IGFBP5增龄性表达促进胸腺上皮细胞线粒体自噬和凋亡

目的 探讨在胸腺上皮细胞中随年龄增长而上调表达的胰岛素样生长因子结合蛋白5(Insulin Like Growth Factor Binding Protein 5,IGFBP5)在胸腺衰退中的作用和机制。方法 使用基因差异表达分析方法从已发表人胸腺基质细胞单细胞数据集(GSE147520)中筛选出随年龄增长表达上调程度最高的基因IGFBP5;Mfuzz趋势分析筛选出与IGFBP5具有相同表达趋势的基因;富集分析注释与IGFBP5共趋势基因集;使用蛋白序列比对工具研究IGFBP5蛋白氨基酸序列的人鼠同源性;使用NIH基因数据库研究IGFBP5在人鼠器官组织中表达模式;免疫组化研究IGFBP5在不同年龄C57/BL6小鼠胸腺中的表达模式;构建IGFBP5过表达胸腺上皮细胞系;透射电镜观察IGFBP5过表达胸腺上皮细胞系中线粒体的形态变化;免疫蛋白印记(Western Blot, WB)对线粒体及全细胞组分线粒体自噬标志物微管相关蛋白1B(Microtubule Associated Protein 1 Light Chain 3 Beta, LC3B)、PTEN诱导激酶1(Pten Induced Kinase 1, PINK1)、Parkin泛素蛋白连接酶(Parkin Rbr E3 Ubiquitin Protein Ligase, Parkin)、BCL2互作蛋白3(BCL2 Interacting Protein 3, BNIP3),细胞凋亡标记物活化型胱天蛋白酶3 (Cleaved-Caspase3)表达水平进行检测;细胞双重免疫荧光对线粒体标志物与线粒体探针(MitoTracker)胞内定位进行检测;使用流式细胞术(Flow Cytometry, FCM)对细胞系凋亡水平进行检测。结果 IGFBP5是人胸腺上皮细胞中随年龄增长表达上调程度最大的基因,与其具有共同表达模式的基因集显著富集在线粒体相关通路上。人与小鼠IGFBP5蛋白序列高度保守,其在人、小鼠多器官组织中表达模式相近,且IGFBP5在人、小鼠胸腺中均呈现中等表达水平;此外,IGFBP5在人和小鼠胸腺上皮中随年龄增长表达升高;在IGFBP5过表达小鼠胸腺上皮细胞系中,透射电镜结果表明线粒体自噬体增多,WB结果表明线粒体组分和细胞组分LC3B、PINK1、Parkin蛋白表达水平上调,BNIP3无明显差异;细胞双重免疫荧光结果表明LC3B、PINK1、Parkin蛋白胞质表达增多且与线粒体共定位;WB表明IGFBP5过表达鼠胸腺上皮细胞系中细胞凋亡标志物Cleaved-Caspase3水平升高;FCM表明IGFBP5过表达细胞系凋亡细胞比例增加。结论 人、小鼠胸腺上皮细胞中随年龄增长而表达升高的IGFBP5促进线粒体自噬和细胞凋亡,从而导致胸腺上皮细胞减少和胸腺功能衰退,因此,IGFBP5可成为干预胸腺衰老、重构人体免疫力的潜在靶标。

胸腺蛋白治疗消化性溃疡出血的疗效观察

目的观察胸腺蛋白对消化性溃疡出血的治疗及预防复发作用。方法将185例消化性溃疡合并上消化道出血的患者随机分为单纯奥美拉叹组和奥美拉唑＋胸腺蛋白组，每组分别为91例和94例。统计分析两组消化性溃疡出血的平均止血时间、治疗有效率及随访1年的出血复发率。结果奥美拉唑＋胸腺蛋白组与单纯奥美拉唑组比较，胃溃疡出血的平均止血时间下降有非常显著差异（P＜0．01）；而十二指肠球部溃疡出血的平均止血时间下降有显著差异（P＜0．05）。治疗胃溃疡出血、十二指肠球部溃疡出血的有效率无显著差异（P＜0．05）；但胃溃疡出血及十二指肠球部溃疡出血1年复发率下降分别有显著差异（P＜0．05）和非常显著差异（P＜0．01）。结论胸腺蛋白有缩短消化性溃疡出血的止血时间及预防出血复发作用。

