HSV-1即刻早期基因的5′UTR对报告基因mRNA翻译的影响

mRNA疫苗的5′非翻译区(5’untranslated regions,5′UTR)对其表达起着重要作用,报告基因增强绿色荧光蛋白基因(enhanced green fluorescent protein,EGFP)用于检测5′UTR调控mRNA表达已经是一个较为成熟的实验方法.为研究单纯疱疹病毒1型(herpes simplex virus 1,HSV-1)即刻早期基因的5′UTR作为报告基因EGFP mRNA的5′UTR对其翻译的影响,本研究将4个即刻早期基因的5’UTR以及表达能力较强的人β珠蛋白基因(humanβGlobin,hBg)5′UTR插入报告基因EGFP 5’端,通过观察绿色荧光强度研究不同即刻早期基因5′UTR对mRNA翻译的影响.结果表明:经mRNA转染试剂和纳米脂质体颗粒分别递送进293T细胞和小鼠体内;RL2的5′UTR作为报告基因EGFP 5′UTR的表达水平与hBg 5′UTR相近,RS1、US1、US12表达水平明显弱于hBg 5′UTR.因此,RL2基因的5′UTR有潜力作为mRNA疫苗的5′UTR.

过表达miR-144-3p下调感染巨噬细胞 IL-6 mRNA抑制BCG的存活

探究miR-144-3p对巨噬细胞IL-6 mRNA表达量和巨噬细胞免疫能力的影响,为结核诊疗提供理论参考。方法(1)建立BCG感染THP-1巨噬细胞模型,qPCR检测感染不同时间miR-144-3p和IL-6 mRNA表达变化;(2)瞬转miR-144-3p模拟物/抑制剂来过表达/抑制miR-144-3p后,qPCR检测感染不同时间miR-144-3p和IL-6 mRNA表达变化;皮尔森相关系数分析miR-144-3p和IL-6 mRNA的相关性;(3)CCK-8检测瞬转miR-144-3p模拟物/抑制剂后,CCK-8检测BCG感染的巨噬细胞增殖能力;CFU检测BCG存活状态。结果显示:(1)巨噬细胞感染BCG后,miR-144-3p和IL-6 mRNA表达均显著上升(P<0.05),miR-144-3p表达量在12 h达到峰值,IL-6 mRNA表达量在24 h达到峰值;(2)巨噬细胞感染BCG后,过表达miR-144-3p使IL-6 mRNA表达显著下降(P<0.01);抑制miR-144-3p使IL-6 mRNA表达显著上升(P<0.01);皮尔森相关系数分析结果显示两者存在负相关性;(3)过表达/抑制miR-144-3p不影响巨噬细胞增殖能力,但过表达miR-144-3p能抑制巨噬细胞中BCG的存活。结论:BCG感染巨噬细胞后miR-144-3p和IL-6 mRNA表达均显著上升;过表达/抑制巨噬细胞miR-144-3p,miR-144-3p可能负调控IL-6 mRNA表达;过表达miR-144-3p能抑制BCG存活,进而增强巨噬细胞的先天免疫能力。

