猪PFN1基因在骨骼肌组织中的表达模式及多态性研究

为探究猪前纤维蛋白1(Profilin-1,PFN1)基因多态性及其在猪骨骼肌组织中的mRNA表达规律,以藏猪(Tibet pigs, TP)和大约克猪(Yorkshire pigs, YP)作为试验动物,采用Sanger测序技术对PFN1基因CDS区、5’UTR启动子区进行单核苷酸多态性(Single nucleotide polymorphism, SNP)的筛选与基因分型,预测分析了PFN1基因的SNPs位点突变前后转录因子的功能特性;采用RT-qPCR技术检测PFN1基因在30、90、180日龄三个时期TP和YP的腿肌与背最长肌中的mRNA表达量。结果表明:PFN1基因启动子区域存在三个SNPs,且TP与YP基因频率差异显著;产生了8个新增转录因子结合位点,这些位点调控骨骼肌生长发育、细胞形态建成和保持等过程;PFN1基因表达水平于30日龄时最高,随日龄的增加而下降,90、180日龄时TP的PFN1基因表达量均显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)低于YP。综上表明,猪PFN1基因SNPs位点多态性与骨骼肌mRNA的差异表达相关,推测PFN1基因对猪早期骨骼肌生长发育与肌纤维细胞形态保持起重要的调控作用,本研究结果为后续进一步探索其分子作用机制奠定基础。

藏猪低氧适应的血液生理指标研究

藏猪作为青藏高原土著品种是很好的低氧适应研究模式动物。本研究选择藏猪(海拔3 700 m左右)、大河猪(海拔2 300 m左右)、明光小耳猪(海拔1 900 m左右)和滇南小耳猪(海拔550 m左右)等4个连续海拔分布猪种进行血液生理比较,共完成7项与氧气运输相关的血液生理指标检测。结果显示,藏猪红细胞数[RBC,(8.61±0.89)×1012/L]、血红蛋白浓度[HGB,(172.51±21.39)g/L]和红细胞压积[HCT,(53.02±6.39)%]3个指标远高于明光小耳猪(8.61±0.89,109.63±11.18,39.24±3.89)和滇南小耳猪(6.72±0.81,104.83±9.4,35.22±3.2)(P<0.01),平均红细胞体积[MCV,(61.65±3.52)fL]、平均红细胞血红蛋白含量[MCH,(19.99±1.24)Pg]和平均红细胞血红蛋白浓度[MCHC,(324.8±8.52)g/L]与后两者差异极显著(P<0.01),而2 300 m海拔大河猪各项指标均处于中间。结果表明,与氧气运输相关血液生理指标依海拔升高而升高;高的血红蛋白浓度是藏猪低氧适应的生理表征;而高的血红蛋白浓度主要来源于红细胞数增加。

藏猪3个繁殖性状主效基因多态性研究

藏猪是我国高海拔特有猪种,为了解藏猪繁殖性能的遗传潜力和基因多样性,利用PCR-RFLP技术测定了202头藏猪ESR、FSHβ和PRLR3个繁殖性状主效基因位点的基因型多态性,并与文献报道的国内外猪种进行比较。结果显示藏猪群体ESR、FSHβ和PRLR优势基因型分别为BB型、AB型和AA型,3个位点基因型分布均符合哈迪-温伯格平衡。藏猪群体3个繁殖性状主效基因位点都有报道的有利基因型,且有利等位基因频率较高,说明藏猪在这3个基因位点可能具有优良繁殖性能的遗传潜力。

藏猪繁殖性状多基因效应分析

藏猪是我国特有的高原型地方猪种,具有适应高海拔恶劣气候环境、抗病、耐粗、肉质鲜美等特点,但繁殖力低。文章以促卵泡素β亚基(FSHβ)、雌激素受体(ESR)、促乳素受体(PRLR)和视黄醛结合蛋白4(RBP4)等基因作为繁殖性状主要候选基因,测定76头藏猪的基因型,分析单基因和多基因合并对繁殖性状的影响效应。结果说明,在藏猪群体中,FSHβ、ESR和PRLR基因不同基因型繁殖性状差异显著,优良基因型分别为BB、BB和AA。藏猪RBP4基因只有2种基因型,对繁殖性状影响不显著。FSHβ-ESR-PRLR基因的合并优良基因型为BB-BB-AA,多基因聚合效应高于单基因效应。

