藏羊血液多肽制备的工艺研究

为了充分利用藏羊血液资源,试验采用抗凝、过滤、喷雾干燥等工艺制得血粉,通过酶解过活性炭进行藏羊血多肽的制备,测定藏羊血液多肽制备工艺的优化工艺参数。结果表明:优化后的工艺参数为粉末活性炭用量2.0%、p H值5.0、温度50℃、时间2.0 h。各因素对酶解液脱色率影响大小为粉末活性炭用量>p H值>温度>时间;对酶解液多肽损失率影响大小为粉末活性炭用量>p H值>时间>温度。在该最佳工艺条件下藏羊血粉酶解液多肽损失率相对平稳,制得的藏羊血液多肽为浅黄色、无异味、小颗粒的粉末状态。

藏羊血中血红素提取工艺研究

通过正交试验确定了藏羊血中提取血红素的最优工艺条件,即:溶血时添加蒸馏水1倍、氯仿5倍、分离血红素时加丙酮5倍、离心时间为20min,pH值为3。

冷季牧归补饲精料对高海拔地区藏系绵羊血液生化指标的影响

选取9月龄欧拉型藏系绵羊羯羊(30.21 kg±1.42 kg)40只,随机分为4组,A组冷季放牧,B、C和D组冷季牧归每天每只分别补饲0.10、0.20和0.30 kg混合精料,试验期210 d,研究冷季牧归补饲精料对其血清生化指标的影响。结果表明,补饲精料提高了欧拉型藏系绵羊血清总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、球蛋白(GLB)、钙(Ca)的含量,钙/无机磷(Ca/IP)比值及肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)和γ-谷氨酰胺基转移酶(GGT)活性;随着精料补饲量增大,绵羊血清葡萄糖(GLU)、胆固醇(CHO)和甘油三酯(TG)含量,超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性,生长激素(GH)、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)、缩胆囊素(CCK)、胃泌素及免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白G(IgG)及免疫球蛋白M(IgM)的浓度增大,但补饲0.30 kg组试验羊IgG浓度较C组略有下降(P>0.05);与A组相比,补饲精料显著提高了试验羊碱性磷酸酶(AMP)活性、尿素氮(BUN)浓度和BUN/CRE的值,显著降低肌酐(CRE)和尿酸(UA)浓度(P<0.05)。综合上述结果,冷季归牧后补饲适量精料可改善欧拉型藏系绵羊能量和脂肪的代谢能力,增强肝脏蛋白合成,提高机体免疫力和抗氧化力,调节钙磷代谢。

藏系绵羊(贾洛、红原、欧拉类群)、新疆细毛羊与阿勒泰羊血液蛋白多态性的研究

为了研究草地藏系绵羊(贾洛类群、红原类群、欧拉类群)和新疆细毛羊及阿勒泰羊的遗传多样性,试验采用聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳对以上5个类群羊的运铁蛋白(Tf)、血红蛋白(Hb)、乳酸脱氢酶(LDH)遗传多样性进行了研究。结果表明:Tf及Hb 2个位点草地藏系绵羊贾洛类群的多态程度最低;分析草地藏系绵羊红原类群LDH同工酶时出现5个条带,另外在红原类群的LDH中还发现了类似于牦牛中发现的LDH-B基因突变导致的遗传多态性现象,其他类群中均未发现LDH4、LDH5。

牦牛转移因子对藏绵羊外周血淋巴细胞转化功能的影响

为研究牦牛转移因子(transfer factor,TF)对藏绵羊外周血淋巴细胞增殖的作用,试验采用MTT法探索不同浓度淋巴细胞、犊牛血清(FCS)、刀豆蛋白A(Concanavalin A,ConA)对淋巴细胞增殖的影响。在最佳条件下,探讨牦牛TF对藏绵羊外周血淋巴细胞增殖的影响。结果表明,当藏绵羊淋巴细胞浓度为5.4×10^(6)个/mL,犊牛血清含量为8%,ConA为1μg/mL时,刺激效果最佳,且TF单独或协同丝裂原时,对淋巴细胞都有促进增殖的效果,且最佳浓度为1.5 mg/mL。体内注射TF后,各剂量组在注射第3天时,淋巴细胞再次受到TF单独或协同ConA刺激时,其增殖效果与细胞组单独增殖效果比较,差异不显著(P>0.05),至第5~7天时,其增殖效果明显高于细胞组,差异显著(P<0.05)。注射2 mL剂量组转化增殖效果优于1 mL和3 mL剂量组,差异显著(P<0.05)。说明牦牛TF能够有效增强机体免疫力,是一种很好的免疫增强剂。