椎管内麻醉后CD老年患者S100β、H-FABP、NLRP3mRNA、Caspase-1 mRNA表达意义

目的分析老年髋关节置换术(THA)患者椎管内麻醉后认知功能障碍(CD)发生的危险因素及中枢神经特异蛋白(S100-β)、核苷酸结合寡聚化域受体蛋白3信使核糖核酸(NLRP3 mRNA)、中心型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)、天冬氨酸蛋白水解酶1信使核糖核酸(Caspase-1 mRNA)对其预测价值。方法将椎管内麻醉后发生CD的40例老年THA术患者纳入A组,另选取未发生CD的68例老年THA术患者纳入B组。比较两组临床资料、S100-β、H-FABP、NLRP3 mRNA、Caspase-1 mRNA,危险因素采用多因素Logistic回归分析法进行分析,S100-β、H-FABP、NLRP3 mRNA、Caspase-1 mRNA对老年THA术患者椎管内麻醉后CD发生的预测价值采用受试者工作特征(ROC)曲线进行分析。结果A组年龄大于B组,差异有统计学意义(t=13.674,P<0.05);有糖尿病、术中低血压的患者占比均高于B组,差异有统计学意义(χ^(2)=12.643、17.767,P<0.05)。A组血清S100-β、NLRP3 mRNA、H-FABP、Caspase-1mRNA表达均高于B组,差异有统计学意义(t=14.571、21.691、80.159、23.572,P<0.05)。老年THA术患者椎管内麻醉后CD发生的独立危险因素包括年龄大、糖尿病、术中低血压、血清S100-β、H-FABP、水平、NLRP3 mRNA、Caspase-1 mRNA高,差异有统计学意义(P<0.05)。S100-β、H-FABP、NLRP3 mRNA、Caspase-1 mRNA联合检查预测老年THA术患者椎管内麻醉后CD发生的曲线下面积(AUC)为0.915高于单一检测(P<0.05)。结论年龄大、糖尿病、术中低血压均为老年THA术患者椎管内麻醉后CD发生的独立危险因素,且S100-β、H-FABP、NLRP3 m RNA、Caspase-1 mRNA联合检测对CD的预测价值较高。

子宫内膜癌组织中miR-145-5p、IGF2BP1 mRNA表达变化及与患者预后的关系

目的探讨子宫内膜癌(EC)组织中微小RNA-145-5p(miR-145-5p)、胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白1(IGF2BP1)mRNA表达变化及与患者预后的关系。方法选取2018年5月—2021年5月于南通市肿瘤医院行手术切除的EC组织及对应癌旁组织标本115例份,采用实时荧光定量PCR法检测EC组织及癌旁组织中miR-145-5p、IGF2BP1 mRNA表达,Pearson相关法分析miR-145-5p与IGF2BP1 mRNA表达的相关性。根据EC组织中miR-145-5p、IGF2BP1 mRNA表达的中位数将患者分为高/低表达组,Kaplan-Meier法绘制高/低miR-145-5p、IGF2BP1 mRNA表达的EC患者生存曲线;多因素Cox回归分析影响EC患者预后的因素。结果与癌旁组织比较,EC组织中miR-145-5p表达降低,IGF2BP1 mRNA表达升高(t分别为-22.201、19.038,P均<0.05)。miR-145-5p与IGF2BP1 mRNA表达呈负相关(r=-0.748,P<0.05)。EC组织中miR-145-5p、IGF2BP1 mRNA表达与组织分化程度、国际妇产科联盟(FIGO)分期和淋巴结转移有关(P均<0.05)。115例EC患者3年总生存率为67.83%(78/115)。miR-145-5p高表达组3年总生存率高于miR-145-5p低表达组,IGF2BP1 mRNA高表达组3年总生存率低于IGF2BP1mRNA低表达组(χ^(2)分别为13.484、11.755,P均<0.05)。EC患者死亡的独立危险因素为组织分化程度低分化、FIGO分期Ⅲ期、有淋巴结转移、IGF2BP1 mRNA表达≥1.53(OR分别为5.434、6.092、4.327、5.339,95%CI分别为1.735~17.021、1.930~19.225、1.424~13.154、1.515~18.811),独立保护因素为miR-145-5p表达≥0.74(OR=0.298,95%CI:1.515~18.811)。结论EC组织中miR-145-5p低表达,IGF2BP1 mRNA高表达,与组织分化程度、FIGO分期、淋巴结转移和患者预后有关。

