西藏小型猪血液生理生化指标的初步研究

目的探讨西藏小型猪的生理生化指标特性。方法采用全自动血球计数仪和全自动生化仪，对1．5—5月龄西藏小型猪（♂21，♀24）血液的部分生理和生化指标进行测定和分析。结果西藏小型猪血液生理指标的性别差异不显著，部分生化指标性别差异显著；但多数指标在不同月龄间差异极显著（P〈0．01）或显著（P〈0．05），并有近半数项目随月龄的增长呈减少或增加的趋势，其余多无明显的变化规律。所测生理生化指标中部分与巴马小型猪相近，与普通猪差异较大，与人类水平接近。结论西藏小型猪、其他小型猪和人类的生理生化特性有一定的相似性。

西藏小型猪线粒体DNA控制区的分子遗传学研究

通过扩增102头西藏小型猪以及16头巴马小型猪、17头贵州香猪的线粒体DNA控制区,测序并与国内其他猪种进行比较,研究西藏小型猪的遗传标记以及与其他国内地方猪种的亲缘关系。结果显示,西藏小型猪线粒体DNA D-loop区分3个区域。串联重复序列区处于中间位置,包含有15~29个10 bp的重复片段,分为A、B 2种类型。3′端340 bp,与国内其他猪种的序列相同,比较保守 D-loop 5′端704 bp,共有22个变异位点。由22个变异位点中归纳出25个单倍型,其中有2种主要的单倍型,分别占34.4%和36.6%。根据3个转换位点：305、500、691,将西藏小型猪分成了2组,几乎与串联重复序列所分的A、B 2组类型相对应。与西藏小型猪相比,巴马小型猪和贵州香猪D-loop 5′端变异位点较少,分别只有4种和2种单倍型,串联重复区也只有1个类型。说明西藏小型猪可能有2个母系祖先,并且与我国西南地区的猪种有较近的亲缘关系 不同的串联重复片段类型和5′端的变异位点可以联合组建西藏小型猪的遗传标记。

生长激素受体基因突变对西藏藏猪生长迟缓的影响

本研究旨在探索西藏藏猪生长迟缓成因和分子机理。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术对西藏藏猪生长激素受体(GHR)基因克隆,采用生物信息学方法分析西藏藏猪生长激素受体基因与其他常见品种猪基因与蛋白序列差异,并构建GHR基因的真核过表达质粒,转染到西藏藏猪胚胎成纤维细胞(PEFs)上进行瞬时表达,通过MTT检测细胞增殖活性,利用实时荧光定量PCR技术检测细胞的胰岛素样生长因子-1(IGF-1)表达的情况。西藏藏猪GHR基因编码区1 716bp,编码572个氨基酸;与普通猪GHR基因序列进行比对分析表明,在西藏藏猪GHR基因编码区1 225bp处发生T→G突变,导致丝氨酸突变为丙氨酸;GHR基因真核过表达质粒成功转染PEFs后,PEFs生长活性显著提高;qPCR检测表明,细胞株中IGF-1表达显著上调。综上表明,GHR基因的表达可以提高PEFs细胞的增殖活性,诱导IGF-1基因的表达,GHR基因在1 225bp处的点突变可能影响西藏藏猪的生长迟缓。

F1代西藏小型猪早期生长发育特点

目的研究西藏小型猪早期生长发育的规律。方法对本基地F1代西藏小型猪的体重、体长、胸围、体高、体温、呼吸频率、心率及血液生理生化指标进行了测定。结果西藏小型猪体型小,生长性能稳定,生长速度与原产地西藏小型猪基本一致;西藏小型猪的体温、呼吸次数和心率与原产地西藏小型猪相近,且雌雄之间差异不显著(P>0.05);F1代雌雄间除嗜碱性粒细胞、单核细胞数和尿素氮外其他指标也基本一致,大部分指标与人接近。结论由于西藏小型猪体型小、生长性能稳定,血液生理生化值与人类相近,因而是理想的医学研究用实验动物。

亚热带气候环境下西藏小型猪部分血液生理生化指标的比较

目的比较研究西藏小型猪在亚热带气候环境下的部分血液生理生化指标。方法常规方法测定原代和F1代西藏小型猪血液的9项生理和9项生化指标,比较两代之间以及雌、雄之间的不同,并与其他实验动物及人类的同类指标进行对比分析。结果在生化指标中,原代雌雄之间AST差异显著;F1代雌雄之间TG、ALB有差异,BUN、CHOL有显著性差异。在生理指标中,原代雌、雄间无差异,F1代雌雄间MONO有显著性差异。结论西藏小型猪已经基本适应亚热带地区的环境。与其他实验动物相比西藏小型猪许多生理生化指标更接近人类,非常适合替代犬、猴用于生物医学研究。