高原环境中藏猪血液生理指标测定与比较

藏猪是青藏高原特有的地方猪种。为了解其血液生理特征,本研究采用全自动血液分析仪测定6月龄藏猪和同环境中长白猪的血液常规生理指标,比较品种和性别的影响。结果表明性别对6月龄猪血液生理指标影响均不显著(P>0.05),藏猪比长白猪具有较高的WBC、LY#、Mid#、Mid#、PLT、PEW和PCT,但RBC、HGB、HCT、MCH明显较低(P<0.05)。藏猪血液生理指标具有高海拔低氧适应特征,抗病性能好,血液生理指标与人类有一定的相似性,适合用于医学实验动物。

中国藏猪ESR基因PvuⅡ位点多态性分析

采用PCR-RFLPS方法,对中国藏猪ESR基因多态性进行了研究,并与太湖猪、金华猪、成华猪、内江猪、长白猪、大白猪等中外猪种的ESR基因频率、基因型频率作了对比分析。结果表明藏猪有3种ESR基因型,ESR等位基因之间的频率较其它猪种均衡,从而证明西藏猪选择压力较小,ESR基因的分布处于原始的自然状态。

藏猪白细胞介素-2基因的克隆及序列分析

将藏猪外周血淋巴细胞在伴刀豆球蛋白 A(Con A)的刺激下体外培养 70 h后 ,提取激活淋巴细胞总 RNA,应用RT- PCR技术扩增出藏猪淋巴细胞白细胞介素 - 2 c DNA (TPIL - 2 ) ,克隆到 p MD- T载体上并测序。测序结果显示 ,克隆的TPIL- 2 c DNA全长为 5 0 3个碱基 ,开放阅读框 (ORF)为 4 6 5个碱基 ,编码 15 4个氨基酸 ,分子量为 17.4 kd,等电点为 5 .38;疏水氨基酸 4 0 .3% ,亲水氨基酸 37.0 % ,碱性氨基酸 11% ,酸性氨基酸 11.7%。此 c DNA与报道猪的 IL - 2同源性为 10 0 % ,证实克隆到了藏猪白细胞介素 - 2基因 c DNA。

藏猪激素敏感脂肪酶(HSL)基因遗传多样性分析

激素敏感脂肪酶(HSL)是猪脂肪沉积相关的重要候选基因之一。本研究采用PCR-RFLP和SSCP技术检测了藏猪HSL基因exon1G→A和exon8G→T突变位点多态性。结果显示,藏猪群体中2个位点均出现3种基因型,表现多态性,其中,exon1G→A位点等位基因A和G频率分别为62.50%和37.50%,exon8G→T位点等位基因A和B频率分别为77.68%和22.32%。与报道的其他猪种相比,藏猪HSL基因2个突变位点的基因分布均处于瘦肉型外种猪和脂肪性地方猪之间,表现出其与其他猪种的差异。

西藏小型猪血液生理生化指标的初步研究

目的探讨西藏小型猪的生理生化指标特性。方法采用全自动血球计数仪和全自动生化仪，对1．5—5月龄西藏小型猪（♂21，♀24）血液的部分生理和生化指标进行测定和分析。结果西藏小型猪血液生理指标的性别差异不显著，部分生化指标性别差异显著；但多数指标在不同月龄间差异极显著（P〈0．01）或显著（P〈0．05），并有近半数项目随月龄的增长呈减少或增加的趋势，其余多无明显的变化规律。所测生理生化指标中部分与巴马小型猪相近，与普通猪差异较大，与人类水平接近。结论西藏小型猪、其他小型猪和人类的生理生化特性有一定的相似性。

藏猪繁殖性状遗传参数分析

藏猪是中国特有的高原型地方猪种,本研究采用非求导约束最大似然(MTDFREML)方法对藏猪繁殖性状进行遗传分析。结果估算出藏猪乳头数、总产仔数、产活仔数、初生窝重、断奶仔数、断奶窝重的遗传力分别为0.36、0.12、0.10、0.13、0.09和0.12,乳头数与断奶窝重、初生窝重和断奶仔数存在明显的遗传力相关。