子宫内膜癌组织中IGF2BP1mRNA,PEG10mRNA表达及与增殖基因表达的相关性和预后研究

目的研究子宫内膜癌(endometrial carcinoma,EC)组织中胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白1(insulinlike growth factor 2 mRNA binding protein 1,IGF2BP1)mRNA,父系表达遗传印记基因10(patrilineal expression of genetic imprinting gene 10,PEG10)mRNA表达及与增殖基因表达的相关性及预后。方法选取2017年1月~2019年1月湖北理工学院附属妇幼保健院诊治的100例EC患者。实时荧光定量PCR检测EC癌组织和癌旁组织中IGF2BP1 mRNA,PEG10 mRNA及增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)mRNA,细胞周期素D1(cyclin D1)mRNA,细胞周期蛋白依赖激酶4(cyclin dependent kinase 4,CDK4)mRNA表达。免疫组织化学检测IGF2BP1,PEG10蛋白表达。相关性采用Pearson相关分析。Kaplan-Meier曲线分析不同IGF2BP1,PEG10表达组EC患者的预后差异。COX回归分析EC患者的预后影响因素。结果EC癌组织中IGF2BP1 mRNA(1.84±0.33),PEG10 mRNA(2.12±0.40),PCNA mRNA(3.14±0.42),cyclinD1 mRNA(2.81±0.36),CDK4 mRNA(2.37±0.34)高于癌旁组织(0.78±0.21,0.91±0.25,0.74±0.13,0.67±0.21,0.59±0.18),差异具有统计学意义(t=25.652~54.588,均P<0.05)。癌组织中IGF2BP1(70.00%),PEG10(72.00%)蛋白阳性率高于癌旁组织(100%,9.00%),差异具有统计学意义(χ^(2)=75.000,82.363,均P<0.05)。EC中IGF2BP1 mRNA,PEG10 mRNA表达与PCNA mRNA,cyclinD1 mRNA,CDK4 mRNA表达呈正相关(r=0.562~0.625,均P<0.05)。EC中IGF2BP1 mRNA与PEG10 mRNA表达呈显著正相关(r=0.663,P<0.05)。FIGO分期Ⅲ期、并发淋巴结转移EC癌组织中IGF2BP1(86.49%,87.50%),PEG10(89.19%,90.63%)阳性率高于FIGO分期Ⅰ~Ⅱ期(60.32%,61.90%)、无淋巴结转移(61.77%,63.24%),差异具有统计学意义(χ^(2)=6.863~8.608,均P<0.05)。IGF2BP1阳性组患者三年总体生存率70.00%(49/70)低于阴性组的90.00%(27/30);PEG10阳性组患者三年总体生存率为69.44%(50/72),低于阴性组的92.86%(26/28),差异具有统计学意义(Log-rankχ^(2)=4.133,5.491,P=0.042,0.019)。FIGO分期Ⅲ期(OR=1.449,95%CI:1.148~1.830)、并发淋巴结转移(OR=1.442,95%CI:1.124~1.850),IGF2BP1阳性(OR=1.637,95%CI:1.239~2.163)及PEG10阳性(OR=1.576,95%CI:1.136~1.187)是影响EC患者生存预后的独立危险因素(均P<0.05)。结论EC中IGF2BP1,PEG10表达升高,两者与增殖基因表达呈正相关,是EC预后评估的肿瘤标志物。

一种新型1型单纯疱疹病毒mRNA疫苗的制备

制备用于防治1型单纯疱疹病毒感染的新型mRNA疫苗,并检测其免疫效果。利用同源重组技术构建HSV1糖蛋白gD胞外域(HSV1-gD^(Ectodomain))重组质粒,经PCR反应扩增HSV1-gD^(Ectodomain)基因模板,体外转录反应得到HSV1-gD^(Ectodomain)mRNA,利用LNP包封HSV1-gD^(Ectodomain)mRNA得到mRNA-LNP疫苗复合物,小鼠大腿肌肉接种mRNA-LNP疫苗复合物。ELISA法检测小鼠血清HSV1-gD抗体效价;TCID50法检测HSV1-gD血清中和效价。结果显示:经HSV1-gD^(Ectodomain)mRNA疫苗接种后,小鼠血清抗体滴度达到1∶12800,中和实验表明抗体可保护Vero细胞不受HSV1病毒感染。成功制备一种新型HSV1 mRNA疫苗,用其接种小鼠可诱导产生特异性免疫应答,并具有良好的保护作用。

