跳骨片水提物对体外大鼠关节软骨细胞活性的影响

目的:探讨跳骨片水提物对体外大鼠关节软骨细胞活性的影响。方法:4周龄SPF级SD大鼠5只,采用机械-Ⅱ型胶原酶消化法获取膝关节软骨细胞,倒置相差显微镜观察软骨细胞的形态结构,Ⅱ型胶原免疫组化染色鉴定软骨细胞。0,25,50,100μg·mL^(-1)跳骨片水提物对第3代软骨细胞,分别干预24,48,72 h后,MTT法检测细胞活性。结果:1Ⅱ型胶原免疫组化染色后软骨细胞胞浆呈棕黄色,为阳性;2以0μg·mL^(-1)跳骨片水提物干预的软骨细胞作为对照组,干预24 h后,50μg·mL^(-1)组软骨细胞活性明显高于对照组(P<0.05);干预48 h后,25,50μg·mL^(-1)组明显高于对照组(P<0.05);干预72 h后,25,50,100μg·mL^(-1)组与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:跳骨片水提物在25,50,100μg·mL^(-1)时均可以促进软骨细胞的增殖,具有剂量和时间依赖性,其中50μg·mL^(-1)干预24 h后最为明显。

跳骨片调控Wnt/β-catenin信号通路延缓骨关节炎关节软骨退变的机制研究

目的:探讨跳骨片调控Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路保护骨关节炎关节软骨的机制。方法:将30只2月龄雄性SD大鼠随机分为空白对照组、模型对照组、跳骨片组,每组10只。采用改良Hulth法建立骨关节炎动物模型。造模成功后跳骨片组给予跳骨片0.32 g·kg^(-1)·d^(-1)灌胃,空白对照组和模型对照组给予等量生理盐水灌胃,干预12周后取大鼠关节软骨。Real-time PCR检测关节软骨β-catenin、Frizzled-2、GSK-3β、CKIεmRNA表达,Western blot法检测关节软骨CKIε、CollagenⅡ、PGS1蛋白表达,Massion染色法观察3组关节软骨胶原的表达及形态变化。结果:Real-time PCR结果显示,与空白对照组比较,模型对照组关节软骨β-catenin、Frizzled-2、CKIεmRNA表达明显上升(P <0.05,P> 0.05,P <0.05),而GSK-3βmRNA表达明显下降(P <0.05);与模型对照组比较,跳骨片组关节软骨β-catenin、Frizzled-2、CKIεmRNA表达明显下降(P <0.05,P> 0.05,P <0.05),而GSK-3βmRNA表达明显上升(P <0.05)。Western blot结果显示,与空白对照组比较,模型对照组关节软骨CKIε蛋白表达明显升高(P <0.05),而CollagenⅡ、PGS1蛋白表达明显降低(P <0.05,P <0.01);与模型对照组比较,跳骨片组关节软骨CKI-ε蛋白表达明显降低(P <0.05),CollagenⅡ、PGS1蛋白表达明显升高(P <0.01,P> 0.05)。Massion染色结果显示,空白对照组和跳骨片组关节软骨结构清晰,软骨层染色明显,软骨组织呈淡蓝色,胶原含量较高;模型对照组软骨层结构紊乱,染色较浅,胶原含量低。结论:跳骨片能调控Wnt/β-catenin信号通路抑制骨关节炎炎症反应,促进细胞外基质的合成,保护关节软骨。