实验用西藏小型猪原代和第一代间部分血液指标比较

目的:比较来自高原地区的原代西藏小型猪与其广州第一代子猪部分血液生理生化指标的变化。方法:西藏小型猪原代(G0代)25头,G1代35头,常规方法测定血液的9项生理指标(白细胞(WBC)、红细胞(RBC)、血红蛋白(HGB)、血小板(PLT)、淋巴细胞(LYM)、单核细胞(MONO)、粒细胞(NEU)、嗜酸性粒细胞(EOS)、嗜碱性粒细胞(BASO))和9项生化指标(谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总蛋白(TP)、葡萄糖(GLU)、尿素氮(BUN)、肌酐(CREA)、总胆固醇(CHOL)、甘油三酯(TG)、白蛋白(ALB)),比较2代之间以及雌、雄之间18项指标的不同。结果:在西藏小型猪9项生化指标中,G0代雌、雄之间差异无统计学意义,在G1代雌雄之间TP、BUN、CHOL和ALB的差异有统计学意义,2代雌性间CREA、雄性间BUN和CREA的差异均有统计学意义。在9项生理指标中,G0代雌、雄间RBC、HGB的差异有统计学意义;G1代雌、雄之间只有WBC的差异有统计学意义。2代同性别间血液生理指标比较:雌性间WBC、雄性间HGB、WBC、PLT和EOS的差异有统计学意义。其他差异均无统计学意义。结论:2代西藏小型猪之间以及雌、雄之间部分血液生理生化指标的差异有统计学意义。西藏小型猪可以培育成具有独特特性的实验动物。

西藏小型猪线粒体D-loop区及微卫星多态性的遗传学分析

目的通过分析西藏小型猪线粒体控制区(D-loop区)及微卫星位点的遗传多态性,检测西藏小型猪的遗传背景,从而为其作为实验动物提供分子生物学方面的可靠依据。方法利用特异性引物对西藏小型猪的线粒体D-loop区及10个具有多态性的微卫星位点进行扩增,割胶纯化并对线粒体D-loop区进行测序,另外采用聚丙烯酰胺凝胶电泳的方法分离微卫星位点的等位基因。结果西藏小型猪线粒体D-loop区全序列没有多态性,微卫星位点则具有高度的遗传多态性和杂合度,分别为0.584和0.573。结论西藏小型猪线粒体基因组无多态性,证明其在母系进化和遗传上与其他猪种较为一致,本实验所用的西藏小型猪生长于一个封闭的环境,导致其微卫星位点遗传多态性的中低度水平。

西藏小型猪与高原藏猪的血液生理生化值的比较

目的比较西藏小型猪与高原藏猪的血液生理、生化指标的差异。方法采用全自动血液细胞和生化分析仪测定21个血液生理生化指标。结果藏猪与西藏小型猪之间,红细胞、白细胞、血小板计数、总胆固醇、血清甘油三酯指标的测定差异有显著性,谷草转氨酶、血清总蛋白、血清清蛋白、葡萄糖、肌酸激酶指标的测定差异极显著。其中红细胞、白细胞、谷草转氨酶、肌酸激酶的值藏猪高于西藏小型猪,而血小板计数、血清总蛋白、血清清蛋白、葡萄糖、总胆固醇、血清甘油三酯的值藏猪低于西藏小型猪。结论不同的生活环境、气候条件和营养水平会对动物的血液生理、生化值的测定造成一定的影响。

广州地区西藏小型猪的繁殖行为学表现

目的对广州地区西藏小型猪的繁殖性能和繁殖行为进行了观察研究。方法以广州地区雌雄西藏小型猪为研究对象,根据其繁殖卡的详细资料进行分类统计。结果雄性西藏小型猪阴茎首次伸出日龄为(39.50±2.63)d,此时体重为(3.26±0.87)kg;其射精日龄为(65.22±3.69)d,体重为(5.34±1.03)kg。雌性西藏小型猪初情日龄为(142±5.3)d,成年母猪发情周期为(20.35±0.72)d,发情持续期(4.2±0.31)d;其妊娠期约为114 d左右。初产雌性西藏小型猪产仔数为(2.30±0.82)头,2月龄断乳存活率为86.5%;而经产雌性西藏小型猪产仔数为(5.70±1.00)头,其2月龄断乳存活率为91.4%。哺乳期雌性西藏小型猪母性强,护仔行为强烈。结论广州地区西藏小型猪生长发育繁殖正常,产仔率和2月龄存活率等繁殖性能指标与原产地一致。

