大鼠骨髓Thy-1.1^+干细胞的分选与表型研究

目的采用免疫磁珠分选系统(MACS)分离大鼠骨髓Thy-1.1+干细胞群,研究Thy-1.1+干细胞与肝脏分化潜能相关的表型特征。方法收集大鼠胫骨、股骨骨髓细胞,Percoll密度梯度离心分离单个核细胞,Thy-1.1单抗标记,间接免疫磁珠系统分离纯化Thy-1.1+干细胞群,流式细胞仪检测其纯度,锥虫蓝拒染法检测细胞活力,计算回收率。同时流式检测分选前细胞及分选后Thy-1.1+干细胞的表型。结果经MACS分选后Thy-1.1+细胞比例由56.65%升至94.20%;分选后的细胞活力为99.62%,与分选前的99.79%无明显差异;MACS分选Thy-1.1+细胞的回收率为64.65%。Thy-1.1+细胞不表达CD34和c-kit;高表达β2微球蛋白(β2M)和CD45;部分表达Flt-3。分选前后CD34+和c-kit+比例无显著差异;β2M+的比例由93.38%下降至86.39%(P<0.05);CD45+和Flt-3+的比例则由67.18%、14.36%升高至分选后的81.12%和58.72%(均P<0.01)。结论MACS方法能有效分选大鼠骨髓Thy-1.1+干细胞群,所得细胞纯度高,细胞活力保持好。大鼠Thy-1.1抗原与CD34、c-kit分子无明显相关性;而与CD45、Flt-3有一定的正相关性;与β2M呈一定的负相关性。

Thy1.1干细胞对损伤动脉一氧化氮合成酶的影响

背景：目前干细胞移植对血管成形后再狭窄的影响存在争议。目的：观察大鼠Thy-1.1干细胞局部移植对大鼠颈总动脉球囊损伤后内膜增生的影响,探讨干细胞移植对内皮型一氧化氮合成酶及诱生型一氧化氮合成酶的影响,并评价干细胞移植对再狭窄的影响与一氧化氮合成酶的关系。方法：4~6周龄雄性SD大鼠用于制备骨髓Thy-1.1干细胞。雌性SD大鼠随机抽签法法分为3组,干细胞组：于颈总动脉球囊损伤后即刻将约5×106Thy-1.1干细胞注入至损伤血管局部;损伤组：颈总动脉球囊损伤后局部注入等量生理盐水;对照组：与损伤组共用大鼠,损伤组取材左侧损伤颈总动脉,对照组取右侧未损伤颈总动脉。各组各于术后即刻、3,7,14,21,28d麻醉并处死大鼠,留取两侧颈总动脉标本。应用组织形态学方法检测内膜增生并进行计算机图像分析,RT-PCR方法检测内皮型一氧化氮合成酶及诱生型一氧化氮合成酶的表达情况。结果与结论：①干细胞组内膜面积低于损伤组（P〈0.05）。②损伤组内皮型一氧化氮合成酶mRNA明显低于对照组,诱生型一氧化氮合成酶mRNA表达高于对照组（P〈0.05）。③干细胞组内皮型一氧化氮合成酶mRNA及诱生型一氧化氮合成酶mRNA表达均明显高于损伤组（P〈0.05）。提示Thy-1.1干细胞局部移植可抑制内膜增生,对球囊损伤具有修复作用,这可能与Thy-1.1干细胞增加一氧化氮合成酶的表达,促进大鼠颈总动脉球囊损伤后再内皮化有关。

免疫磁珠分选系统在分离大鼠骨髓干细胞群中的应用

采用免疫磁珠分选系统(MACS)分离大鼠骨髓Thy-1.1+干细胞群。收集大鼠胫骨和股骨的骨髓细胞,Percoll密度梯度离心分离单个核细胞,Thy1.1单抗标记,间接MACS分离纯化Thy-1.1+干细胞群,流式细胞仪检测其纯度和分选前后CD34+百分比,台盼兰拒染法检测细胞活力,计算回收率。结果表明分选后的Thy-1.1+细胞纯度达94.2%,回收率64.7%;分选后细胞活力为99.6%,与分选前99.8%无明显差异;分选前CD34+百分比为1.2%,与分选后1.3%无差异。MACS能有效分选大鼠骨髓Thy-1.1+干细胞群,所得细胞纯度高,细胞活力保持好。大鼠Thy-1.1抗原与CD34分子无明显相关性。

Thy1．1干细胞移植能抑制动脉损伤后内膜增生

目的探讨大鼠Thy-1．1干细胞局部移植对大鼠颈总动脉球囊损伤后内膜增生的影响，评价干细胞移植对再狭窄的作用。方法雌性SD大鼠60只随机分为2组，每组30只，即于细胞移植组：于颈总动脉球囊损伤后即刻将约5×10^6 Thy-1．1干细胞注入至损伤血管局部；对照组：颈总动脉球囊损伤后局部注入等量生理盐水。另有30只4～6周龄雄性SD大鼠提供骨髓Thy-1．1干细胞。2组各于术后即刻、3d、7d、14d、28d取损伤血管段，病理组织学方法观察细胞增殖情况，原位杂交方法观察移植细胞的定植、分化情况，RT-PCR方法分析内皮型一氧化氮合酶（eNOS）的表达情况。结果干细胞移植组内膜面积低于对照组[I／M，干细胞移植组：2．06±0．28比对照组2．42±0．19，P〈0．05]，干细胞移植组内皮型一氧化氮合酶（eNOS）的表达明显高于对照组[-eNOSmRNA，干细胞移植组：0．44±0．06比对照组0．35±0．02，P〈0．0S]，干细胞移植组原位杂交图片中可见内皮细胞有移植的异体细胞。结论Thy-1．1干细胞局部移植可促进大鼠颈总动脉球囊损伤后再内皮化，抑制内膜增生，预防血管成形术术后再狭窄。