基于mRNA高通量测序初探雷帕霉素联合鞭毛蛋白体外抑制4T1乳腺癌细胞的机制

目的:利用mRNA高通量测序初步探讨雷帕霉素(Rapa)联合鞭毛蛋白(FliC)体外抑制4T1乳腺癌细胞的机制。方法:将4T1乳腺癌细胞分为对照(control)组、Rapa组、FliC组、Rapa+FliC组等4组,CCK-8法与流式细胞术检测细胞活力、凋亡的变化情况。同时,通过mRNA高通量测序,对差异表达基因(DEGs)进行KEGG通路分析;此外,通过STRING分析Rapa+FliC组与Rapa组两组间的DEGs,构建DEGs的蛋白相互作用(PPI)网络、筛选Hub基因。结果:CCK-8和流式细胞术检测结果显示,Rapa+FliC对4T1乳腺癌细胞的活力抑制率和凋亡率都显著高于Rapa和FliC(P<0.05)。转录组测序结果显示,Rapa组和control组之间共有579个DEGs,主要富集于PI3K/Akt等信号通路;FliC组和control组之间的DEGs主要富集于Nod样受体等信号通路;Rapa+FliC组与Rapa组之间共有150个DEGs,主要富集于mTOR等信号通路。从PPI网络中,成功筛选出Atm、Itga2等10个Hub基因。结论:Rapa+FliC可能通过PI3K/Akt/mTOR信号通路,在体外抑制4T1乳腺癌细胞活力,促进细胞凋亡;Atm和Itga2基因可能是两者联合作用的关键基因。

牙周组织再生术联合替硝唑对慢性牙周炎患者Notch1 mRNA表达影响及疗效观察

目的分析牙周组织再生术与替硝唑联合治疗慢性牙周炎(CP)对患者Notch1 mRNA表达的影响。方法选取丽水市人民医院CP患者130例,根据随机数字表法将其分为对照组(n=65)和观察组(n=65),两组均接受常规治疗,对照组开展牙周组织再生术治疗,观察组开展牙周组织再生术和替硝唑联合治疗,比较两组牙周袋深度(PD)、龈沟出血指数(SBI)、临床附着水平(CAL)、菌斑指数(PLI)的变化,Notch1 mRNA表达、Th17细胞、IL-17水平的变化,以及视觉模拟评分(VAS)、临床疗效、不良反应等。结果治疗后,两组患者PD、SBI、CAL、PLI指数均降低,与对照组相比,观察组PD、SBI、CAL、PLI指数降低更明显,具有统计学差异(P<0.05),治疗后,两组Notch1 mRNA、Th17细胞、IL-17水平均降低,与对照组相比,观察组治疗后Notch1 mRNA、Th17细胞、IL-17水平降低更明显,具有统计学差异(P<0.05),治疗后,两组VAS均有所降低,与对照组相比,观察组VAS降低(P<0.05),与对照组相比,观察组治疗后总有效率高,具有统计学差异(P<0.05),与对照组相比,观察组治疗不良反应略高,但无统计学差异(P>0.05)。结论对CP患者开展牙周组织再生术与替硝唑联合治疗,可降低Notch1 mRNA表达以及疼痛程度,对临床症状治疗效果显著,可以推广使用。