戊巴比妥钠联用速眠新Ⅱ对西藏小型猪麻醉效果观察

目的观察联合应用速眠新Ⅱ和戊巴比妥钠对西藏小型猪的麻醉效果。方法采用速眠新Ⅱ（0.1mL/kg）肌内注射和3%戊巴比妥钠生理盐水溶液（0.2 mL/kg）静脉注射联合麻醉方法对15头行胚胎移植术的西藏小型猪进行麻醉,观察动物麻醉维持时间、镇痛效果、呼吸频率和心率变化及术后苏醒情况。结果80%（12头/15头）西藏小型猪初始量麻醉状态维持45 min以上,20%（3头/15头）西藏小型猪手术过程中追加麻醉。麻醉期间肌肉松弛效果好,动物呼吸和心率平稳。手术过程中西藏小型猪呼吸频率为（12-22）次/min,心率为（63-85）次/min,麻醉过程中未出现麻醉死亡,术后苏醒时间为30-60 min。结论速眠新和戊巴比妥钠混合麻醉效果好,且麻醉剂量较以往大幅减少,术后苏醒快。戊巴比妥钠联用速眠新复合麻醉对西藏小型猪是一种较理想的麻醉方法,且动物麻醉安全性高。

鬼臼毒素纳米脂质载体的靶向分布

目的观察西藏小型猪宫颈外用鬼臼毒素(POD)纳米脂质载体(POD-NLC)后POD黏膜分布情况和系统毒性作用。方法应用随机数字表将西藏小型猪分为实验组和对照组,实验组宫颈涂0.5%POD-NLC,对照组涂0.5%POD酊剂。观察24 h不同时间宫颈黏膜刺激性、POD荧光强度及血中鬼臼毒素含量。结果实验组用药后未发现局部刺激,对照组出现红肿,水疱、血疱、糜烂、破溃等严重局部刺激反应;药物分布显示对照组在涂药4 h后黏膜组织中荧光值达到最高;实验组POD荧光值上升较慢,在16 h达最大值。实验组用药6 h后POD的血药浓度达峰值(14.28±0.33 ng/m L),对照组用药4 h后即达峰值(42.46±0.32 ng/m L),在所有测试时间点,实验组的血药浓度均低于对照组(P<0.05)。对照组的浓度曲线下面积是实验组的1.38倍。结论 POD-NLC具有缓释性、在黏膜较长时间蓄积,动物实验显示无局部刺激性且系统吸收低。

西藏小型猪ESR基因PvuⅡ多态性与生长繁殖性能相关分析

目的了解ESR基因PvuⅡ位点在西藏小型猪中的多态性分布情况;研究其在西藏小型猪上的遗传效应,为西藏小型猪生长繁殖性状的分子遗传标记辅助选择提供实验依据。方法记录44头西藏小型猪母猪繁殖性能,并对其所产仔猪的生长性能进行测定,采用PCR-RFLP方法对ESR基因PvuⅡ位点进行多态性与生长繁殖性能进行相关性分析。结果西藏小型猪ESR候选基因PvuⅡ位点表现出多态性,为AA、AB、BB型,A、B等位基因频率特征。初产胎的产仔数在不同基因型间差异存在显著性,不同基因型间产仔数呈BB>AB>AA的趋势,初产胎和经产胎的母猪其他指标在不同基因型间差异均没有显著性。结论提高西藏小型猪猪群ESR基因PvuⅡ位点B等位基因频率,有利于提高西藏小型母猪的产仔数。

