Tiam1基因慢病毒表达载体构建及其在HT29细胞中的表达

目的:构建Tiam1与绿色荧光蛋白(GFP)融合基因慢病毒表达载体,观察其在人结直肠癌HT29细胞中的表达。方法:通过酶切Tiam1/C1199HA质粒获得Tiam1cDNA片段,并将其克隆到慢病毒载体表达质粒pCDF1-copGFP中,经酶切、测序鉴定。慢病毒表达质粒和包装质粒共转染293FT细胞,获得携带Tiam1和GFP融合基因的重组慢病毒。取病毒上清感染人结直肠HT29细胞株,荧光显微镜检测绿色荧光蛋白及免疫细胞化学检测Tiam1在靶细胞中的表达。结果:重组慢病毒质粒pCDF1-Tiam1-copGFP酶切鉴定结果与目的基因条带吻合,克隆测序结果与NCBI收录的Tiam1基因序列(NM_003253)完全一致。重组慢病毒质粒可高效转染293FT细胞,病毒包装效率为88.34%。收获慢病毒上清可高效感染HT29细胞,荧光显微镜下可观察到大量绿色荧光,感染效率为55.89%,感染后靶细胞中Tiam1稳定高表达。结论:成功构建了携带Tiam1与GFP融合基因的慢病毒表达载体pCDF1-Tiam1-copGFP,并使目的基因在靶细胞中得到稳定表达,为进一步研究Tiam1基因的相关功能提供了优质的稳定转染载体。

表达谱基因芯片筛选结直肠癌转移中Tiam1相关基因

目的筛选在结直肠癌远处转移中T细胞淋巴瘤侵袭转移1(T-cell lymphoma invasion and metastasis 1,Tiam1)相关基因并鉴定其表达。方法腹腔注射二甲基肼(dimethylhydrazine,DMH)建立小鼠结直肠癌模型,收集Tiam1转基因小鼠和野生型小鼠的结直肠癌原发灶新鲜组织5对,应用Affymetrix小鼠全基因组表达谱芯片检测两组的差异表达基因,qRT-PCR技术验证部分差异基因以确定结果的可靠性。结果基因芯片检测结果显示差异在3倍以上的基因共794个,有远处转移的Tiam1转基因小鼠结直肠癌组织中表达上调的基因共400个,下调基因共394个;通过生物信息学分析及GENEMANIA共表达网络构建,筛选3个(PIK3R5、FIGF、RPS6KA6)特异相关的差异基因进行qRT-PCR技术验证,验证结果与基因芯片结果检测相符。结论通过基因芯片技术筛选和鉴定结直肠癌转移中Tiam1相关基因,建立了特异性结直肠癌转移表达谱,为寻找结直肠癌远处转移的分子标志物提供依据。

Tiam1基因在胃癌中的表达及意义

目的研究Tiam1表达与胃癌浸润转移及其与病人预后的关系。方法应用FITC标记的免疫荧光法检测52例人胃癌及20例正常胃黏膜组织中Tiam1蛋白的表达。结果50例胃癌和20例正常黏膜组织中Tiam1的阳性分别为75%和10%。Tiam1蛋白在胃癌组织中的表达水平与病人的年龄、性别及肿瘤的大小无关(U值分别为0.5132,0.2597,1.1708,P>0.05);但与胃癌组织的分化程度、浸润深度、淋巴结的转移情况、肿瘤的分期以及病人的五年存活情况具有显著相关性(U值分别为3.1838,3.0430,2.2597,5.1035,4.3266,P<0.05)。随着胃癌组织分化程度的降低,浸润深度的加深,Tiam1蛋白染色阳性率逐渐上升,Tiam1阳性率增高提示预后不良。结论Tiam1蛋白的表达与胃癌浸润转移呈相关关系,并与多种临床病理因素相关,可为胃癌浸润转移的防治和病人的预后判定提供有价值的参考。