用酶法制备藏羊血食用蛋白粉的研究

采用四因素三水平正交试验,对藏羊血制备食用蛋白的工艺进行了分析。经分析食用蛋白粉水解最佳条件为:酶解用酶量4.5g,酶解温度为46℃,酶解时间为7.5h,酶解的pH值为10.5,活性炭作用于水解液时由室温升至80℃所需最佳时间为6～8min。

西藏绵羊低氧适应的血液生理学特性研究

为了研究西藏曲松绵羊在高海拔低氧条件下的血液生理学特性,试验选择三个不同海拔地区的西藏曲松绵羊、云南丽江绵羊和云南腾冲绵羊,颈静脉采血后测定血常规指标和血流变指标并进行对照分析。结果表明:西藏曲松绵羊的红细胞数[RBC,(13.78±0.13)×1012/L]和血红蛋白含量[HGB,(135.44±1.19)g/L]远高于中低海拔绵羊(P<0.01);红细胞平均体积[MCV,(31.27±0.30)f L]、纤维蛋白原含量[(3.29±0.07)g/L]和血浆黏度[(1.49±0.30)m Pa/s]明显低于中低海拔绵羊(P<0.01)。说明西藏曲松绵羊通过增加血液红细胞数、血红蛋白含量以增加携氧能力,而伴随红细胞数和血红蛋白含量的升高,其血液黏度相关指标也相应升高。西藏曲松绵羊通过降低红细胞平均体积和血浆黏度等指标钝化红细胞数增加对全血黏度的不良影响,保证血液的通畅性,增加运氧能力,以适应高原低氧环境,这是西藏曲松绵羊高原低氧适应的血液生理特征。

藏绵羊血红蛋白、EPAS1基因与低氧适应相关性研究

【目的】筛选藏绵羊血红蛋白基因和EPAS1基因的低氧正选择位点,并解析位点遗传效应,揭示两基因在藏绵羊低氧适应中的作用。【方法】以血红蛋白、EPAS1为候选基因,筛选藏绵羊的优势SNP位点,并扩大样本检测3个海拔梯度(1500、2500和3500 m)绵羊的海拔趋势位点和血液生理指标,进行基因型与血液生理指标关联分析。【结果】藏绵羊血红蛋白、EPAS1基因分别检测到6个和12个SNPs。血红蛋白6个SNPs均为同义突变,其基因频率均未呈现海拔趋势。EPAS1基因第8内含子C871T位点突变等位基因(T)频率呈现明显海拔趋势,该位点TT基因型具有增加血红蛋白含量(HGB)、红细胞平均血红蛋白含量(MCH)和血液黏稠度的遗传效应(P<0.05);通过转录因子结合位点预测,发现该突变导致GATA(造血调控因子)结合位点丢失。EPAS1基因第9外显子G1001A为非同义突变VAL352MET,但突变等位基因频率仅为0.34,此位点3种基因型与各血液生理指标之间差异均不显著(P>0.05);通过蛋白结构同源预测,未发现蛋白结构功能变化。【结论】藏绵羊EPAS1基因第8内含子C871T位点突变等位基因(T)的频率随海拔升高而升高,其TT型能显著提高血红蛋白质量浓度14.14 g/L,是藏绵羊高血红蛋白浓度的潜在关联位点。