藏猪生长激素基因(pGH)多态性研究

猪生长激素基因(pGH)是猪生长发育性状重要的候选基因之一。采用PCR-RFLP技术检测藏猪pGH基因+159^+734 bp片段的DraI、ApaI和MspI酶切多态性。结果显示,藏猪群体中DraI酶切全部切开,无多态;ApaI酶切具有4个等位基因,出现5种基因型,其中CC基因型(299A/432C)频率最高,为0.7857;藏猪群体MspI酶切出现3种基因型,杂合性CT基因型频率最高,为0.5089,等位基因C和T频率分别为0.5580和0.4420。经比较,藏猪pGH基因DraI酶切位点与其他猪种一样无多态性,而ApaI酶切出现了特异的432突变位点,MspI酶切等位基因分布相对均衡,表现出与其他猪种的差异。

藏猪白细胞介素4基因cDNA的克隆及序列分析

目的 :克隆藏猪白细胞介素 4基因cDNA。方法 :从体外ConA刺激 70小时的藏猪外周血淋巴细胞中提取总RNA ,应用RT PCR技术扩增 ,pMD T载体连接 ,常规转化后 ,进行酶切及序列测定进行鉴定。结果 :研究表明克隆得到的IL 4基因cDNA与成华猪的IL 4同源性达到 99% ,与长白杂交猪的同源率为 98%。结论 :从藏猪外周血淋巴细胞中成功地分离到IL 4基因。

藏猪黑素皮质激素受体-4基因TaqI多态性分析

藏猪是我国青藏高原特有的小型原始地方猪种,文中采用PCR-RFLP技术分析了藏猪黑素皮质激素受体-4(MC4R)基因TaqI酶切位点多态性。结果表明:藏猪MC4R基因TaqI酶切位点优势基因型为11,基因型频率达93.56%,与国内梅山猪、二花脸猪、民猪和金华猪等较接近,与汉普夏、大白、杜洛克等外种猪差别较大。

藏猪新品系的选育初报

在藏猪中心产区建立藏猪选育基础群,对其外貌特征、繁殖性能和生长发育进行个体测定。采用综合育种值对基础群藏猪按照高繁殖力和快生长高瘦肉率2个方向进行选种。经过3个世代的选育,2个品系藏猪外貌体型更典型;高繁殖力品系总产仔数、产活仔数、初生窝重、断奶仔数和断奶窝重分别达到了7.65头、7.16头、5.42 kg、6.46头和31.05 kg;快生长高瘦肉率品系初生重、断奶重、25 kg日龄、屠宰率、腿臀率、瘦肉率和眼肌面积分别达到了0.78kg、7.87 kg、260.5 d、61.65%、31.44%、63.49%和9.13 cm2,背膘厚减小至8.19 mm,肉质性状变化不大,保持了藏猪良好的特性。

西藏小型猪与高原藏猪的血液生理生化值的比较

目的比较西藏小型猪与高原藏猪的血液生理、生化指标的差异。方法采用全自动血液细胞和生化分析仪测定21个血液生理生化指标。结果藏猪与西藏小型猪之间,红细胞、白细胞、血小板计数、总胆固醇、血清甘油三酯指标的测定差异有显著性,谷草转氨酶、血清总蛋白、血清清蛋白、葡萄糖、肌酸激酶指标的测定差异极显著。其中红细胞、白细胞、谷草转氨酶、肌酸激酶的值藏猪高于西藏小型猪,而血小板计数、血清总蛋白、血清清蛋白、葡萄糖、总胆固醇、血清甘油三酯的值藏猪低于西藏小型猪。结论不同的生活环境、气候条件和营养水平会对动物的血液生理、生化值的测定造成一定的影响。