胃安素对大鼠慢性实验性胃溃疡愈合的影响

用不同剂量的胃安素(胸腺蛋白,TP)治疗大鼠慢性实验性胃溃疡。结果:1.TP_1(10mg·kg^(-1)·d^(-1)),TP_2(15mg·kg^(-1)·d^(-1))组大鼠溃疡面在喂药10天后均缩小,与盐水对照组比较,分别有高度显著性(P<0.01)和显著性差异(P<0.05),TP_1与TP_2两组面积比较有显著性差异(P<0.05);2.喂药20天大鼠胃溃疡完全愈合率比较:TP_1(75.0％)>TP_2(50.0％),高剂量的TP_3(50mg.kg^(-1)·d^(-1))组无效,其愈合率(5.0％)低于盐水对照组(15.0％);胃安素与西咪替丁联合应用效果最佳,其愈合率(94.47％)与对照组(15％,P<0.05)及西咪替丁组(55.0％,P<0.05)比较具有显著性差异。结果表明,一定剂量的胃安素能促进大鼠慢性实验性胃溃疡的愈合,与西咪替丁合用能更有效地提高溃疡的治愈率。

胸腺蛋白对消化性溃疡愈合质量影响的临床研究

目的研究胸腺蛋白对消化性溃疡愈合质量的影响。方法雷尼替丁联合胸腺蛋白对39例胃溃疡和46例十二指肠球部溃疡患者治疗6周,与单用雷尼替丁组的愈合率和内镜下再生粘膜成熟度进行对照性研究。结果合用胸腺蛋白治疗6周,胃溃疡愈合率为84.51%,十二指肠球部溃疡愈合率为91.30%,与单用雷尼替丁的对照组无显著性差异(P>0.05)。而胃溃疡的愈合质量指数(Sc百分比)为41.03%,十二指肠球部溃疡的Sc百分比为43.47%,均显著高于单用雷尼替丁的对照组(P<0.05)。结论胸腺蛋白能在溃疡愈合的基础上显著提高愈合质量。

强力霉素抑制丝裂霉素诱导的MTEC1细胞凋亡及其蛋白质组初步分析

目的:探讨强力霉素(doxycycline,Dox)保护胸腺上皮细胞的作用及其机制,为进一步研究Dox的免疫调节作用奠定基础。方法:利用光学显微镜观察Dox对丝裂霉素(mitomycin,MMC)诱导MTEC1凋亡的影响,同时采用Hochest33342、PI单染、Annexin V和PI双染确认其作用,最后利用表面加强激光解析电离飞行时间质谱技术分析了SAX2芯片捕获的Dox作用前后的差异蛋白质。结果:通过形态学观察、Hochest33342、PI单染及Annexin V和PI双染发现Dox确实能保护MTEC1抵抗丝裂霉素诱导的细胞凋亡。随后采用表面加强激光解析电离飞行时间质谱技术分析SAX2芯片捕获蛋白,发现Dox能调控15种蛋白,其中上调8种,下调7种。结论:Dox具有保护MTEC1,抑制MMC诱导的细胞凋亡作用,并对MTEC1的蛋白表达有调控作用。

3种方法提取胸腺组织蛋白双向电泳纯化结果比较

目的:选择合适的胸腺组织蛋白质提取和纯化方法。方法:分别采用组织裂解液法、丙酮沉淀法和蛋白纯化试剂3种方法提取7例重症肌无力患者胸腺组织蛋白质,上样量为1mg蛋白,以17cmpI3～10固相pH梯度胶条做第一向等电聚焦,SDS-PAGE垂直电泳为第二向进行双向电泳(2-DE),考马斯亮蓝染色,图像分析软件分析电泳图谱。结果:利用蛋白纯化试剂法提取的胸腺组织蛋白2-DE凝胶图像纵条纹、横条纹以及背景都明显减少,获得蛋白点数量较其他2种方法增加(P均<0.05)。结论:采用蛋白纯化试剂法提取胸腺组织蛋白,能够获得较好2-DE凝胶图像,为胸腺组织蛋白质组学的研究打下基础。

