没食子酸对脂多糖诱导的人THP1巨噬细胞炎症反应的抑制作用

目的 探讨没食子酸(gallic acid, GA)对脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)诱导的人THP1巨噬细胞炎症反应的抑制作用。方法 将人THP1单核细胞用佛波酯(phorbol myristate acetate, PMA)分化为巨噬细胞,用LPS诱导建立巨噬细胞炎症模型,给予不同浓度GA进行保护。CCK-8法筛选LPS和GA对THP1细胞的安全浓度;设正常组、模型组(100μg/L LPS)和GA组(100μg/L LPS+不同浓度GA)。ELISA法检测各组细胞培养液白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)水平,微板法检测各组细胞培养液乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)活性和一氧化氮(nitric oxide, NO)含量,荧光染色检测各组细胞活性氧(ROS)水平、细胞损伤情况和线粒体跨膜电位的变化,Western blot法检测各组细胞环氧合酶-2(COX-2)、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)、细胞外调节蛋白激酶(ERK)、P38丝裂原活化蛋白激酶(P38)、核转录因子-κB(NF-κB)、NOD样受体3(NOD-like receptor protein 3,NLRP3)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)、IL-1β和消皮素D(Gasdermin D,GSDMD)蛋白表达的影响。结果 与正常组比较,模型组细胞培养液IL-6、TNF-α、IL-1β和NO的分泌增多(P<0.05),COX-2、HMGB1、p-ERK、p-JNK、p-P38、p-NF-κB、NLRP3、Caspase-1和IL-1β蛋白表达升高(P<0.05),GSDMD蛋白表达水平降低(P<0.05),ROS生成和细胞损伤明显增多,线粒体跨膜电位较正常组显著降低,LDH活性显著升高(P<0.05);与模型组比较,GA组细胞培养液IL-6、TNF-α、IL-1β和NO的分泌减少(P<0.05),COX-2、HMGB1、p-ERK、p-JNK、p-P38、p-NF-κB、NLRP3、Caspase-1和IL-1β蛋白表达降低(P<0.05),GSDMD蛋白表达水平升高(P<0.05),ROS生成和细胞损伤减少,线粒体跨膜电位逐渐升高,LDH活性降低(P<0.05)。结论 GA对LPS诱导的人THP1巨噬细胞炎症反应具有抑制作用,其抗炎机制可能涉及MAPK和NF-κB信号通路。

MBL与人单核细胞系THP1/CD14细胞结合及其特性研究

采用Cell-ELISA和流式细胞术,发现人单核细胞系THP1/CD14在生理条件下可结合甘露聚糖结合凝集素(MBL),这种结合具有Ca2+依赖性,能被甘露糖、N-乙酰葡糖胺、D-葡萄糖、半乳糖、蔗糖、海藻糖等及重组人MBL-CRD蛋白和MBL-CLR蛋白所部分抑制,但C1q或抗人C1qR单克隆抗体对之无影响。还发现,炎性状态下的THP1/CD14细胞与MBL的结合增强。结果表明,THP1/CD14细胞表达Ca2+依赖的、糖敏感的MBL受体或结合蛋白,包括对CLR特异和CRD特异的两种受体,均与C1q受体无关;炎性刺激可上调THP1/CD14细胞MBL受体或结合蛋白的表达。

蝎素组分Ⅲ对THP1细胞HMGB1表达的影响

目的:研究蝎素组分Ⅲ(Scorpion venom crudeⅢ,SVC-Ⅲ)对THP1细胞HMGB1表达的影响,探讨蝎素与HMGB1相互作用的机制。方法:不同浓度SVC-Ⅲ(0.1、1.0、10和100 ng/ml)刺激培养THP1细胞48小时后,RT-PCR检测HMGB1 RNA水平表达差异;Western blot检测HMGB1蛋白水平表达情况;激光共聚焦检测HMGB1在细胞中的分布情况。结果:1.0 ng/ml SVC-Ⅲ刺激培养THP1细胞,HMGB1 RNA及蛋白表达水平升高最显著,随着SVC-Ⅲ浓度的增加,HMGB1 RNA及蛋白的表达水平反而下降;SVC-Ⅲ刺激培养THP1细胞可引起HMGB1从胞核转移入胞浆。结论:SVC-Ⅲ可以刺激或抑制THP1细胞HMGB1的表达,其作用效果与剂量密切相关。