生长激素受体基因突变对西藏藏猪生长迟缓的影响

本研究旨在探索西藏藏猪生长迟缓成因和分子机理。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术对西藏藏猪生长激素受体(GHR)基因克隆,采用生物信息学方法分析西藏藏猪生长激素受体基因与其他常见品种猪基因与蛋白序列差异,并构建GHR基因的真核过表达质粒,转染到西藏藏猪胚胎成纤维细胞(PEFs)上进行瞬时表达,通过MTT检测细胞增殖活性,利用实时荧光定量PCR技术检测细胞的胰岛素样生长因子-1(IGF-1)表达的情况。西藏藏猪GHR基因编码区1 716bp,编码572个氨基酸;与普通猪GHR基因序列进行比对分析表明,在西藏藏猪GHR基因编码区1 225bp处发生T→G突变,导致丝氨酸突变为丙氨酸;GHR基因真核过表达质粒成功转染PEFs后,PEFs生长活性显著提高;qPCR检测表明,细胞株中IGF-1表达显著上调。综上表明,GHR基因的表达可以提高PEFs细胞的增殖活性,诱导IGF-1基因的表达,GHR基因在1 225bp处的点突变可能影响西藏藏猪的生长迟缓。

松潘藏猪现状与保种利用研究

本文介绍了松潘藏猪生活的自然和社会环境及其生物学性状,提出了保种和合理利用的必要性及措施,为藏猪保护和利用提供指导。

F1代西藏小型猪早期生长发育特点

目的研究西藏小型猪早期生长发育的规律。方法对本基地F1代西藏小型猪的体重、体长、胸围、体高、体温、呼吸频率、心率及血液生理生化指标进行了测定。结果西藏小型猪体型小,生长性能稳定,生长速度与原产地西藏小型猪基本一致;西藏小型猪的体温、呼吸次数和心率与原产地西藏小型猪相近,且雌雄之间差异不显著(P>0.05);F1代雌雄间除嗜碱性粒细胞、单核细胞数和尿素氮外其他指标也基本一致,大部分指标与人接近。结论由于西藏小型猪体型小、生长性能稳定,血液生理生化值与人类相近,因而是理想的医学研究用实验动物。

藏猪链球菌的分离鉴定及耐药性研究

目的掌握藏猪群中链球菌的流行情况及耐药特性。方法从西藏拉萨、林芝2地采集藏猪喉头黏液、扁桃体、脾脏和关节液等样品共211份,分离细菌,通过细菌生化及PCR方法鉴定藏猪链球菌后,采用WHO推荐的K-B纸片法测定常用抗菌药物的敏感性。结果 211份样品中分离鉴定出6株藏猪链球菌,分离率为2.8%。这些菌株对11种抗菌药物产生了不同程度的耐药。其中对万古霉素耐药率最高,达100%,对克拉霉素、四环素耐药率较高,达66.7%,对青霉素、红霉素、氯霉素耐药率为50%,对克林霉素、环丙沙星、呋喃妥因耐药率为33.3%,但耐药菌株对诺氟沙星、左氟沙星敏感性较高,达83.3%。结论藏猪链球菌分离株对常用抗菌药存在着一定的耐药现象。

西藏小型猪线粒体DNA控制区的分子遗传学研究

通过扩增102头西藏小型猪以及16头巴马小型猪、17头贵州香猪的线粒体DNA控制区,测序并与国内其他猪种进行比较,研究西藏小型猪的遗传标记以及与其他国内地方猪种的亲缘关系。结果显示,西藏小型猪线粒体DNA D-loop区分3个区域。串联重复序列区处于中间位置,包含有15~29个10 bp的重复片段,分为A、B 2种类型。3′端340 bp,与国内其他猪种的序列相同,比较保守 D-loop 5′端704 bp,共有22个变异位点。由22个变异位点中归纳出25个单倍型,其中有2种主要的单倍型,分别占34.4%和36.6%。根据3个转换位点：305、500、691,将西藏小型猪分成了2组,几乎与串联重复序列所分的A、B 2组类型相对应。与西藏小型猪相比,巴马小型猪和贵州香猪D-loop 5′端变异位点较少,分别只有4种和2种单倍型,串联重复区也只有1个类型。说明西藏小型猪可能有2个母系祖先,并且与我国西南地区的猪种有较近的亲缘关系 不同的串联重复片段类型和5′端的变异位点可以联合组建西藏小型猪的遗传标记。