抗大肠癌噬菌体人单链抗体的初步鉴定及序列分析

目的 :对抗大肠癌细胞的单克隆噬菌体单链抗体进行初步鉴定和测序分析。方法 :采用细胞ELISA ,免疫组化 ,DNA序列测定和计算机分析方法 ,对 5个单克隆噬菌体抗体 (CH2 73,CH2 0 5 ,CH2 0 9,CHA12 ,CH72 3)进行初步鉴定和序列分析。结果 :5个抗体均对人大肠癌细胞、人胚肾上皮细胞和其它某些人肿瘤细胞反应 ,也与人正常肝细胞有弱阳性反应 ,但不与鼠源性的癌细胞和正常细胞反应。细胞免疫组化进一步证实了ELISA结果的正确性。大肠癌免疫组化对大肠癌组织有特异性的结合反应 ,而不与正常大肠组织反应。测序结果为CH2 73ScFv全长 732bp ;V ,D ,J分别属于VH3 30 D1 2 6 JH3 linker V1 13 JL2 ,GenBank序号为AY0 2 8777和AY0 2 8996 ;CH2 0 5全长 36 6bp ,V ,D ,J分别VH1 4 6 D6 13 JH3,GenBank序号为AF35 936 5 ;CH2 0 9,CHA12和CH72 3的ScFv基因完全相同 ,全长 72 3bp ,其VH DH JH与CH2 73ScFv基因中的VH DH JH 完全一致 ,V ,D ,J分别属于VH3 30 D1 2 6 JH3 linker L2 Jκ2 ,GenBank序号为AF36 3774。结论 :噬菌体抗体具有结合人大肠癌组织和细胞的活性 。

抗甲状腺刺激性免疫球蛋白单链抗体基因的构建及序列测定

目的 构建抗甲状腺刺激性免疫球蛋白(Thyroid stimulating immunoglobulin,TSI)单链抗体基因,获得基因序列。方法 利用噬菌体表面呈现技术,结合间接ELISA方法和竞争抑制实验,筛选出抗TSI单链噬菌体抗体,进一步获得抗TSI单链抗体,对抗TSI单链抗体基因进行测序。结果 抗TSI单链抗体基因长759bp,其中VL长342bp,VH长372bp,具有开放性阅读框架,为功能性基因。结论 抗TSI单链抗体基因构建成功,噬菌体表面呈现技术为获得功能性单链抗体基因的可靠方法。

抗甲状腺刺激性免疫球蛋白单链抗体在大肠杆菌中的表达

目的 制备可溶性抗甲状腺刺激性免疫球蛋白 (TSI)单链抗体。方法 构建的抗TSI单链抗体可溶性表达载体 ,转化E .coliXL 1-blue进行表达 ,表达产物经SDS -PAGE、Westernblotting和ELISA检测 ,同时对表达条件作了初步探索。结果 抗TSI单链抗体可溶性表达于细菌培养上清和周质间隙 ,大小约 30KDa ,具有抗TSI活性。温度、诱导物浓度及蔗糖对抗TSI单链抗体的表达产量有一定影响。结论 抗TSI单链抗体可溶性表达成功 。

抗甲状腺刺激性免疫球蛋白单链抗体噬菌体抗体库的初建

目的 建立抗甲状腺刺激性免疫球蛋白单链抗体噬菌体抗体库,为进一步获得功能性抗体可变区基因,制备单链抗体和单链抗体-辣根过氧化物酶融合蛋白,用于甲状腺自身免疫性疾病的治疗和检测打下基础。方法 利用RT-PCR技术从分泌抗甲状腺刺激性免疫球蛋白的杂交瘤细胞中扩增出轻重链可变区基因,与噬粒表达载体p3SCMH连接,转化大肠杆菌,以甲状腺刺激性免疫球蛋白阳性患者血清IgG为抗原对表达的噬菌体抗体进行筛选。结果 经过三轮“吸附-洗脱-富集”筛选过程,洗脱下来的噬菌体呈现明显富集,收获率增加了40倍。结论 初步建立了抗甲状腺刺激性免疫球蛋白单链抗体的噬菌体抗体库。