MMP-2和Tiam1蛋白表达与胃癌生物学行为相关性的实验研究

目的探讨胃组织中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和T淋巴瘤侵袭转移诱导因子1(Tiam1)基因的表达与胃癌生物学行为的相关性。方法应用S-P免疫组化法,对40例胃癌手术切除标本进行抗人MMP-2单克隆抗体和Tiam1多克隆抗体免疫组化染色,检测癌组织、癌旁组织、手术切缘区正常组织各区域MMP-2和Tiam1蛋白表达,并分析二者之间及二者的表达与胃癌临床病理特征之间的关系。结果 MMP-2和Tiam1蛋白表达在癌组织与手术切缘区正常组织、癌组织与癌旁组织、癌旁组织与正常手术切缘区组织之间差异均具有显著性。癌组织中MMP-2和Tiam1蛋白表达在患者性别、年龄之间无显著性差异,而与肿瘤分化程度、浸润深度、淋巴结及远处转移、临床TNM分期均呈正相关;且两种蛋白表达彼此间具有相关性,即同时表达阳性的胃癌病例具有更为恶性的生物学特征。结论MMP-2和Tiam1在胃癌的发生和侵袭转移中可能起着重要作用,检测MMP-2和Tiam1的表达有望成为判断胃癌病变发展、预测肿瘤转移潜能的客观指标。

Tiam1基因表达与鼻咽癌浸润转移的关系

目的:探讨Tiam1基因表达与鼻咽癌浸润转移的关系。方法:应用RT-PCR技术,对41例鼻咽癌组织和20例正常鼻咽部组织进行Tiam1mRNA表达水平的检测。结果:41例鼻咽癌组织的Tiam1mRNA平均表达水平(1.83±0.73)明显高于正常鼻咽部组织(0.87±0.45)(P<0.01);鼻咽癌组织中Tiam1mRNA高表达率与临床分期、T分级呈正相关;有淋巴结转移者Tiam1mRNA高表达率为59.3%(16/27),无淋巴结转移者为21.4%(3/14),二者之间差异有统计学意义(P<0.05)。结论:Tiam1基因在鼻咽癌组织中的表达明显高于正常鼻咽部组织,其过表达与鼻咽癌浸润转移呈正相关。

Tiam1在乳腺癌中的表达及其意义

目的探讨Tiam1在正常乳腺组织、乳腺癌组织及不同侵袭能力乳腺癌细胞系中的表达情况。方法应用免疫组化方法检测Tiam1在60例乳腺癌组织和34例正常乳腺组织中的表达。应用Westernblot方法检测Tiam1在乳腺癌细胞系MDA-MA-231(高侵袭)和MCF-7(低侵袭)中的表达。结果Tiam1阳性率在正常乳腺组织(41%)中明显低于乳腺癌组织(71.7%,P<0.01),Tiam1在乳腺癌组织中的表达与肿瘤的TMN分期、是否发生淋巴结转移以及病理分级密切相关(P<0.05)而与肿瘤的大小无关。Tiam1总蛋白在乳腺癌高侵袭细胞系中的表达量高于低侵袭细胞系,差异具有显著性(P<0.05)。结论Tiam1在乳腺癌中的表达与其转移侵袭相关,可能是判断预后的一个潜在指标。

T淋巴瘤侵袭转移诱导基因1在头颈部鳞状细胞癌中的表达及意义

目的探讨T淋巴瘤侵袭转移诱导基因1(Tiam1)表达与头颈部鳞状细胞癌浸润转移的关系。方法应用逆转录-PCR(RT-PCR)技术,对91例头颈部鳞状细胞癌组织和30例头颈部正常组织进行Tiam1 mRNA表达水平的检测,并结合临床特点进行分析。结果 Tiam1 mRNA在91例头颈部鳞状细胞癌组织中的表达水平明显高于头颈部正常组织,差异有统计学意义(P<0.01)。Tiam1 mRNA在淋巴结癌、扁桃体癌及中耳癌组织中的表达水平明显高于头颈部正常组织。Tiam1mRNA在不同分期、有无淋巴结转移的鼻咽癌、喉癌及上颌窦癌中的表达差异均有统计学意义(P<0.01)。结论 Tiam1 mRNA在头颈部鳞状细胞癌浸润转移过程中可能起重要作用,可成为判断头颈部鳞状细胞癌预后的指标之一。