实验用藏猪和巴马小型猪线粒体DNA控制区碱基序列比较

目的:分析比较实验用藏猪和巴马小型猪线粒体DNA控制区D-loop区碱基序列的差异,探讨小型猪的遗传标记。方法:提取59头藏猪和16头巴马小型猪血液基因组DNA,设计特异引物扩增mtDNA D-loop,从凝胶中纯化后直接测序,进行比较。结果:2种小型猪mtDNA D-loop都存在串连重复序列区和非重复序列区(5′端和3′端);重复序列区处于中间位置,藏猪有2种类型(A型和B型),巴马小型猪只有1种类型(A型);藏猪D-loop5′端(704bp)发现有20个变异位点,其中有3个主要的转换位点:305,500,691,巴马小型猪未发现多态位点,与藏猪以及其他猪相比,巴马小型猪D-loop5′端在180、404位有2个碱基差异。结论:藏猪mtDNA D-loop区碱基序列存在2种类型(A型和B型);巴马小型猪mtDNA D-loop区碱基序列多态性较低,有2个遗传标记位点。

西藏小型猪、小猎犬与人血液流变学指标的比较研究

目的探讨西藏小型猪、比格犬与人血液流变学指标的相互关系。方法采集成年西藏小型猪、比格犬和人的血液样品,用全自动血液粘度计分别测定其全血粘度(WBV,高、中、低切变率)、血浆粘度、红细胞压积、血沉及血浆纤维蛋白原5项血液流变学指标。结果(1)雄性西藏小型猪的WBV值(150、30、5、1s-1)和血浆纤维蛋白原含量均显著低于雌性(P<0.05,P<0.01,P<0.05,P<0.01,P<0.01);(2)雄性比格犬的WBV值(150和1s-1)显著低于雌性(P<0.05);(3)男性的WBV(1s-1)和红细胞压积值显著高于女性(P<0.05,P<0.01),而男性的血沉值则显著低于女性(P<0.01);(4)比格犬的WBV(1s-1)、血浆粘度、血沉值均显著低于西藏小型猪和人(P<0.05,P<0.01,P<0.05),而红细胞压积值和血浆纤维蛋白原含量则显著高于西藏小型猪和人(P<0.01);(5)西藏小型猪和人的各项血液流变学指标之间均不存在显著差异(P>0.05)。结论与比格犬相比,西藏小型猪的血液流变学指标更接近于人。

实验用西藏小型猪线粒体DNA控制区变异类型及其血液指标比较研究

目的分析实验用西藏小型猪线粒体DNA控制区碱基序列变异分化类型,比较血液生理生化指标的差异,为实验动物新品种的培育奠定分子遗传学基础。方法采集59头西藏小型猪血液,分别进行全基因组DNA提取、线粒体DNA控制区的扩增、测序并分类,同时进行血液生理生化指标的测定和比较研究。结果根据串联重复区重复片段的变化,西藏小型猪线粒体DNA控制区分为A、B两种类型,分别占57.6%和42.4%,几乎与5'端序列在305、500和691的三个主要转换位点的变化相对应。A、B两类西藏小型猪18项血液生理生化指标统计结果显示,红细胞数(RBC)差异(P<0.01)有统计学意义,其他指标差异均无统计学意义。结论根据线粒体DNA控制区序列碱基变异,西藏小型猪分为两个类群,两个群体之间红细胞数存在明显差异。

西藏小型猪SLA-DQA基因外显子2的PCR-RFLP多态性分析

目的分析西藏小型猪SLA-DQA基因第2外显子不同酶切位点的基因型多态性以及等位基因的多态性,检验这些酶切位点上的基因频率是否达到Hardy-Weinberg平衡态。方法采用EcoRⅠ和AluⅠ两种限制性内切酶对西藏小型猪SLA-DQA目的基因的第1和第2内含子部分序列以及完整的外显子2进行PCR-RFLP分析。结果结果表明,经EcoRⅠ酶切后,以纯合子BB基因型居多,BB、AB、AA基因型频率分布为0.4500、0.3167和0.2333,其中B为优势等位基因(0.6083);经AluⅠ酶切后,MN基因型频率(0.5000)分别高于MM型(0.3000)和NN型(0.2000),其中M为优势等位基因(0.5500)。经卡方适合性检验验证,EcoRⅠ酶切位点χ2值未达到显著水平(P>0.05),而AluⅠ酶切位点χ2值则具有显著差异(P<0.05)。综合双酶切结果,共出现7种组合带型,其中BBMM组合带型出现的频率最高(0.3000),暂没有发现AANN以及BBNN两种组合带型。结论西藏小型猪SLA-DQA基因在AluⅠ酶切位点上没有达到Hardy-Weinberg平衡态,在该位点的遗传选择压力较EcoRⅠ位点大。