瘦素对单核细胞THP1分泌趋化因子的影响及其作用机制

目的:探讨瘦素促进单核细胞THP1分泌趋化因子的作用及其相关机制,为研究瘦素调节机体免疫功能提供依据。方法:采用RT-PCR法和流式细胞术检测THP1细胞瘦素受体(Ob-Rb和Ob-Rt)表达。选取对数生长期THP1细胞,随机分为空白对照组和10、50、100及200μg·L-1瘦素组,采用Transwell实验检测各处理组穿膜细胞数。THP1细胞分为空白对照组和100μg·L-1瘦素组,采用Western blotting法检测信号通路关键分子p-AKT、p-ERK 1/2和p-STAT3表达水平。THP1细胞分为空白对照组、100μg·L-1瘦素组、100μg·L-1瘦素+DMSO组、100μg·L-1瘦素+50μmol·L-1 AG490组、100μg·L-1瘦素+10μmol·L-1LY294002组和100μg·L-1瘦素+10mol·L-1PD980590组,采用RT-PCR法和Western blotting法检测各组细胞因子IL-8表达水平。结果:瘦素长受体Ob-Rb和短受体Ob-Rt在THP1细胞中均有高表达。与空白对照组比较,50、100和200μg·L-1瘦素组穿膜细胞数明显增加(P<0.05)。与空白对照组比较,100μg·L-1瘦素组THP1细胞中p-AKT、p-ERK 1/2和p-STAT3表达水平明显升高(P<0.05)。与空白对照组比较,50、100和200μg·L-1瘦素组THP1细胞中IL-8表达水平明显升高(P<0.05);与100μg·L-1瘦素组比较,100μg·L-1瘦素+10μmol·L-1 LY294002组和100μg·L-1瘦素+10mol·L-1 PD980590组THP1细胞中IL-8表达水平明显降低(P<0.05),而100μg·L-1瘦素+50μmol·L-1 AG490组IL-8表达水平变化不明显(P>0.05)。结论:瘦素能促进单核细胞THP1分泌趋化因子,其机制可能与PI3K/AKT和MAPK/ERK 1/2信号通路有关。

IK6过表达慢病毒载体的构建及其在THP1细胞系中的表达和生物学特征

本研究旨在构建人IK6基因过表达的慢病毒载体,观察其在THP1细胞株中的表达及对其生物学特征的影响,为研究该基因在白血病中的作用提供基础。采用RT-PCR方法获得目的基因,并与线性化慢病毒载体pGCFU重组构建慢病毒载体pGC-FU-IK6-GFP,通过菌落PCR鉴定、测序比对分析,确定克隆的正确性。使用Lipofectamine 2000,将慢病毒载体pGC-FU-IK6-GFP转染293T细胞,测定病毒滴度后转染THP1细胞株,用流式细胞仪检测转染效率,RT-PCR检测靶细胞内IK6 mRNA表达,Western blot检测IK6-GFP融合蛋白,进一步观察THP1生物学特征的改变。结果表明,利用RT-PCR方法获得IK6目的基因并连接到线性化的慢病毒载体上,成功构建具有Amp抗性的pGC-FU-IK6-GFP质粒并转染293T细胞,获得滴度为2.0×109TU/ml的病毒。用目的质粒转染THP1细胞,转染效率可达90%。在靶细胞中检测到IK6 mRNA表达和IK6-GFP融合蛋白表达。IK6能够促进靶细胞克隆形成并且具有抑制凋亡的作用,而对细胞周期无显著影响。结论:成功构建IK6过表达的慢病毒载体,使IK6在THP1细胞株中稳定表达。对靶细胞生物学研究发现IK6极为可能干扰了正常Ikaros蛋白的抑癌作用,并存在潜在的抗凋亡作用,进而在一定程度上促进白血病细胞生长,但对细胞周期无明显影响。该研究为进一步探讨IK6在急性髓系白血病的作用奠定了基础。