血清UCP2、TSLP在老年肺炎脓毒症患者中的表达及其预后评估价值

目的探讨血清UCP2、TSLP在老年肺炎脓毒症患者中的表达,及其在老年肺炎脓毒症早期诊断及预后评估中的价值。方法选取2017年7月—2019年7月秦皇岛市第一医院收治的103例肺炎合并脓毒症患者为肺炎脓毒症组,根据其28 d生存状态分为生存组(76例)、死亡组(27例);另取同期该院收治的100例单纯肺炎患者为单纯肺炎组。采用酶联免疫吸附试验检测血清UCP2、TSLP水平,并进行分析。结果肺炎脓毒症组急性生理学和慢性健康状况评估Ⅱ(APACHEⅡ)评分、血清UCP2、TSLP水平高于单纯肺炎组(P<0.05);肺炎脓毒症组血清UCP2、TSLP水平与APACHEⅡ评分呈正相关(r=0.618和0.681,P<0.05);血清UCP2、TSLP及两者联合诊断肺炎脓毒症的曲线下面积分别为0.861(95%CI:0.809,0.912)、0.846(95%CI:0.792,0.901)和0.914(95%CI:0.873,0.954),血清UCP2、TSLP单独诊断肺炎脓毒症的截断值分别为399.47 ng/ml和249.11 pg/ml,此时对应的敏感性分别为71.8%(95%CI:64.20,82.00)和77.7%(95%CI:81.7,94.5),特异性分别为91.0%(95%CI:75.30,90.60)和81.0%(95%CI:78.8,92.9),联合诊断对应的敏感性为84.5%(95%CI:82.9,95.2),特异性为88.0%(95%CI:84.8,96.5),联合诊断敏感性较高。死亡组血清UCP2、TSLP水平高于生存组(P<0.05);年龄≥70岁[HR=2.017(95%CI:1.268,3.210)]、APACHEⅡ评分≥17分[HR=2.162(95%CI:1.343,3.481)]、UCP2高水平[HR=1.983(95%CI:1.236,3.180)]、TSLP高水平[HR=2.416(95%CI:1.533,3.807)]是影响肺炎脓毒症患者预后生存状况的独立危险因素(P<0.05)。结论肺炎脓毒症患者血清UCP2、TSLP水平较高,其对肺炎脓毒症有一定诊断的价值,是影响患者预后的独立危险因素,可为肺炎脓毒症的诊断及预后评估提供参考。

胃安素促细胞增殖及实验性胃溃疡愈合影响因素的研究

为探讨胃内局部环境中胃酸、胃蛋白酶等因素对胃安素(TP)药效的影响,对经人工胃液处理前后三批不同时间制备的TP进行了活力检测及动物模型试验。结果:1.未经人工胃液处理,三批TP(100mg/L)均显示较强的促3T3成纤维细胞增殖活力,而以920620及930713批TP偏低。2.经人工胃液处理0.5、1、2小时,930713、940528二批TP均有活力,以940528批活力较高,即经处理1小时、稀释度为2mg/L时,活力比值X>2.0;而920620批未能测出活力(X<2.0)。3.动物模型实验结果:与对照组比较,930713、940528批TP组溃疡面积在喂药10天后均缩小,具高度显著性差异(P<0.01);920620批TP疗效则不显著(P>0.05)。结果提示,人工胃液条件下pH、胃蛋白酶对TP活力有一定影响,并与其消化作用及TP储存时间长短相关。活力检测与动物模型试验结果相符,并具一定的平行性。