lncRNA HOXC-AS1和IGF2BP2 mRNA在胃癌组织中的表达及临床意义

目的:探究胃癌(GC)组织中长链非编码RNA HOXC反义RNA1(lncRNA HOXC-AS1)、胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白2(IGF2BP2)mRNA表达水平与患者临床病理特征及术后5年内生存的关系。方法:选取我院2015年5月至2018年4月收治的GC患者139例,手术收集GC组织及癌旁组织。荧光定量PCR法检测lncRNA HOXC-AS1和IGF2BP2 mRNA表达。对GC患者进行术后随访5年,记录GC患者生存情况,分为生存组88例,死亡组51例。比较GC组织和癌旁组织中lncRNA HOXC-AS1和IGF2BP2 mRNA表达水平、不同临床病理特征患者GC组织中lncRNA HOXC-AS1和IGF2BP2 mRNA表达情况、生存组和死亡组临床病理特征和GC组织中lncRNA HOXC-AS1和IGF2BP2 mRNA表达水平。分析GC组织中lncRNA HOXC-AS1和IGF2BP2 mRNA表达水平的相关性、GC组织中lncRNA HOXC-AS1和IGF2BP2 mRNA表达情况与术后5年生存的关系、影响GC患者术后5年内生存的危险因素。结果:与癌旁组织相比,GC组织中lncRNA HOXC-AS1和IGF2BP2 mRNA表达水平均显著升高(P<0.05);GC组织中lncRNA HOXC-AS1和IGF2BP2 mRNA表达水平呈正相关(P<0.05);GC组织中lncRNA HOXC-AS1和IGF2BP2 mRNA表达水平与淋巴结转移、TNM分期、肿瘤分化程度相关(P<0.05);lncRNA HOXC-AS1高表达组、IGF2BP2 mRNA高表达组患者术后5年总生存率分别显著低于lncRNA HOXC-AS1低表达组、IGF2BP2 mRNA低表达组(P<0.05);生存组和死亡组淋巴结转移、TNM分期、肿瘤分化程度比较差异有统计学意义(P<0.05);死亡组患者GC组织中lncRNA HOXC-AS1和IGF2BP2 mRNA表达水平显著高于生存组(P<0.05);TNM分期为III期、肿瘤低分化、lncRNA HOXC-AS1高表达、IGF2BP2 mRNA高表达是影响GC患者术后5年内生存的独立危险因素(P<0.05)。结论:GC患者癌组织中lncRNA HOXC-AS1及IGF2BP2 mRNA表达水平均显著升高,且术后5年内死亡的GC患者较存活患者更高,二者与淋巴结转移、TNM分期、肿瘤分化程度密切相关,二者高表达是影响GC患者术后5年内生存的独立危险因素。

非小细胞肺癌中Notch1、HIF-1、VEGF蛋白及Notch1 mRNA的表达及意义

目的探讨Notch1、HIF-1、VEGF蛋白及Notch1 mRNA在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织的表达及其临床病理学意义。方法采用免疫组化SP法和原位杂交法分别检测65例NSCLC组织、15例正常支气管上皮组织中Notch1、HIF-1、VEGF蛋白及Notch1 mRNA的表达。结果Notch1、HIF-1、VEGF蛋白及Notch1 mRNA在非小细胞肺癌中阳性表达率分别为81.5%(53/65)、96.9%(63/65)、93.8%(61/65)、73.8%(48/65),均明显高于正常支气管上皮组织阳性表达率(P<0.05);NSCLC中Notch1、HIF-1、VEGF蛋白及Notch1 mRNA的表达均与临床分期、淋巴结转移有关(P<0.05);Notch1、HIF-1与VEGF蛋白间均正相关;Notch1蛋白与Notch1 mRNA的表达呈正相关。结论Notch1、HIF-1、VEGF蛋白及Notch1 mRNA在NSCLC中均表达上调,提示在肺癌的发生、发展中可能起重要作用;检测NSCLC组织Notch1蛋白及mRNA可作为判断肿瘤侵袭与转移的重要指标。

鹿瓜多肽注射液对CⅡ诱导的免疫性关节炎大鼠关节滑膜组织MMP_3和TIMP-1mRNA表达的影响

目的 :探讨鹿瓜多肽注射液治疗类风湿性关节炎 (RA)的机理。方法 :以Ⅱ型胶原 (CⅡ )诱导的免疫性关节炎 (CIA)大鼠为RA动物模型 ,通过测量其关节肿胀程度及制作病理切片并在光镜下计分 ,观察鹿瓜多肽注射液对其的治疗效果 ,并取膝关节滑膜切片进行原位杂交 ,用图像分析系统检测MMP3 和TIMP 1mRNA表达水平。结果 :与模型组比较 ,鹿瓜多肽组大鼠踝关节肿胀程度和病理损伤计分均明显减轻。模型组大鼠滑膜组织MMP3 mRNA表达阳性密度明显高于正常对照组 ,而TIMP 1mRNA表达阳性密度明显低于正常对照组。鹿瓜多肽组大鼠滑膜组织MMP3 表达降低 ,TIMP 1表达增高。结论 :鹿瓜多肽注射液对CⅡ诱导的免疫性关节炎有治疗作用 ,其机理可能与抑制滑膜组织MMP3 mRNA表达并促进TIMP 1mRNA表达有关。

