调衡方多糖佐助的树突状细胞肿瘤疫苗增强S180荷瘤小鼠免疫功能并抑制肿瘤生长

目的研究S180荷瘤小鼠经调衡方多糖(ThPP)佐助的树突状细胞(DC)疫苗的免疫治疗作用及其机制。方法获取小鼠骨髓源性细胞体外培养,经细胞因子与ThPP佐助为成熟的DC,观察ThPP对DC表面的CD80与CD86表达的影响。再以S180瘤细胞作为抗原刺激DC使其成为DC肿瘤疫苗。将S180瘤细胞接种小鼠左前肢腋窝使成荷瘤模型,并按体质量将小鼠分为荷瘤空白组、环磷酰胺阳性对照组、ThPP与肿瘤坏死因子α(TNF-α)佐助的DC疫苗组,对荷瘤小鼠分别治疗于接种瘤细胞后第5天与第10天。于第12天处死荷瘤小鼠,称质量并观察抑瘤情况,分离培养腹腔巨噬细胞及免疫组织化学染色法测其CD11b、白细胞介素12(IL-12)的表达;用ELISA检测小鼠血清IL-12、TNF-α的水平;另外设置的4组荷瘤小鼠,按相同方法治疗后观察生存期。结果TNF-α组、ThPP组中的CD80、CD86表达量均高于空白对照组,ThPP组较明显。与荷瘤空白组比较,ThPP组、TNF-α组、阳性对照组的抑瘤率与生存期均显著延长。ThPP组小鼠血清IL-12、TNF-α水平高于环磷酰胺阳性对照组和荷瘤空白组,与TNF-α组类似。ThPP组巨噬细胞的CD11b表达量低于荷瘤空白组与环磷酰胺阳性对照组,而ThPP组巨噬细胞的IL-12表达量高于荷瘤空白组与环磷酰胺阳性对照组,与TNF-α组类似。结论ThPP佐助的DC肿瘤疫苗能抑制S180荷瘤小鼠的肿瘤生长,延长其生存期,与促进DC成熟增加IL-12、TNF-α分泌有关。

调衡方多糖对Lewis肺癌荷瘤体红细胞免疫功能的影响

目的观察调衡方多糖对Lewis肺癌荷瘤小鼠红细胞补体受体1(CR1)功能及活性的影响,探讨该方多糖对荷瘤体红细胞作用的免疫调节机制。方法按照常规法在小鼠右腋皮下接种Lewis肺癌细胞,建立转移性肺癌模型;灌胃给药8d后,次日检测调衡方多糖对瘤体及脾脏、胸腺指数的影响;用红细胞免疫花环实验观察血液中红细胞免疫黏附肿瘤细胞的能力;红细胞免疫复合物花环实验观察荷瘤小鼠红细胞C3b受体的活性;比色法测定荷瘤小鼠红细胞膜唾液酸含量。结果调衡方多糖既可提高脾脏、胸腺指数及抑瘤作用,又可提升荷瘤小鼠红细胞免疫花环率;使荷瘤小鼠红细胞的活性与CR1受体的数量、荷瘤小鼠红细胞膜唾液酸含量增加。结论提示调衡方多糖发挥抑瘤与免疫调节作用的机制可能与其提升Lewis肺癌荷瘤小鼠红细胞膜上唾液酸的量有关,进而使CR1的数量与活性增加,使红细胞的黏附功能增强。

调衡方多糖对巨噬细胞免疫调节作用及信号通路影响

目的研究调衡方多糖(Tiaoheng prescription polysaccharides,ThPPs)对巨噬细胞的调节作用及相关信号通路的影响,探讨其调节机体免疫的作用机制。方法获取小鼠腹腔巨噬细胞(macrophage,Mφ)并体外培养,随机分为空白对照组,LPS模型组(1μg·mL^(-1)),ThPPs小剂量(50μg·mL^(-1))、中剂量(150μg·mL^(-1))、大剂量(250μg·mL^(-1))组。干预24 h后收集细胞,采用CCK-8法考察其增殖活性;采用格里斯试剂法(Griess)检测细胞上清液中一氧化氮(NO)的分泌量;用免疫组化法测巨噬细胞表面白介素-12(IL-12)的表达量;采用实时荧光定量PCR测定Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88(MyD88)、核因子-κB(NF-κB)、肿瘤坏死因子受体相关因子-6(TRAF-6)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的mRNA表达情况。Western blotting法检测TLR4、NF-κB、TNF-α的蛋白表达情况。结果ThPPs中、高剂量组与空白组比较,可显著增强Mφ对NO、IL-12分泌的功能(P<0.01);Real-time PCR与免疫印迹法显示ThPPs中、高剂量组与空白组比较,可显著上调TLR4、TNF-α、NF-κB、MyD88与TRAF-6的基因表达及TLR4、TNF-α、NF-κB的蛋白表达(P<0.01)。结论实验结果显示ThPPs可增强Mφ对NO、IL-12分泌的功能,上调TLR4、TNF-α、NF-κB、MyD88与TRAF-6的基因表达及TLR4、TNF-α、NF-κB的蛋白表达,而IL-12及TNF-α又是调控辅助性T细胞(Th)及Mφ分型的关键细胞因子。ThPPs激活Mφ信号通路可能与增强Mφ对NO、IL-12分泌的功能及活化NF-κB通路有关。