17-β-雌二醇对HMGB1过表达THP1细胞的细胞周期进程的影响

目的:研究17-β-雌二醇联合HMGB1的过表达对人单核细胞系THP1细胞细胞周期和NF-κB转录因子的影响。方法:血清饥饿法同步化细胞周期后,利用脂质体法将pFLAG-CMV-HMGB1转染THP1细胞;10-9mol/L17-β-雌二醇刺激同步化THP1细胞16、30小时后,流式细胞术检测细胞周期分布,RT-qPCR检测Cyclin A、Cyclin D1的mRNA表达水平,免疫印迹检测HMGB1蛋白的表达;荧光素酶报告基因检测NF-κB的活性。结果:HMGB1过表达的THP1细胞中HMGB1蛋白的表达水平比正常THP1细胞要高3.7倍,血清饥饿法成功将THP1细胞周期同步化,同步化后G0/G1期细胞百分数由53%上升到78%;17-β-雌二醇刺激HMGB1过表达细胞30小时后出现Cyclin AmRNA表达上升为原来的7.9倍,而Cyclin D1 mRNA表达明显下降,G1期细胞百分比由53.11%下降为33.33%,S期细胞百分比由35.43%上升为53.91%,此改变在刺激后30小时达到最大值;NF-κB活性在17-β-雌二醇刺激HMGB1过表达细胞明显升高,且时间上提前于细胞周期动力学改变。结论:雌激素对THP1细胞周期调节依赖HMGB1,NF-κB可能参与其中。

蝎素组分Ⅲ对THP1细胞NF-κB转录因子的影响

目的:研究蝎素组分Ⅲ(Scorpion venom crudeⅢ,SVC-Ⅲ)对THP1细胞中NFκ-B转录因子的影响。方法:用RT-PCR方法检测THP1细胞中p65和IKK1基因的表达;Western blot检测细胞p65蛋白的表达;荧光素酶报告基因的方法观察NF-κB的转录活性。结果:1μg/L浓度的SVC-Ⅲ在mRNA和蛋白水平均对NFκ-B有促进表达作用,并增强NFκ-B的转录活性;10μg/L浓度的SVC-Ⅲ则未显示出促进作用;100μg/L浓度的SVC-Ⅲ反而表现出一定的抑制作用。结论:SVC-Ⅲ能以剂量依赖的方式调节THP1细胞NFκ-B转录因子的表达和活性。

重组人生长激素对THP1单核细胞中活化蛋白1转录因子的影响

目的研究重组人生长激素(rhGH)对THP1单核细胞中活化蛋白1(AP-1)转录因子的影响。方法应用荧光素酶报告基因和凝胶电泳迁移率实验检测AP-1在rhGH诱导的单核细胞中的活化程度,用蛋白免疫印迹实验检测细胞外信号调控激酶(ERK)和磷酸化的ERK(p-ERK)的表达。结果与空白对照组比较,LPS组和rhGH组AP-1的转录活性升高(P<0.01);rhGH+脂多糖(LPS)组AP-1的转录活性较LPS组有明显下降(P<0.01)。同时,rhGH和LPS的预处理对ERK无显著影响,但均能促进p-ERK蛋白的表达,rhGH的预处理则能减弱LPS刺激p-ERK蛋白表达。结论 rhGH可通过双向调节ERK的磷酸化而影响THP-1单核细胞中AP-1的转录活性。

8-溴-环磷酸腺苷对单核细胞株THP1中ABCA1及细胞间黏附分子的影响

目的观察8-Br-cAMP刺激下,单核细胞株THP1中ABCA1、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)及白介素-1β(IL-1β)mRNA和蛋白质表达的变化,阐明ABCA1基因在动脉粥样硬化(AS)形成中的可能机制。方法复苏培养THP1单核细胞,加入8-Br-cAMP(0.5mmol/L)刺激3、6、12、24h,设未加刺激同时孵育24h的细胞为阴性对照组;以荧光定量RT-PCR和Western印迹法及ELISA法检测ABCA1、ICAM-1及IL-1βmRNA和蛋白质表达量;用ABCA1的反义寡核苷酸(100nmol/L)转染THP1细胞,给予8-Br-cAMP刺激,同样的方法观察上述指标的改变。结果予8-Br-cAMP刺激后,THP1细胞中ABCA1、ICAM-1mRNA和蛋白质及IL-1β蛋白质表达均增高,给予反义寡核苷酸转染后氧化低密度脂蛋白(Ox-LDL)刺激3、6h上述指标的mRNA表达降低(P<0.01),12、24h蛋白质表达降低(P<0.01)。结论 THP1单核细胞中,8-Br-cAMP激活ABCA1不仅可增加细胞内胆固醇外运,还具有增加炎症因子表达的作用,在AS的发生中发挥双重作用。