西藏小型猪与人血液流变学指标的比较分析

目的探讨西藏小型猪与人血液流变学指标间的变化规律。方法采集成年西藏小型猪和人的血液样品,分别检测其WBV(高、中、低切变率)、PV、HCT、ESR及Fi等5项血液流变学指标。结果(1)雄性西藏小型猪的150s-1、30s-1、5s-1、1s-1WBV值和Fi含量均显著低于雌性(P<0.05,P<0.01,P<0.05,P<0.01,P<0.01);(2)在人的血液流变学指标中男性的WBV值(1s-1)和HCT值显著高于女性(P<0.05,P<0.01);(3)西藏小型猪的HCT值和Fi含量与人相比存在显著差异(P<0.01),其余指标均无显著性差异(P>0.05)。结论西藏小型猪除HCT和Fi两指标与人有差异外,其余指标均与人基本接近。

西藏小型猪MSTN基因5'调控区的酶切多态性分析

目的对西藏小型猪MSTN基因进行PCR-RFLP基因多态性分析,并对五指山小型猪、贵州香猪和巴马小型猪进行MSTN基因多态性的比较研究。方法以42头西藏小型猪、17头五指山小型猪、7头巴马小型猪和22头贵州香猪作为研究对象,对猪MSTN基因5′调控区进行了PCR-RFLP多态性研究。结果1、不同猪种之间的基因型频率和等位基因频率有显著性差异(P=0.000),西藏小型猪的MSTN基因表现出3种基因型TT(9.52%)、AA(61.90%)、TA(28.57%),T和A的频率分别为23.81%和76.19%;五指山小型猪的MSTN基因表现出2种基因型TT(82.35%)、AA(17.65%),T和A的频率分别为82.35%和17.65%;贵州香猪的MSTN基因表现出2种基因型TT(81.82%)、TA(18.18%),T和A的频率分别为90.91%和9.09%;巴马小型猪的MSTN基因表现出2种基因型TT(71.43%)和TA(28.57%),T和A的频率为85.71%和14.29%。2、不同MSTN基因型的西藏小型猪的初生重(P=0.761)和离乳重(P=0.319)无显著性差异。结论西藏小型猪、五指山小型猪、贵州香猪和巴马小型猪的MSTN基因5'调控区存在多态性,但暂不能把MSTN基因做为西藏小型猪繁殖性能的分子标记。

西藏小型猪MSTN基因分子克隆及序列分析

目的扩增西藏小型猪的肌肉生长抑制素(MSTN)基因编码区全长序列,并对序列进行生物信息学分析。方法提取西藏小型猪肝脏组织的RNA,反转录成为c DNA,利用RT-PCR方法扩增MSTN基因编码区全长序列,将纯化的片段与pMD19-T载体连接,转化大肠杆菌DH5α,筛选阳性克隆并测定其序列,利用生物信息学方法分析其序列特征,并与其他12种物种构建系统进化树。结果西藏小型猪MSTN基因编码区全长1128bp,编码375个氨基酸,氨基酸序列同源性分析表明,与版纳微型猪MSTN氨基酸序列相似性最高,为99%。结论 MSTN基因西藏小型猪除了与鸡和斑马鱼亲缘关系较远外,与人、犬、版纳微型猪、绵羊、山羊、牛、马、黑猩猩、大鼠、小鼠的关系都较为接近,其中与版纳微型猪的亲缘关系最为接近。

西藏小型猪的线粒体DNA控制区分析

目的研究西藏小型猪的遗传标记以及与其他国内地方猪的亲缘关系。方法扩增102头西藏小型猪以及16头巴马小型猪、17头贵州香猪的线粒体DNA控制区,测序并与国内其他猪进行比较。结果西藏小型猪线粒体DNAD-loop区分三个区域。串联重复序列区处于中间位置,包含有15～29个10 bp的重复片段,分为A、B两种类型。D-loop 3′端340 bp,与国内其他猪的序列相同比较保守;5′端704 bp,共有22个变异位点。由22个变异位点中归纳出25个单倍型,其中有两种主要的单倍型,分别占34.4%和36.6%。根据三个转换位点:305、500、691,将西藏小型猪分成了两组,几乎与串联重复序列所分的A、B两组类型相对应。与西藏小型猪相比,巴马小型猪和贵州香猪D-loop 5′端变异位点较少,分别只有4种和2种单倍型,串联重复区也只有一个类型。结论西藏小型猪可能有两个母系祖先并且与我国西南地区的品种猪有较近的亲缘关系;不同的串联重复片段类型和5′端的变异位点可以联合组建西藏小型猪的遗传标记。