胸腺瘤p53蛋白表达与肿瘤临床病理学特征及预后关系的研究

应用免疫组织化学方法（S－P法）观察54例胸腺瘤p53蛋白表达及其与肿瘤临床病理学特征和预后的关系．结果显示：18例侵袭型胸腺瘤中11例p53蛋白阳性（61．1％），36例非侵袭型胸腺瘤中7例p53蛋白阳性（19．4％）（P＜0．05）；单纯性胸腺瘤48例（其中上皮细胞型9例、淋巴细胞到17例、混合型22例）中12例p53蛋白阳性（25．0％），胸腺类癌2例及胸腺癌4例p53蛋白均阳性（P＞0．05）；有MG者17例中7例p53蛋白阳性（41．2％），无MG者37例中11例p53蛋白阳性（29．7％）（P＞0．05）；p53蛋白阳性患者生存率较p53蛋白阴性者低（P＜0．05）。结果提示：胸腺瘤p53蛋白过度表达可为侵袭型胸腺瘤诊断提供一定的依据，且可作为估计患者预后的指标。

p53基因表达蛋白在胸腺瘤中的表达

为观察ｐ５３基因蛋白在胸腺瘤中的表达及其与肿瘤临床病理学特征和预后的关系。采用ＳＰ免疫组织化学方法观察ｐ５３基因蛋白在５４例胸腺瘤组织中的表达情况。结果显示：１８例侵袭型胸腺瘤中１１例ｐ５３蛋白阳性（６１．１％），３６例非侵袭型胸腺瘤中７例ｐ５３蛋白阳性（１９．４％，Ｐ＜０．０５）；单纯性胸腺瘤４８例中１２例ｐ５３蛋白阳性（２５．０％），胸腺类癌２例和胸腺癌４例ｐ５３蛋白均阳性（Ｐ＞０．０５）；有重症肌无力（ＭＧ）的１７例中７例ｐ５３蛋白阳性（４１．２％），无ＭＧ的３７例中１１例阳性（２９．７％，Ｐ＞０．０５）；ｐ５３蛋白阳性患者生存率较阴性者低（Ｐ＜０．０５）。说明胸腺瘤ｐ５３蛋白过度表达在鉴别良恶性病变时具有一定临床意义，可作为判断患者预后的一个重要指标。

胸腺基质淋巴细胞生成素在溃疡性结肠炎患者结肠黏膜组织中的表达

目的:探讨胸腺基质淋巴细胞生成素(thymic stromal lymphopoietin,TSLP)在溃疡性结肠炎(ulceratvie colitis,UC)患者结肠黏膜组织中的表达,分析TSLP基因表达水平与C反应蛋白(C reactive protein,CRP)、红细胞沉降率(erythrocyte sedimentation rate,ESR)的相关性及其临床意义.方法:收集30例UC患者和20例健康对照者为研究对象,采用实时定量PCR法对比UC患者病变部位结肠黏膜和对照组结肠黏膜组织中TSLP mRNA表达水平.速率散射比浊法测定CRP水平,全自动红细胞沉降系统分析仪测定ESR水平.结果:UC患者结肠黏膜组织中TSLP mRNA的表达水平为(55.6±3.4),明显高于对照组(17.6±2.8,P<0.05).UC患者结肠黏膜组织中TSLP mRNA的表达与CRP及ESR水平呈正相关(r=0.492,P<0.05;r=0.324,P<0.01);TSLP mRNA的表达与病变范围及疾病活动指数明显相关:随着疾病活动度的增加,TSLP的表达增加(P<0.05),随着病变范围的扩大TSLP表达增加(P<0.01).结论:UC患者结肠组织中TSLP mRNA表达水平明显高于对照组,增高的TSLP基因水平与疾病活动度呈正相关,提示TSLP在UC的发病中可能起到重要作用.