消渴灵浓缩液对糖尿病大鼠坐骨神经IGF-1 mRNA表达的影响

目的:探讨消渴灵浓缩液对糖尿病大鼠坐骨神经IGF 1mRNA表达的影响。方法:将30只链脲佐菌 素诱导的糖尿病大鼠模型随机分为模型组、西药对照组、中药治疗组,每组10只。另选10只鼠龄、体重相匹配的 大鼠作为正常组。采用相对定量逆转录聚合酶链式反应(RT PCR)检测病程8周后各组大鼠坐骨神经IGF 1mR NA表达的水平。结果:中药组、西药组、正常大鼠组坐骨神经IGF 1mRNA相对表达量均增加,差异无统计学意义 (P=0.213,P=0.822,P=0.304);模型组坐骨神经IGF 1mRNA相对表达量下降,与中药组、西药组、正常大鼠 组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。IGF 1mRNA表达水平与血糖呈负相关(P<0.05)。结论:糖尿病大鼠 坐骨神经组织IGF 1mRNA的表达下降,消渴灵浓缩液可上调糖尿病大鼠坐骨神经IGF 1mRNA的表达水平,可能 是消渴灵浓缩液防治糖尿病周围神经病变的作用机制之一。

鸭发育早期肝脏IGF-1 mRNA的表达特异性及其与体质量的相关性分析

选择生长速度不同的高邮鸭和金定鸭,对其胚胎期和出雏早期肝脏IGF-1 mRNA的表达规律及其与体质量的相关性进行了比较研究。采用实时荧光定量PCR方法研究鸭13、17、21、25、27胚龄和出雏后7日龄下肝脏胰岛素样生长因子1(IGF-1)mRNA的表达规律。试验结果证实:鸭肝脏IGF-1 mRNA在13胚龄已有表达。鸭早期发育过程中体质量和肝脏IGF-1 mRNA的表达水平均呈持续上升态势,高邮鸭13、21胚龄和7日龄肝脏IGF-1 mRNA的表达量极显著高于金定鸭(P<0.01),与日增体质量和绝对生长速率的变化情况相吻合。整个观察期内体质量变化和肝脏IGF-1 mRNA的表达量均呈现极显著的品种和时间特异性(P<0.01),并且受到品种和日龄交互作用的极显著影响(P<0.01)。从品种或性别的角度进行分析,均发现鸭发育早期肝脏IGF-1 mRNA的表达与体质量的变化趋势一致,且呈极显著正相关(P<0.01),提示肝脏IGF-1 mRNA的表达可能在鸭早期发育过程中发挥着重要作用。

肾衰冲剂抑制残余肾转化生长因子-β1与组织金属蛋白酶抑制剂-1mRNA的表达

目的 :研究肾衰冲剂对大鼠残余肾转化生长因子 β1(TGF β1)、组织金属蛋白酶抑制剂 1(TIMP 1)mRNA过度表达的抑制作用。方法 :制作大鼠 5 / 6肾切除肾衰模型 ,分别予肾衰冲剂及党参、丹参、制大黄灌胃治疗 1个月后取各组大鼠残余肾。用逆转录多聚酶链反应 (RT PCR)法检测残余肾TGF β1、TIMP 1mRNA的表达。结果 :大鼠慢性肾衰模型组表现为TGF β1、TIMP 1mRNA的过度表达 ;经肾衰冲剂治疗后TGF β1、TIMP 1mRNA的表达降低 (P <0 0 1)。其组成单味药丹参、制大黄则有不同程度的作用 ,党参作用不明显。结论 :肾衰冲剂减轻残余肾纤维化的病变与其抑制残余肾组织TGF β1、TIMP 1mRNA的过度表达有关。

