心区域的几何构象,从而导致底物蛋白难以从空间上靠近。参与形成二硫键巯基的含量检测结果表明,突变型hTrx-1中形成二硫键巯基的含量明显低于野生型hTrx-1中形成二硫键巯基的含量,推测突变型hTrx-1的Cys32与Cys35形成二硫键的能力受到影响。

血清TXNIP、NRP1水平对脓毒症患者发生急性肾损伤的预测价值

目的:探讨硫氧还蛋白互作蛋白(TXNIP)、神经纤毛蛋白-1(NRP1)对脓毒症患者发生急性肾损伤(AKI)的预测价值。方法:选取2019年4月-2021年4月在本院住院的160例脓毒症患者为研究对象,以患者7 d内是否发生AKI将患者分为AKI组56例和非AKI组104例,再对AKI患者进行分组,分为AKIⅠ期、AKIⅡ期、AKIⅢ期。酶联免疫吸附法血清TXNIP、NRP1水平;多因素Logistic回归分析脓毒症患者发生AKI的可能影响因素;受试者工作特征(ROC)曲线评估血清TXNIP、NRP1水平检测对脓毒症患者发生AKI的预测价值。结果:AKI组SOFA评分、Scr水平、APACHEⅡ评分及PCT水平均显著高于非AKI组,eGFR水平显著低于非AKI组(P<0.05)。AKI组TXNIP水平显著高于非AKI组,且随AKI分期增加而显著增加(P<0.05);NRP1水平显著低于非AKI组,且随AKI分期增加而显著降低(P<0.05)。AKI患者血清TXNIP水平与SOFA评分、Scr、APACHEⅡ评分均呈正相关(r=0.342、0.361、0.335,P<0.05),与eGFR呈负相关(r=-0.495,P<0.05);血清NRP1水平与SOFA评分、Scr、APACHEⅡ评分均呈负相关(r=-0.310、-0.327、-0.306,P<0.05),与eGFR呈正相关(r=0.561,P<0.05)。Logistic回归分析显示,高水平TXNIP、Scr、SOFA评分是脓毒症患者并发AKI的危险因素(P<0.05),高水平NRP1是脓毒症患者并发AKI的保护因素(P<0.05)。ROC曲线显示,TXNIP、NRP1预测AKI的AUC为0.737、0.720,二者联合预测AKI的AUC为0.929,显著高于二者单独预测(Z_(联合VSTXNIP)=4.642、P=0.004;Z联合VS NRP1=4.929、P=0.025),其敏感度、特异度分别为90.79%、85.29%。结论:脓毒症并发AKI患者血清中TXNIP高表达,NRP1低表达,与AKI严重程度有关,且二者联合对脓毒症并发AKI具有一定的预测价值。

硫氧还蛋白在胰腺癌中的表达及临床意义

目的:探究硫氧还蛋白(TXN)在胰腺癌中的表达及对胰腺癌细胞增殖、侵袭、迁移、凋亡的影响。方法:通过收集泛癌和TCGA胰腺癌转录组和临床数据,分析TXN家族基因的表达水平。通过荧光定量PCR(RT-qPCR)技术、蛋白免疫印迹法(Western blot)检测TXN在癌组织与癌旁组织中及不同细胞系的表达水平。通过使用小干扰RNA(siRNA)抑制胰腺癌Panc-1、BxPC-3细胞中TXN基因的表达,并与未抑制TXN基因表达的Panc-1、BxPC-3细胞进行对照实验,进而探究TXN对这2种细胞的增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响。使用转录组数据和生存结果资料,以TXN表达中位值分为两组,绘制TXN高低表达两组的生存曲线图。结果:在胰腺癌组织和细胞中,TXN的表达水平明显高于癌旁组织和正常细胞(P<0.05)。抑制胰腺癌细胞的TXN的表达水平后,低表达的TXN水平的胰腺癌细胞增殖率、侵袭细胞数量、愈合率低于对照组的胰腺癌细胞,其凋亡率较正常胰腺癌细胞明显升高(P<0.05)。TXN在胰腺癌患者肿瘤内表达水平越高,其生存时间越短(P<0.05)。结论:TXN能增强胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力,并减弱细胞凋亡程度;胰腺癌组织中TXN表达量越高,预后越差。

血清Trx1、VILIP-1对急性分水岭脑梗死患者预后不良的预测价值

目的探究血清硫氧还蛋白1(Trx1)、视锥蛋白样蛋白-1(VILIP-1)对急性分水岭脑梗死(ACWI)患者预后不良的预测价值。方法选取2019年12月至2022年12月在河北省邯郸市第一医院就诊的126例ACWI患者作为研究对象。收集所有患者的临床资料。检测所有患者甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、总胆固醇(TC)水平。根据随访90 d的改良Rankin量表评分将患者分为预后良好组和预后不良组。采用酶联免疫吸附试验检测ACWI患者血清Trx1、VILIP-1水平。采用多因素Logistic回归分析ACWI患者预后不良的影响因素。绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析Trx1、VILIP-1单独及2项指标联合检测对ACWI患者预后不良的预测价值。结果随访90 d结果显示,预后良好组患者85例,预后不良组患者41例。预后不良组大面积脑梗死患者比例,美国国立卫生院卒中量表(NIHSS)评分,血清TG、TC、LDL-C水平均明显高于预后良好组,血清HDL-C水平明显低于预后良好组,差异均有统计学意义(P<0.05)。预后不良组血清Trx1水平明显低于预后良好组,血清VILIP-1水平明显高于预后良好组,差异均有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,NIHSS评分升高、VILIP-1水平升高是ACWI患者预后不良的危险因素(P<0.05),Trx1水平升高是ACWI患者预后不良的保护因素(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清Trx1、VILIP-1单独检测预测ACWI患者预后不良的曲线下面积(AUC)分别为0.782、0.814,均低于2项指标联合检测预测ACWI患者预后不良的0.905(Z=2.487、2.350,P<0.05)。结论血清Trx1水平降低和VILIP-1水平升高与ACWI患者预后不良有关,二者均可辅助判断患者预后情况,且二者联合检测对ACWI患者预后不良的预测价值更高。