小鼠胸腺上皮细胞系MTEC1产生30kD的MCP-1类趋化因子

髓质型小鼠胸腺上皮细胞系MTEC1自发分泌趋化因子(Chemokines),细胞培养上清先经CPG珠(Controlled-pore glass beads)初步浓缩纯化,再依次经肝素-Sepharose柱亲和层析、阳离子交换FPLC及RP-HPLC分离纯化,得到了一个30kD的蛋白质分子,对淋巴细胞和单核巨噬细胞均有趋化活性。此蛋白分子N端封闭,因而先经甲酸水解得到蛋白片段,分析了其中24个氨基酸的序列,发现其与小鼠MCP-1/JE(Monocyte Chemoattractant Pro-tein-1)完全相同。以上结果说明,MTEC1产生的是mMCP-1/JE类趋化因子。

CRP cTnT TSLP miR-30c-5p水平与稳定型心绞痛患者冠状动脉病变严重程度关系

目的:探讨C反应蛋白(CRP)、心肌肌钙蛋白T(cTnT)、胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)、miR-30c-5p水平与稳定型心绞痛(SAP)患者冠状动脉病变严重程度的关系。方法:回顾性分析2016年5月至2019年5月间医院收治的经冠状动脉造影(CAG)证实的90例SAP患者的临床资料,根据SYNTAX评分分为轻度组(0~22分,41例)、中度组(23~32分,32例)、重度组(≥33分,17例)。收集三组患者的临床资料,采血检测三组患者的CRP、cTnT、TSLP、miR-30c-5p水平,三组患者的冠状动脉病变严重程度用SYNTAX评分评估,用Pearson相关性分析CRP、cTnT、TSLP、miR-30c-5p水平与SYNTAX评分的关系。结果:三组患者的CRP、cTnT、TSLP、miR-30c-5p水平及SYNTAX评分比较,差异均具有统计学意义(P均<0.05),两两对比LSD-t检验,差异均具有统计学意义(P均<0.05)。Pearson相关性分析显示,CRP、cTnT、TSLP与SYNTAX评分均呈显著正相关(P<0.01),而miR-30c-5p与SYNTAX评分呈显著负相关(P<0.01)。结论:CRP、cTnT、TSLP、miR-30c-5p水平与稳定型心绞痛患者冠状动脉病变严重程度存在相关性,早期检测以上生物学标志物有助于判断稳定性心绞痛患者的冠状动脉病变严重程度。

胸腺因子制备工艺的改良及活性测定

对胸腺因子的传统制备方法进行了改良，并进行蛋白质含量及生物活性测定．结果表明，改进工艺后蛋白质含量为１１．６４ｇ／Ｌ，比用原工艺制备提高３倍，生物活性亦比用原工艺制备有明显提高．

p53蛋白与PCNA在胸腺上皮性肿瘤中的表达及其意义

目的 探讨p5 3蛋白和增殖细胞核抗原 (PCNA )在胸腺上皮性肿瘤中表达的意义及相互关系。方法 采用S P免疫组化法 ,检测良性胸腺瘤 18例 ,恶性胸腺瘤 16例 ,胸腺癌 16例的 p5 3蛋白与PCNA的表达。 结果 p5 3蛋白和PCNA的Ⅲ～Ⅳ级指数在 3组胸腺上皮性肿瘤中阳性表达率分别为 3 3 .3 % ( 6/18) ,62 .5 % ( 10 /16) ,81.3 % ( 13 /16)和 3 8.9% ( 7/18) ,68.8% ( 11/16) ,81.3 % ( 13 /16) ,(P <0 .0 5 ) ;其阳性表达率与临床分期、淋巴结转移密切相关 (P <0 .0 5 )。结论 p5 3蛋白和PCNA阳性表达率可提示肿瘤恶性程度及其侵袭力和转移能力。

胸腺蛋白肽粉对人体免疫力的影响

目的探讨胸腺蛋白肽粉对健康人群人体免疫力的影响。方法10名健康志愿者,年龄24~43岁,服用胸腺蛋白肽粉,一日1次,连续60 d,分别于服用前、服用后第14,30,60天采血检测细胞免疫指标。结果CD4^(+)/CD8^(+)比值、CD4^(+)CD45RA^(+)、CD8^(+)CD45RA^(+)、CD3^(+)HLA-DR^(+)、Treg、Tc、Tn、Tm的水平升高(P<0.05),CD3^(+)HLA-DR-的水平降低(P<0.05)结论胸腺蛋白肽粉可促进T细胞分化、发育成熟,从而增强人体细胞免疫功能,提高人体免疫力。