复方藏兽药翼草景香颗粒主成分代谢机理研究

运用PCA模型和代谢组学等方法,研究单次给药后复方藏兽药翼草景香颗粒主要成分在健康靶动物体内的变化规律及时量关系;运用主成分分析模式识别技术,寻找表征特定状态的生物标志物和潜在生物标志物的候选变量,从而揭示翼草景香颗粒在动物体内的生物学本质及代谢作用机制。选取健康西藏牦牛、绵羊,分成高、中、低剂量组,口服投喂复方藏药一次,另设不给药对照组,于给药前和给药后不同时段采集血样与粪样。利用GC-MS/MS对样本进行检测,检测数据分别通过GC-MS Postrun Analysis软件进行处理、NISI MS Search 2.0质谱库检索分析和Origin2018统计软件进行统计分析。由PCA得分可知,复方藏药中剂量组牦牛给药5.5 h、6.5 h和7.5 h时血样中藏药活性成分排名靠前,活性较高;复方藏药中剂量组绵羊给药0.5 h、7.5 h时和给药24.0 h时血样中藏药活性成分可以明显区分、得分最高。给药后牦牛、绵羊血液中检测出安息香醛、3-(2,6,6-三甲基-1-环己烯基)-2-丙烯醛、β-谷甾醇、2-己基-1-癸醇、三花生酸甘油酯、(±)-1,2-二棕榈精、2-乙基己酸乙烯酯、十二烯基丁二酸酐、二氢青蒿素等多种共有活性成分。该复方藏药发挥药效的主要成分包括安息香醛、3-(2,6,6-三甲基-1-环己烯基)-2-丙烯醛、β-谷甾醇等,这些共有成分可能与消炎、解热及抗肿瘤功效有关。

周岁与成年黑藏羊肺组织形态学特点及抗氧化能力的比较

为了比较周岁与成年黑藏羊肺组织形态学特点及抗氧化能力,试验选择青海省海北州贵南县自然放牧条件下12月龄和24月龄健康雄性黑藏羊各5只,按月龄分为两组,分别为周岁羊组(12月龄)和成年羊组(24月龄)。两组屠宰后各采集右肺隔叶两份,其中一份经H.E.染色显微镜下观察试验羊肺组织形态;另一份应用Image-Pro Plus 6.0图像分析系统测量试验羊肺泡隔厚度、单个肺泡面积和单位面积内肺泡数,并测量肺动脉末端分支和细小动脉的管径和中膜厚度,计算肺组织血管平均直径和中膜厚度/血管平均直径;同时采用试剂盒测定试验羊肺组织总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)活性、过氧化氢酶(CAT)活性、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性以及丙二醛(MDA)含量。结果表明:与周岁羊组比较,成年羊组肺泡隔厚度和单位面积肺泡数显著增加(P<0.05),单个肺泡面积、肺组织血管平均直径、中膜厚度显著减小(P<0.05);中膜厚度/血管平均直径减小,但差异不显著(P>0.05);肺组织T-AOC、SOD活性、GSH-Px活性和CAT活性略有提高,MDA含量略有降低,但均差异不显著(P>0.05)。说明随着黑藏羊年龄的增长,肺脏逐渐适应了高原低氧的环境,但抗氧化能力并未发生明显的变化。

西藏色瓦藏绵羊高原适应性的血液生理学特性研究

【目的】本文研究了西藏萨瓦藏绵羊高原适应性的血液生理学特性。【方法】采集成年健康西藏萨瓦藏绵羊(海拔4800m)、林芝当地河谷型绵羊(海拔2900m)全血,用全自动动物血细胞分析仪测定其血液常规生理指标;收集已报道的绵羊血液生理学数据,通过做散点图分析海拔与绵羊的5个主要血液生理指标的相关性。【结果】西藏萨瓦藏绵羊的白细胞总数(WBC)、淋巴细胞百分比(LY%)、淋巴细胞数(LYM)、中性单核细胞数(MONOCYTES)、嗜酸细胞数(EOSINOPHILS)、红细胞总数(RBC)、血红蛋白(HGB)、红细胞压积(HCT)显著高于林芝当地河谷型绵羊(P<0.05),而中性单核细胞百分比(MONO%)、红细胞平均体积(MCV)、平均红细胞血红蛋白含量(MCH)、平均红细胞血红蛋白浓度(MCHC)、红细胞分布宽度-CV(RDW-CV)、血小板总数(PLT)、血小板平均体积(MPV)、血小板压积(PCT)则显著低于林芝绵羊(P<0.05),嗜酸细胞百分比(EO%)、红细胞分布宽度-SD(RDW-SD)、血小板分布宽度(PDW)差异不显著(P>0.05)。HGB与海拔存在正相关;WBC随海拔升高而增加的趋势;PLT、RBC、MCV与海拔无明显的相关性。【结论】西藏萨瓦藏绵羊通过增加白细胞数量来提高免疫力;通过增加血液中血红蛋白含量,从而提高运输氧气的能力。西藏萨瓦藏绵羊通过一系列血液生理指标的改变来适应高原环境,这些血液生理学特性将为其疾病诊断、品种选育及高原适应性等研究提供参考。