Stattic增强三氧化二砷诱导急性髓样白血病THP1细胞生存和凋亡的机制

目的探讨STAT3抑制剂Stattic联合三氧化二砷(arsenic trioxide,ATO)对急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)THP1细胞生存和凋亡的影响及其作用机制。方法以THP1细胞株为研究对象,用CCK8法检测Stattic联合ATO对THP1细胞生存的影响,用流式细胞术检测细胞凋亡、ROS水平,用Caspase 3/7 Glo assay试剂盒检测细胞Caspase 3/7活性,用qPCR检测mRNA表达,Western blotting检测蛋白表达。结果Stattic可明显抑制磷酸化STAT3的水平,显著加剧ATO对AML细胞生存抑制,增强ATO诱导的细胞凋亡和氧化应激产物。Stattic显著抑制ATO上调的Nrf2的表达以及下游基因的表达。结论Stattic可增强ATO对AML细胞生存抑制和凋亡诱导作用,其机制可能与抑制Nrf2和Nrf2下游基因表达引起ROS增多有关。

8-Br-cAMP对THP1细胞中ABCA1及单核细胞趋化因子的影响

目的以THP1细胞株为靶点,研究8-Br-cAMP对ABCA1、MCP-1基因mRNA和蛋白质表达及IL-1β蛋白质的影响,阐明ABCA1基因在AS及泡沫细胞形成中新的可能机制。方法复苏培养THP1细胞株,加入8-Br-cAMP(0.5mmol/L)刺激3、6、12、24 h,荧光定量RT-PCR和Western蛋白印迹法及ELISA法检测ABCA1、MCP-1及IL-1βmRNA和蛋白表达量;用ABCA1的反义寡核苷酸(100 nmol/L)转染THP1细胞,给予上述8-Br-cAMP的刺激,同样的方法观察上述指标的改变。结果予8-Br-cAMP刺激后,THP1细胞中ABCA1、MCP-1的mRNA和蛋白质水平及IL-1β蛋白质水平均增高;给予反义寡核苷酸转染后,8-Br-cAMP刺激后3、6 h ABCA1、MCP-1mRNA的表达降低,12、24 h ABCA1、MCP-1及IL-1β蛋白质的表达水平降低。结论在8-Br-cAMP刺激下,THP1细胞中ABCA1可增加炎症因子表达,参与AS的发生。

^(125)I标记Toll样受体4-抗体与人单核细胞系THP1的体外结合研究

目的:125I标记Toll样受体4抗体(TLR4)研究其与人单核细胞系THP1细胞体外结合的特性。方法:用125I标记TLR4,以快速硅胶簿层层析纸(ITLC-SG)分析方法鉴定125I标记抗体的放射化学纯度,再用γ计数器测定125I标记抗体与THP1细胞的TLR4结合量,其中特异结合(SB)=总结合管(TB)-非特异管(NSB)。结果:125I标记TLR4-Ab的标记率为80.27%(n=7)。用快速硅胶簿层层析纸(ITLC-SG)分析方法鉴定其放射化学纯度都能>95%,测定125I标记抗体的比活度为3.145TBq.mg-1。结论:125I标记的TLR4-Ab具有良好的标记率和放射化学纯度,且125I标记TLR4-Ab与THP1细胞在体外具有很高结合亲和力。

冬凌草甲素对NK-92 MI杀伤THP1细胞的活性影响及机制

目的:观察冬凌草甲素对效应细胞NK-92 MI杀伤靶细胞THP1活性的影响并探讨其作用机制。方法:LDH释放法检测冬凌草甲素作用前后NK-92 MI对THP1的杀伤效率;应用qRT-PCR和Western blot分别检测THP1细胞表面自然杀伤细胞激活性受体D(NKG2D)相关配体表达情况;ELISA法检测效靶细胞共培养上清中细胞因子表达变化。结果:冬凌草甲素处理后NK-92 MI在不同效靶比均可提高对THP1细胞的杀伤效率;冬凌草甲素可上调THP1细胞表面MICB、ULBP1和ULBP2表达,同时增加效靶细胞共培养上清中IFN-γ和TNF-β释放,而对MICA、ULBP3表达及TNF-α释放无明显影响。结论:冬凌草甲素通过增加MICB、ULBP1和ULBP2表达以及促进IFN-γ和TNF-β释放提高THP1细胞对NK-92 MI的杀伤敏感性。

