酒精性肝纤维化大鼠肝星状细胞及肝细胞凋亡和清肝活血方调控机制研究

目的观察酒精性肝纤维化大鼠肝星状细胞(HSC)、肝细胞凋亡及清肝活血方对不同细胞凋亡的影响。方法将大鼠分为空白组,模型组,清肝活血低、中、高剂量组,易善复组。清肝活血方低剂量组〔4·75g/(kg·d)〕、中剂量组〔14·25g/(kg·d)〕、高剂量组〔28·5g/(kg·d)〕及易善复组〔66·5mg/(kg·d)〕,分别予相应药物灌胃,空白组和模型组以等量生理盐水代替,给药2周。比色法检测血清ALT、AST、γ-GT,HE、Masson染色观察肝脏炎症和纤维化程度。TUNEL法检测肝细胞凋亡,TUNEL-α-SMA双标记法检测HSC凋亡。结果清肝活血方能降低大鼠血清ALT、AST、γ-GT水平,减轻炎症及纤维化程度(P<0·05);诱导活化的HSC凋亡,减少肝细胞凋亡(P<0·05)。结论清肝活血方能有效减轻大鼠肝纤维化程度,并减少酒精引起的肝细胞凋亡,诱导活化的HSC凋亡。

剔毒护肝方药物血清对大鼠肝星状细胞产生Ⅰ型胶原及转化生长因子β_1的影响

目的：根据剔毒护肝方抗肝纤维化的主要作用机理。方法：分离正常大鼠肝星状细胞、并传代培养。用剔毒护肝方给正常大鼠灌胃，制备药物血清，温育培养细胞。用^3H-TdR掺入法和MTT比色法观察细胞增殖，ELISA法测定上清液中Ⅰ型胶原含量，貂肺上皮细胞生长抑帛MTTI地检测培养上清液中的转化生长因子β1活性。结果：剔毒护肝方药物血清能显著4抑制肝星状细胞增殖，并能抑制肝星状细胞生成Ⅰ型胶原及产生转化生长因子β1。结论：剔毒护肝方能抑制肝星状细胞增殖和分泌转化生长因子β1，养活胶原生成，从而减弱肝星状细胞的自分泌放大效应。这可能是剔毒护肝方抗肝纤维化作用的主要机制之一。

清肝活血方对乙醇性肝纤维化大鼠肝星形细胞和肝细胞凋亡的影响

目的:观察酒精性肝纤维化大鼠Hsc和肝细胞的凋亡及中药清肝活血方对细胞凋亡的影响.方法:以乙醇为主制备酒精性肝纤维化大鼠模型,将造模大鼠分为清肝活血方低(4.75g/kg)、中(14.25g/kg)和高剂量组(28.5g/kg),每日进行ig药物干预2wk,并设空白对照组、模型对照组及易善复对照组.比色法检测血清ALT,AST,γ-GT;HE和Masson染色观察肝组织炎症和纤维化程度.TUNEL检测肝细胞凋亡,TUNEL-α-SMA双标记检测HSC凋亡.结果:清肝活血方用药组及易善复组能降低大鼠血清ALT(1213±245,1432±253nkat/Lvs2140±428nkat/L,P均<0.05),AST(1671±400,2123±413vs4454±850nkat/L,P均<0.05),γ-GT水平(4539±1847,5509±2430vs8271±3304nkat/L,P均<0.05),减轻纤维化程度(5.5±2.50,6.30±3.16vs9.00±2.27,P<0.05);诱导活化的HSC凋亡(5.25%±2.48%,3.63%±2.04%vs2.30%±1.24%,P<0.05),减少肝细胞凋亡(0.43%±0.11%,0.60%±0.16%vs1.77%±0.49%,P<0.05).结论:清肝活血方能有效减轻大鼠肝纤维化程度,并减少乙醇引起的肝细胞凋亡,诱导活化的HSC凋亡.

清肝活血方对酒精性肝纤维化大鼠肝星状细胞增殖与凋亡的影响

目的:观察酒精性肝纤维化大鼠肝星状细胞(HSC)的增殖与凋亡以及清肝活血方的调节作用。方法:雄性Wistar大鼠60只,随机分为空白对照组、模型对照组以及清肝活血方高、中、低剂量组,采用复合因素制备酒精性肝纤维化动物模型。观察清肝活血方对酒精性肝纤维化大鼠肝功能、病理、α-平滑肌动蛋白(α-SMA)以及HSC增殖与凋亡的影响。结果:清肝活血方各剂量组能显著降低酒精性肝纤维化大鼠血清ALT、AST水平(P<0.05);清肝活血方高剂量组能显著降低血清γ-GT水平(P<0.05);各药物组均能在不同程度上减轻肝脏炎症和纤维化,减少肝组织α-SMA的表达(P<0.05),抑制HSC增殖并提高HSC的凋亡率。结论:清肝活血方能有效改善酒精性肝纤维化大鼠肝功能,减轻纤维化程度。其作用机制可能是通过抑制HSC的增殖并促进活化HSC凋亡实现的。

剔毒护肝方药物血清对大鼠肝星状细胞增殖及凋亡的影响

目的 :探讨剔毒护肝方对大鼠肝星状细胞增殖及凋亡的影响。方法 :分离正常肝星状细胞 ,并传代培养 ;用剔毒护肝方给正常大鼠灌胃 ,制备药物血清 ,温育培养细胞 ;用3H TdR掺入法观察细胞增殖 ,TUNEL检测细胞凋亡。结果 :剔毒护肝方药物血清能显著抑制肝星状细胞增殖 ,并能促进肝星细胞凋亡。结论

剔毒护肝方药物血清对肝星状细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的影响

目的:研究剔毒护肝方药物血清对肝星状细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的影响。方法:传代培养大鼠肝星状细胞(HSC)系HSC-T6与不同剂量剔毒护肝方(大、中、小剂量组)共同培养48小时,应用Annexin-V-碘化丙锭染色检测剔毒护肝方对大鼠HSC凋亡的影响;免疫组化检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax水平。结果:剔毒护肝方能使大鼠HSC凋亡率明显增多,同时可使凋亡抑制分子Bcl-2表达下调,促凋亡分子Bax表达增强(P<0.01)。结论:剔毒护肝方可下调Bcl-2/Bax比率,促进HSC凋亡。

四逆软肝方对人肝星状细胞株LX-2增殖、凋亡和活化的影响

目的:通过体外细胞实验研究四逆软肝方对肝星状细胞(HSC)增殖、凋亡和活化的影响。方法:分别用正常培养液和多剂量的四逆软肝方水煎液对人肝星状细胞LX-2株进行干预培养48 h。采用CCK-8法检测人肝星状细胞LX-2株的增殖和细胞毒性。采用Annexin-V FITC/PI双染色法检测细胞凋亡情况。采用免疫荧光染色法测定LX-2细胞Cleaved-caspase 3、TIMP-1和TGF-β1的相对含量。用Western blot分别检测LX-2细胞Bcl-2、Bax、α-SMA、β-catenin和TIMP-1蛋白表达的相对含量。结果:四逆软肝方可抑制LX-2细胞增殖,并通过caspase依赖和线粒体依赖途径诱导细胞凋亡。四逆软肝方可能通过β-catenin途径:抑制LX-2细胞的活化。TIMP-1和TGF-β1蛋白的降低促进了纤维化的逆转。结论:四逆软肝方在体外可诱导LX-2细胞凋亡,抑制细胞增殖,降低LX-2细胞活性,促使细胞外基质降解,可能是其临床逆转肝纤维化、肝硬化的重要作用机制。