大鼠脑创伤后Fas mRNA表达与细胞凋亡关系及GM-1的脑保护作用

目的通过观察大鼠脑创伤后海马区FasmRNA的表达及细胞凋亡的情况,进一步探讨脑创伤后细胞凋亡的机制和GM-1的脑保护作用。方法建立Marmarou颅脑创伤模型,同时给予GM-1治疗,采用TUNEL和原位杂交方法观察细胞凋亡及FasmRNA在脑创伤后的变化规律。结果脑创伤后海马区神经细胞过度地表达FasmRNA,并且该区出现明显的神经细胞凋亡,GM-1能够使FasmRNA的表达高峰及神经细胞凋亡高峰下调。结论Fas的过度表达可能是脑创伤后神经细胞凋亡的重要原因。GM-1可能通过抑制Fas的表达,减少神经细胞凋亡发挥脑保护作用。

丹参注射液对重症急性胰腺炎大鼠肾ET-1 mRNA表达的影响

目的观察丹参注射液对SAP肾脏ET-1mRNA表达的影响,以探讨SAP肾脏损伤的机制。方法45只Wistar大鼠随机等分为3组。模型组、药物组均以5%牛磺胆酸钠经胰管内逆行注射(1ml/kg)复制SAP模型。药物组则在制模后肌肉注射丹参(2ml·kg-1·d-1),每6h使用一次。对照组仅行假手术。各组动物在术后24h测血淀粉酶、ET-1和腹水量。使用原位杂交和图象分析检测肾脏ET-1mRNA的表达强度,并观察肾脏的病理变化。结果(1)血中淀粉酶和腹水量:模型组分别为(2156.05±355.87)u/L和(9.87±2.34)ml,显著高于药物组的(1439.21±332.99)u/L和(5.27±2.81)ml及对照组的(215.67±37.27)u/L和0ml(P均<0.001)。(2)血中ET-1:模型组为(185.47±20.80)pg/ml,高于药物组的(164.27±18.53)pg/ml和对照组的(72.90±17.27)pg/ml(P<0.05,P<0.001)。(3)模型组、药物组的ET-1mRNA在肾脏中表达均增高,模型组显著高于药物组(P<0.001)。(4)模型组、药物组肾脏均有病理改变,但药物组较模型组减轻。结论(1)SAP肾脏的ET-1mRNA高表达导致ET-1过度生成并与肾脏损伤有关。(2)丹参能抑制肾脏的ET-1mRNA的过度表达,从而对肾脏起保护作用。

Tiam-1 mRNA及其蛋白的表达与鼻咽癌浸润转移的关系

目的探讨Tiam-1 mRNA及其蛋白表达与鼻咽癌浸润转移的关系及意义。方法41例不同临床分期人鼻咽癌组织以及对照组20例鼻咽慢性炎症黏膜组织标本,用RT-PCR方法检测Tiam-1 mRNA表达水平,用免疫组化检测Tiam-1蛋白表达。结果Tiam-1 mRNA在鼻咽癌组织的平均表达水平为1.83±0.73,明显高于鼻咽黏膜慢性炎组织(0.87±0.45)(P<0.01);而且鼻咽癌组Tiam-1 mRNA高表达率为46.34%,明显高于对照组(P<0.01)。Tiam-1蛋白在鼻咽癌组阳性率为65.85%(27/41),明显高于对照组(15%,3/20)(P<0.01);其高表达率为43.90%(18/41),明显高于对照组(P<0.01)。Tiam-1 mRNA及其蛋白高表达率在临床TNM各分期间的差异均有明显统计学意义(P<0.01);在各T分期之间的差异亦有明显统计学意义(P<0.01)。鼻咽癌中有淋巴结转移组Tiam-1 mRNA及其蛋白高表达率分别为59.26%(16/27)及55.56%(15/27),均明显高于无淋巴结转移组的21.43%(3/14)及14.28(2/14),(P<0.05)。结论Tiam-1 mRNA及其蛋白高表达与鼻咽癌浸润转移有密切关系,提示Tiam-1基因可能是鼻咽癌的重要促浸润转移因子,有望成为治疗的靶标及有价值的预后判断指标。