高糖诱导人THP1细胞Toll样受体4信号通路变化及匹伐他汀的拮抗作用

目的探讨高糖刺激下人单核/巨噬细胞系(Thp1)细胞表面Toll样受体4(TLR4)表达和信号通路活性变化,并探讨匹伐他汀对高糖引起该信号通路表达变化的作用及可能的机制。方法体外培养Thp1细胞,分为对照组(0mmol·L^(-1)葡萄糖)、低葡萄糖浓度组(5.5mmol·L^(-1)葡萄糖)、高葡萄糖浓度组(15、25 mmol·L^(-1)葡萄糖)、高糖(15mmol·L^(-1)葡萄糖)+匹伐他汀组(0.01、0.1、1μmol·L^(-1)匹伐他汀),各组细胞干预24 h后,Real-TimePCR方法检测各组细胞TLR4、MCP1、IL6基因表达水平,Western印迹法检测各组细胞TLR4、Myd88蛋白表达水平。结果随着葡萄糖浓度从5.5mmol·L^(-1)升高到25 mmol·L^(-1),Thp1细胞TLR4、MCP1、IL6基因表达及TLR4、Myd88蛋白水平逐渐增加。Thp1细胞在高糖刺激前给予匹伐他汀预孵1 h,TLR4、MCP1、IL6基因水平及TLR4、Myd88蛋白水平随匹伐他汀浓度的增加逐渐下降。结论高糖能剌激人Thp1细胞TLR4信号通路激活,呈剂量依赖性诱导TLR4、IL6、MCP1表达升高,且高糖激活的信号通路可能为Myd88依赖途径;匹伐他汀可以拮抗高糖诱导的TLR4信号通路激活,抑制炎症反应的放大。

lprG基因表达上调对THP1细胞表达谱的影响

目的分析lprG基因表达上调对THP1细胞表达谱的影响。方法建立稳定表达lprG的THP1细胞系,通过q PCR及Western印迹法检测lprG的表达。用RNA-seq分析稳定表达lprG对THP1细胞基因表达谱有何影响。对测序数据进行分析,作GO及KEGG通路的显著性富集分析,并选取6个差异表达基因进行q PCR验证。结果成功构建稳定表达lprG的THP1细胞系。RNA-seq检测发现共有712个差异表达的基因,其中419个上调,占58.8%,293个下调,占41.2%。富集分析显示,lprG的异位表达可影响THP1细胞多种生理或代谢过程。q PCR结果与RNAseq结果一致。结论 lprG会影响THP1细胞内与Toll样受体信号通路、补体、细胞吞噬、溶酶体及过氧化物酶体等过程相关的基因的表达,这可为进一步研究lprG与巨噬细胞相互作用机制提供前期基础。

苯扎贝特对THP1巨噬细胞PPARγ及ABCA1表达的影响

目的探讨苯扎贝特对THP1巨噬细胞PPARγ及ABCA1表达的影响。方法 THP1细胞经PMA诱导24h后,添加不同浓度苯扎贝特(0、1、10、50μmol/L)继续作用24h,RT-PCR法测定PPARγ、ABCA1 m RNA表达。结果 PMA刺激THP1细胞表达PPARγ及ABCA1;苯扎贝特剂量依赖性上调THP-1巨噬细胞PPARγ及ABCA1的表达(P<0.05),50μmol/L浓度时二者表达最高,且PPARγ与ABCA1的m RNA表达呈正相关(r=0.628,P=0.002)。结论苯扎贝特上调THP1细胞中PPARγ和ABCA1的表达。

优化人单核细胞型淋巴瘤THP1细胞的电转条件

目的优化THP1细胞的电转条件。方法首先检测不同培养基在不同体积下的电阻，其次调整不同的电压和电容的组合，最后测试质粒质量对转染效率的影响。结果THP1细胞完全培养基、无血清培养基和OPTI—MEMI在同一体积下的电阻一致，同一种培养基在不同体积下体积越大电阻越小；适宜的电压和电容分别为300V和150μF；质粒质量对电转的影响表现为20肛g质粒的转染率明显高于15μg、25μg和30μg。结论本实验从培养基、电压、电容以及质粒质量这三个方面成功地优化了THP1细胞的电转条件。

二氢丹参酮Ⅰ对白血病THP1细胞的增殖抑制作用及其机制探讨

目的探讨二氢丹参酮I对白血病THP1细胞的增殖抑制作用,并探讨其作用机制。方法将不同浓度的二氢丹参酮Ⅰ与THP1细胞共孵24、48及72 h,分别采用CCK8法、Annexin V/PI双染法检测其对THP1细胞的增殖抑制与促凋亡作用;采用Western blot法检测NF-κB、MAPK及PI3K细胞信号通路的蛋白表达。结果二氢丹参酮I与THP1细胞共孵24、48及72 h,其IC50值分别为6.2、4.3及4.1μmol/L。浓度为5μmol/L的二氢丹参酮Ⅰ与THP1细胞共孵24 h后,G0/G1期细胞比率均显著增加(P<0.01)。二氢丹参酮Ⅰ可使NF-κB、PI3K信号通路的蛋白表达下调,对MAPK信号通路的蛋白表达无显著影响。结论二氢丹参酮Ⅰ对THP1细胞具有增殖抑制作用并呈浓度及时间依赖性,其通过阻滞THP1细胞周期而促凋亡;其发挥抗肿瘤作用的机制可能与抑制NF-κB、PI3K细胞信号通路的蛋白表达有关。

