藏药十八味党参丸抑制CIA大鼠滑膜组织炎性因子表达和细胞凋亡诱导

目的通过研究藏药十八味党参丸(TEP)对CIA大鼠滑膜组织中炎性因子表达的影响,探讨对胶原诱导性关节炎的疗效及其分子作用机制。方法将雌性SD大鼠随机分为空白对照组(Control)、模型组(CIA)、雷公藤组(TP)、TEP低剂量组(TEPⅠ)、TEP中剂量组(TEPⅡ)和TEP高剂量组(TEPⅢ),每组10只。CIA模型采用卡介苗溶液及牛胶原混合免疫法建立,各组大鼠通过药物灌胃6周后,取关节滑膜组织,采用HE染色法检测滑膜组织炎症程度;ELISA法检测各组大鼠滑膜组织白细胞介素-17因子的表达水平;免疫组化法检测各组大鼠滑膜组织肿瘤坏死因子-α的表达水平;Western blot法检测各组大鼠滑膜组织半胱天冬酶-3、核转录因子kappa B、B细胞淋巴瘤-2与相关X蛋白表达水平。结果与对照组相比,CIA模型组大鼠滑膜组织有明显的炎症反应,IL-17、NF-κB和TNF-α的表达明显增加(P<0.05),caspase-3表达显著降低(P<0.05),BCL-2/BAX比值显著增高(P<0.05)。与CIA模型组大鼠相比,TP组和TEPⅢ组大鼠滑膜组织炎症反应显著减轻,IL-17、NF-κB和TNF-α表达明显降低(P<0.05),caspase-3表达显著增加(P<0.05),BCL-2/BAX比值明显降低(P<0.05)。结论 TEP通过上调CIA大鼠滑膜组织中caspase 3表达,下调IL-17、NF-κB及BCL-2/BAX比值,可改善CIA大鼠滑膜组织的炎症反应。

藏药十八味党参丸提取物对脂多糖诱导的RAW264.7细胞Akt/p38MAPK信号通路及M1/M2极化影响的探究

目的探究藏药十八味党参丸(TEP)的提取物调控脂多糖(LPS)诱导小鼠巨噬细胞RAW 264.7的炎性反应及M1/M2极化分型的探究。方法 Alarmarblue法评价RAW 264.7活力;荧光酶标定量分析细胞活性氧(reactive oxygen species, ROS)水平;Griess法检测上清液中细胞一氧化氮(NO)的分泌情况;流式细胞术检测表面标志物CD206和CCR7蛋白的表达;RT-qPCR法检测细胞白介素(IL)-1β、IL-6、趋化因子2(CCL2)、一氧化氮合酶(iNOS)、精氨酸酶(ARG)-1和肿瘤坏死因子α(TNF-α)基因表达的情况;Western blot法检测TEP调控细胞合成iNOS、蛋白激酶B(Akt)和p38丝裂原活化激酶(p38MAPK)信号通路相关蛋白的表达情况。结果与模型组相比,TEP组一定程度上提高了RAW 264.7的细胞活性,同时抑制了LPS诱导的细胞内ROS水平的升高。经过LPS刺激后,模型组NO表达量显著升高,在24 h后表达量达到最高,而TEP组NO表达显著降低。模型组的CCR7表达升高,CD206表达下降,TEP干预后CCR7表达下降,CD206表达升高,且趋势呈现浓度依赖。与模型组相比,TEP组的IL-1β、IL-6、CCL2、iNOS、ARG和TNF-α基因表达以及iNOS、Akt和p38MAPK蛋白表达水平均显著降低。结论 TEP能够抑制细胞内ROS水平,降低NO分泌和炎性基因的表达水平,抑制细胞的M1表型,促进M2表型,其机制可能与细胞内iNOS、Akt和p38MAPK信号通路蛋白表达被抑制有关。