中华稻蝗几丁质合成酶1基因的mRNA表达及功能

【目的】研究中华稻蝗(Oxya chinensis(Thunberg))几丁质合成酶1(CHS1)基因的表达特性及其在生长发育过程中的作用,从而为实现基于RNAi的蝗虫有效控制提供理论依据。【方法】根据已知中华稻蝗几丁质合成酶1基因(OcCHS1)保守区域部分cDNA序列(GenBank登录号:HM214491)设计特异性表达引物,运用RT-PCR和qPCR研究时空表达特性;采用RNA干扰技术研究其生物学功能。【结果】OcCHS1在中华稻蝗各龄期都有表达,其体表为高表达,其次是气管,其它组织部位表达量低。RNA干扰试验发现,4龄第4天若虫注射OcCHS1的双链RNA(dsRNA)后,与对照组相比,OcCHS1 mRNA表达量被沉默了70.8%,稻蝗出现蜕皮时间延迟、不能完成蜕皮或腹部皱缩死亡等现象,注射dsOcCHS1组死亡率为85.2%,与对照组(7.4%)相比差异显著。【结论】几丁质合成酶1对中华稻蝗的生长发育具有重要作用,其主要参与体表和气管几丁质的合成。采用RNA干扰技术使该基因沉默后可导致中华稻蝗死亡。

补偿生长对异育银鲫IGF-1、IGFBP-1水平及IGF-1、IGF-1RmRNA表达的影响

该实验分析饥饿和恢复投喂对异育银鲫血液IGF-1和IGFBP-1水平和肝脏IGF-1、白肌IGF-1RmRNA表达量的影响。结果显示:饥饿期(14d)血液中IGF-1和IGFBP-1水平逐渐下降,在饥饿第14天均出现显著性降低(P<0.05);恢复投喂后第1天IGF-1迅速恢复到对照组水平,而IGFBP-1水平仍显著低于对照组(P<0.05),随后逐渐升高,直至于恢复投喂第14天后显著高于对照组水平(P<0.05);饥饿期肝脏IGF-1mRNA表达量呈下降趋势,但与对照组无显著性差异(P>0.05);恢复投喂初期(第1、3天),IGF-1mRNA表达量仍继续下降(P<0.05),对营养条件的变化反应滞后,至第7天,表达水平恢复到对照组水平。白肌IGF-1RmRNA表达水平在饥饿第3天出现显著性下降(P<0.05),继续饥饿其水平出现补偿性升高;恢复投喂后第14天IGF-1RmRNA表达量显著高于对照组水平(P<0.05)。该结果揭示恢复投喂期高水平的IGFBP-1含量和IGF-1RmRNA表达量可能通过提高IGF-1的促生长作用参与异育银鲫的补偿生长调节。

过敏性紫癜患者外周血单个核细胞中Tim-1,Tim-3mRNA表达和血清中IL-2和IL-4含量测定

目的研究Tim-l,Tim-3及IL-2,IL-4在过敏性紫癜(Henoch-Schonlein purpura,HSP)发病中的作用。方法将28例HSP患者分为单纯组和混合组,采用RT-PCR技术检测两组患者外周血单个核细胞中Tim-1 mRNA和Tim-3 mRNA的表达情况,ELISA法检测血清中IL-2和IL-4的含量,选取健康人20例作为对照组。结果 HSP患者Tim-1 mRNA相对表达量高于正常对照组[RQ值分别为0.974(1.108)和0.760(0.514),P<0.05],而Tim-3 mRNA相对表达量差异无统计学意义[RQ值分别为1.359(1.183)和1.604(1.177),P>0.05];Tim-1 mRNA,Tim-3 mRNA的表达在HSP单纯组和混合组之间差异均无统计学意义(P均>0.05)。HSP患者血清IL-2含量(188.517±12.867)较正常对照组(202.759±20.903)降低,IL-4含量(73.046±8.750)高于正常对照组(62.301±11.232),且HSP患者混合组IL-2含量低于单纯组,IL-4含量高于单纯组,以上差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论Tim蛋白可能参与HSP发病,但与疾病严重程度无关;IL-2和IL-4水平可能与疾病严重程度密切相关。