HIF-1α基因第10外显子对藏绵羊高原低氧适应性的影响

【目的】研究藏绵羊低氧诱导因子1α基因(HIF-1α)第10外显子的变异特征及其对藏绵羊血气和生化指标的影响,为藏绵羊低氧适应性机制研究提供基础。【方法】采用PCR-SSCP法对333只藏绵羊HIF-1α基因第10外显子变异进行分析;采用血气仪测定其中134只年龄基本一致成年母羊的血气和生化指标,分析HIF-1α基因第10外显子变异与藏绵羊血气和生化指标的相关性。【结果】藏绵羊HIF-1α基因第10外显子存在6个SNPs位点,其中4个SNPs为同义突变,位于编码区(c.1302C>T、c.1392G>A、c.1506T>C和c.1515T>G),另外2个SNPs位于非编码区(c.1545+26A>G和c.1545+52G>A)。6个SNPs构成A、B、C 3个等位基因,表现为AA、BB、AB、AC和BC 5种基因型,其中AB为优势基因型。遗传多样性分析表明,HIF-1α基因第10外显子多态信息含量为0.48,呈中度多态,并处于Hardy-Weinberg不平衡状态。HIF-1α基因第10外显子基因型对酸碱度(pH)、碱剩余(BE)、血氧饱和度(S(O2))、血红蛋白总量(Hb)和半饱和氧分压(p50)影响显著。AB基因型藏绵羊在群体中比例最高,且具有较高的S(O2)。与AB基因型藏绵羊相比,AA基因型藏绵羊BE和S(O2)较低(P<0.05),推测其高原低氧适应能力较弱。【结论】HIF-1α基因第10外显子变异与藏绵羊pH、BE、S(O2)、Hb和p50相关,推测AB基因型藏绵羊具有较好的高原低氧适应性,而AA基因型藏绵羊高原低氧适应能力较弱。

急性低氧对高原土生动物藏系绵羊血气的影响

为了探讨急性低氧时藏系绵羊(Ovis aries)的血气特点,揭示其低氧适应机制,将7只雄性藏系绵羊和5只雄性移居绵羊分别置于高低压氧舱内,测定模拟海拔0、2 300和4 500 m时各动物清醒状态下的血气指标。用热稀释法测定心输出量。使用血气分析仪和EG7血样板,测定动脉及混合静脉血的血气指标,按Ficks方法计算氧耗量。结果显示,随着模拟海拔高度的升高,藏羊和移居羊的动静脉血氧饱和度(So2)、氧分压(Po2)、二氧化碳分压(Pco2)都呈明显下降趋势(P<0.05),血红蛋白浓度(Hb)、血液pH、心输出量及氧耗量虽无明显的差异性改变,但它们在4 500 m处的绝对值是增加的。在相同海拔,藏羊的Hb明显低于移居羊(P<0.05),4 500 m时藏羊的动脉血氧饱和度(Sao2)及组织摄氧量显著高于移居羊(P<0.05)。表明藏羊在急性低氧时表现出的高Sao2及高组织摄氧量,低Hb、低pH是它适应高原低氧的生理基础。

藏绵羊低氧适应的血液生理指标特征研究

藏绵羊对青藏高原的自然环境具有良好的适应能力,是高原家畜低氧适应研究的最佳动物。本研究选择欧拉型藏绵羊(海拔约4000 m)和湖羊(海拔约100 m)的12项血液生理指标进行比较分析,结果显示:藏绵羊HGB(117.59±0.557 g/L)、HCT(62.26±0.583%)值极显著高于湖羊(P<0.01),而PO_(2)(34.56±0.499 Pa)、SO_(2)(64.14±0.571%)值极显著低于湖羊(P<0.01);在血液酸碱和电解质指标中,藏绵羊的PCO_(2)、HCO_(3)-、TCO_(2)、BE值极显著低于湖羊(P<0.01),Ca^(2+)高于湖羊(P<0.05),pH、Na^(+)和K^(+)3项指标在两品种间无差异(P>0.05)。结果表明,与氧气运输相关指标的HGB和HCT值均为高海拔环境的藏绵羊高于低海拔生活环境的湖羊,藏绵羊低氧适应的主要生理表征是较高的血红蛋白浓度,而红细胞数增加是高血红蛋白浓度的主要来源。