血清TSLP、炎症因子水平与脓毒症患者预后的相关性分析

目的:分析血清胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)、炎症因子水平与脓毒症患者预后的相关性。方法:回顾性分析2017年1月-2019年1月本院收治的50例脓毒症患者的临床资料,将发病后28 d救治无效死亡的10例患者作为病死组,其余40例患者作为存活组。对比两组脓毒症严重状况、临床指标(TSLP及各类炎症因子)水平,并进行多因素分析。结果:相比存活组,病死组年龄显著大(P<0.05),有意识障碍、脓毒性休克、合并慢性病的患者占比均明显高(P<0.05),急性生理与慢性健康评分(APACHEⅡ)、尿素氮、血乳酸、C反应蛋白(CRP)、降钙素原(PCT)、TSLP水平均显著高(P<0.05);两组性别、吸烟史、饮酒史、白细胞计数、白蛋白(ALB)水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。Logistic回归分析显示年龄、合并慢性病、APACHEⅡ评分、血乳酸、CRP、PCT、TSLP是脓毒症患者预后不良的独立危险因素(P<0.05)。脓毒症患者预后与血乳酸、CRP、PCT、TSLP均呈负相关(P=0.000)。结论:血清TSLP与CRP、PCT等炎症因子水平与脓毒症患者预后紧密相关,可作为判断病情严重程度的重要指标。

海藻糖毒性的研究

海藻糖 (trehalose)作为一种生物保护剂 ,其安全性是一项重要的质量指标。本文通过对酵母中提取的海藻糖进行最大耐受量、急性毒性及过敏性等的研究 ,证明海藻糖对动物无毒无害 ,无副作用 ,从而推测出海藻糖在人体使用不会产生不良反应 ,即是安全的。

盐酸氨溴索联合N-乙酰半胱氨酸对慢性阻塞性肺病患者血清胸腺基质淋巴生成素和嗜酸粒细胞阳离子蛋白的影响

目的考察盐酸氨溴索联合N-乙酰半胱氨酸治疗慢性阻塞性肺病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)前后对血清中胸腺基质淋巴生成素(thymic stromal lymphopoietin,TSLP)和嗜酸粒细胞阳离子蛋白(eosinophilic cationic protein,ECP)水平的影响。方法收集2013年10月至2016年10月在南京大学医学院附属南京胸科医院收治且确诊的COPD急性发作期患者106例,经医院伦理委员会批准,并经患者签署知情同意书后,将全部患者随机分为2个组:对照组(51例)和观察组(55例),另外选择同期50例健康体检者为健康对照组。结果治疗前,对照组和观察组患者的1秒用力呼气容积(forced expiratory volume in one second,FEV1)占预计值比例较低(P<0.05),TSLP和ECP水平较高(P<0.05);治疗后,FEV1占预计值百分增高(P<0.05),TSLP和ECP水平减少(P<0.05)。与对照组比,观察组的FEV1占预计值百分比明显增高(P<0.05),TSLP和ECP水平明显减少(P<0.05)。2组在治疗过程中未发生明显的不良反应。与对照组比,观察组的总有效例数较多(P<0.05)。结论盐酸氨溴索联用N-乙酰半胱氨酸治疗慢性COPD安全有效,可间接降低血清TSLP和ECP水平。

哮喘患者血清TSLP,ECP的表达水平及临床意义

目的 观察支气管哮喘患者血清中胸腺基质淋巴生成素（TSLP）、嗜酸细胞阳离子蛋白（ECP）的表达水平及其临床意义.方法 选择健康对照组25例、哮喘急性发作组30例及哮喘缓解组25例,分别采集各组患者静脉血,采用双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）测定血清TSLP,ECP浓度,进行统计学处理并分析相关性.结果 哮喘组血清中TSLP,ECP表达水平明显高于对照组,急性发作期明显高于缓解期（P均＜0.05）.且哮喘患者血清TSLP,ECP表达成显著相关（r=0.795,P＜0.01）.结论 血清TSLP,ECP表达水平与气道炎症有密切关系,可反映哮喘患者疾病的严重程度,有助于哮喘发病炎症机制的研究.