实验研究THP1细胞过表达腺病毒介导的PEDF抑制炎症过程中关键基因的鉴别

目的鉴别人单核细胞白血病细胞THP1过表达腺病毒介导的色素上皮衍生因子(PEDF)抑制炎症过程中的关键基因。方法对THP1细胞过表达腺病毒介导的PEDF进行蛋白质组学分析。将THP1细胞分为GFP组和PEDF组,分别用GFP腺病毒和PEDF腺病毒感染细胞;将THP1细胞分为甘露醇组、高糖组、高糖+GFP组和高糖+PEDF组,分别用D-甘露醇、D-无水葡萄糖、GFP腺病毒和PEDF腺病毒培养4、4、3和3 d;将Pedf^(-/-)小鼠采用随机数表法分为Pedf^(-/-)组和Pedf^(-/-)糖尿病组,每组12只,另取10只C57BL/6小鼠为对照组,取小鼠视网膜进行实验。采用实时荧光定量PCR验证差异表达基因(DEGs)的mRNA在视网膜组织和THP1细胞系中的表达水平。与GSE5504数据集进行DEGs交集,使用String数据库构建蛋白-蛋白相互作用(PPI)网络,Cytoscape软件及MCODE应用程序提取PPI网络模块,与Set1数据集取交集并找到关键基因。采用Western blot在THP1细胞和Pedf^(-/-)小鼠中验证关键基因的表达水平。结果通过蛋白质组学和生物信息学分析,筛选出Set1数据集中的105个差异蛋白。实时荧光定量PCR结果显示,PEDF组细胞中ARF5、TCF25和KCTD9 mRNA相对表达量明显高于GFP组,RNPS1、CSF1R、OGA、IBA57和MGST2 mRNA相对表达量明显低于GFP组,差异均有统计学意义(均P<0.001)。对照组、Pedf^(-/-)组和Pedf^(-/-)糖尿病组视网膜组织中表达显著下调的TCF25、KCTD9、ARF5 mRNA和表达显著上调的CSF1R、RNPS1、IBA57 mRNA相对表达量总体比较,差异均有统计学意义(F=64.057、27.561、37.179、65.757、44.024、34.248,均P<0.001);与对照组相比,Pedf^(-/-)组TCF25、KCTD9、ARF5 mRNA相对表达量降低,CSF1R、RNPS1 mRNA相对表达量升高,差异均有统计学意义(均P<0.05);Pedf^(-/-)糖尿病组TCF25、KCTD9、ARF5 mRNA相对表达量降低,CSF1R、RNPS1、IBA57 mRNA相对表达量升高,差异均有统计学意义(均P<0.05)。与Pedf^(-/-)组相比,Pedf^(-/-)糖尿病组TCF25 mRNA相对表达量降低,CSF1R、RNPS1和IBA57 mRNA相对表达量升高,差异均有统计学意义(均P<0.05)。Set1数据集与GSE5504数据集交集后得到20个差异蛋白,主要富集于基因表达的正向调控、ERK1和ERK2级联的正向调节、胰岛素分泌的正向调节参与细胞对葡萄糖刺激的反应和抗原加工与递呈通路上。通过构建PPI网络和Cytoscape软件中MCODE插件筛选出关键基因CSF 1 R。Western blot结果显示,高糖组和高糖+GFP组中细胞CSF1R相对表达量分别为1.961±0.085和1.000±0.069,分别高于甘露醇组的1.000±0.072和高糖+PEDF组的0.469±0.079,差异均有统计学意义(t=14.940、8.765,均P<0.01);Pedf^(-/-)糖尿病组中视网膜CSF1R相对表达量为1.633±0.192,高于Pedf^(-/-)组的1.000±0.050,差异有统计学意义(t=5.537,P<0.01)。结论CSF 1 R可能为THP1细胞过表达腺病毒介导的PEDF抑制炎症过程中的关键基因和治疗靶点。