藏系绵羊的血乳酸含量

用对羟基联苯比色法测定了34只青海高原藏系绵羊的血乳酸含量。结果:藏系绵羊血乳酸含量为2.65±0.95mmol/L,其中母羊2.65±1.00mmol/L,羯羊2.67±0.76mmol/L,1—2岁绵羊为2.38±0.75mmol/L,2岁以上为3.04±1.1mmol/L。藏系绵羊血乳酸含量在性别和年龄之间无显著差异(P>0.05)。

牛羊腹泻口服液对靶动物牦牛的安全性试验

为了评价牛羊腹泻口服液在建议剂量下对靶动物牦牛的安全性,试验将20头待宰牦牛分为4组,分别为对照组及1,3,5倍剂量组,每组5头,对照组灌服生理盐水,1,3,5倍剂量组分别以建议剂量的1,3,5倍剂量进行连续15 d口服给药。试验期间每天给药前后观察并记录牦牛的精神、采食、饮水及二便等临床体征;并在给药后第0,5,10,15天分别采集血液,检测血常规和血清生化指标;最后一次采血后将牦牛屠宰并解剖,采集肝脏、肾脏组织制作病理切片,H.E.染色后观察肝脏、肾脏组织的病理变化。结果表明:不同剂量连续给药15 d对受试牦牛的临床体征无明显影响。在第0天时,对照组的嗜酸性粒细胞数(EO)显著高于1,3倍剂量组(P<0.05),而中性粒细胞(NEUT)比率显著低于1,3,5倍剂量组(P<0.05);在第5天时,3倍剂量组的平均红细胞体积(MCV)显著高于对照组(P<0.05),而对照组的NEUT比率显著低于1,3,5倍剂量组(P<0.05);在第10天时,对照组的MCV显著高于1,3,5倍剂量组(P<0.05),平均红细胞血红蛋白含量(MCH)显著高于1,5倍剂量组(P<0.05),而平均红细胞血红蛋白浓度(MCHC)显著低于1,3,5倍剂量组(P<0.05);在第15天时,对照组的MCV、血细胞比容(HCT)均显著高于1,3,5倍剂量组(P<0.05),MCH显著高于1,5倍剂量组(P<0.05),大型血小板比率(P-LCR)显著高于5倍剂量组(P<0.05),MCHC显著低于1,3,5倍剂量组(P<0.05),NEUT比率显著低于1,3倍剂量组(P<0.05),各组间其他指标均差异不显著(P>0.05)。在第0天时,3倍剂量组的碱性磷酸酶(ALP)活性显著低于5倍剂量组(P<0.05);在第5天时,对照组的总蛋白(TP)含量显著低于3,5倍剂量组(P<0.05);在第15天时,对照组的白蛋白(ALB)含量显著高于1,3倍剂量组(P<0.05),各组间其他指标均差异不显著(P>0.05)。H.E.染色结果发现,各组牦牛肝脏、肾脏组织结构除偶见出血外大致正常。说明牛羊腹泻口服液在1倍建议剂量下使用对靶动物牦牛具有安全性。

冻干鼠疫F1抗体致敏血球的制备及其效价测定

目的筛选出适合野外鼠疫监测工作需求的冻干鼠疫F1抗体致敏血球。方法在传统鼠疫F1抗体致敏血球制备方法的基础上增加红细胞保护剂,制备冻干鼠疫F1抗体致敏血球,并通过血凝试验筛选出两种红细胞保护剂蔗糖与海藻糖及两种介质健康兔血清(normal rabbit serum, NRS)、小牛血清白蛋白(bovine serum albumin, BSA)与3种不同的样本稀释剂1%NRS、1%冻干NRS、1%冻干BSA的最佳配比关系。结果最佳的红细胞冻干保护剂为10%蔗糖和30 mmol/L海藻糖,最佳的介质为6%BSA,3种稀释剂中现配健康1%NRS的试验结果最好,1%冻干NRS需待试剂完全溶解方可进行试验,1%冻干BSA血球沉降差,结果不好判定。1%冻干NRS无需特殊保存,所以冻干鼠疫F1抗体致敏血球的最佳配比关系为30 mmol/L冻干海藻糖+6%BSA抗体致敏血球+1%冻干NRS与10%冻干蔗糖+6%BSA抗体致敏血球+1%冻干NRS,而且这两种血球的血凝效价均达到试验要求。结论新制备冻干鼠疫F1抗体致敏血球能满足鼠疫野外工作需求,无需特殊保存,携带方便,可在基层单位推广应用。