益母草注射液通过其生物碱成分上调Tie-2、VEGFR2和VEGF促进斑马鱼血管新生

目的:研究益母草注射液在斑马鱼血管损伤模型中的促血管生成作用,并阐明潜在的物质基础和分子机制。方法:采用HPLC-PAD和TLC技术检测益母草注射液的主要成分;利用舒尼替尼诱导转基因Tg(flk1:eGFP)斑马鱼血管损伤模型,益母草注射液干预治疗后,测量斑马鱼节间血管(ISVs)长度,QT-PCR检测血管生成相关基因的表达水平。结果:发现益母草注射液的主要成分是水苏碱、胆碱和葫芦巴碱;其中,益母草注射液、葫芦巴碱和胆碱可减轻化学诱导的斑马鱼血管损伤,其作用机制涉及益母草注射液上调Tie-2、VEGF和VEGFR2的表达,其主要成分葫芦巴碱上调Tie-2和VEGF的表达,胆碱上调VEGF和VEGFR2的表达。结论:益母草注射液及其主要生物碱成分可通过上调Tie-2、VEGFR2和VEGF来促进血管生成。

Tie-2在口腔鳞状细胞癌侵犯颌骨过程中的作用机制研究

目的:研究酪氨酸激酶受体-2(tyrosinekinase receptor-2,Tie-2)在口腔鳞状细胞癌侵犯颌骨过程中的作用机制。方法:免疫组化SP法比较Tie-2在颌骨侵犯前沿的口腔鳞状细胞癌与其他部位的口腔鳞癌中的表达差异;构建3种针对Tie-2的siRNA慢病毒载体(662、663、664)为实验组、空载病毒429和生理盐水(NS)为对照组,并将各组转染至人舌鳞癌细胞系(Cal-27)中,应用qRT-PCR筛选出抑制效果最好的siRNA;CCK-8法检测细胞活性;将抑制效果最好的慢病毒载体转染至Cal-27后,将其培养基上清添加至人单核细胞系(THP-1)培养基中,qRT-PCR和Western blotting检测THP-1中的破骨细胞功能相关基因抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate resistant acid phosphatase,TRAP)和组织蛋白酶K(cathepsin K,CTSK)的mRNA和蛋白量在各组中的表达差异。结果:颌骨侵犯前沿的骨旁鳞癌组织染色比其他部位鳞癌组织显著加深,骨旁鳞癌组织MOD值显著增大(P<0.0001);siRNA-664对Cal-27中Tie-2表达的抑制效果最佳(P<0.0001);用慢病毒转染Cal-27和THP-1后,细胞活性无明显变化,差异无统计学意义;沉默Cal-27中Tie-2的表达后,THP-1的破骨细胞功能相关基因和蛋白表达显著降低(P<0.0001)。结论:下调Tie-2表达后,THP-1向破骨细胞分化的潜力降低,表现为破骨细胞功能相关基因和蛋白表达下调。OSCC可能通过激活Ang/Tie-2信号体系释放某些破骨细胞分化因子,促进破骨细胞分化,从而导致局部骨侵犯发生。

莫诺苷对局灶性脑缺血再灌注大鼠血管生成素1及其受体Tie-2的影响

目的观察莫诺苷对局灶性脑缺血再灌注大鼠血管生成素1(Ang-1)及其受体Tie-2的影响。方法 20只健康成年雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为假手术组,模型组,莫诺苷小、中、大剂量组,每组4只。线栓法制备大鼠大脑中动脉阻塞模型,术后予莫诺苷30 mg/kg、90 mg/kg、270 mg/kg每天1次灌胃。术后7 d采用Western blotting法分析皮层Ang-1及其受体Tie-2的表达。结果模型组患侧皮层Ang-1、Tie-2的表达均比假手术组明显增加(P<0.01)。莫诺苷大剂量组Ang-1、Tie-2的表达较模型组明显提高(P<0.01),莫诺苷中、大剂量组Tie-2的表达较模型组显著提高(P<0.001)。结论莫诺苷能上调局灶性脑缺血大鼠缺血再灌注皮层Ang-1及受体Tie-2的表达,促进血管再生。

Ang-1、Ang-2和Tie-2表达与肝癌血管生成的关系

目的:检测血管生成素1(Ang-1)、血管生成素2(Ang-2)及其共同受体Tie-2在肝癌中的表达及与肝癌血管生成的关系。方法:采用免疫组化(SP法)对53例肝癌标本、30例癌旁组织及10例正常肝组织中Ang-1、Ang-2、Tie-2及CD31标记的微血管密度(MVD)进行检测,分析它们与肝癌血管生成的关系。结果:Ang-2及Tie-2在肝癌组织中的阳性表达率分别为67.9%、75.5%,明显高于癌旁组织43.3%、42.3%和正常肝组织20.0%、20.0%(P<0.05);Ang-1在肝癌组织、癌旁组织及正常肝组织中的阳性表达率无显著性差异(P>0.05);CD31标记的MVD与Ang-2、Tie-2表达密切相关。CD31标记的MVD与Ang-2、Tie-2在肝癌组织中表达呈正相关(P<0.05)。结论:Ang-1、Ang-2和Tie-2的表达在调节肝癌的血管生成中可能起重要作用。

透出液中白介素6和血管生成素受体Tie-2水平与腹膜溶质高转运的关系

目的探讨腹膜透析(腹透)患者透出液中白介素6(IL-6)和血管生成素受体Tie-2水平与腹膜高通透性的关系。方法将60例稳定的持续性非卧床性腹膜透析(CAPD)患者,根据腹膜平衡试验中4 h透出液肌酐与血浆肌酐的比值(D/Pcr)分为L/A组(D/Pcr<0.65,n=39)和H/A组(D/Pcr≥0.65,n=21)。采用ELISA法检测两组患者透出液中IL-6和Tie-2的质量浓度,分析IL-6和Tie-2水平与D/Pcr的相关性。结果 H/A组患者透出液中IL-6和Tie-2的质量浓度分别为(21.71±8.88)pg/mL和(1.23±0.43)ng/mL,均显著高于L/A组患者的(13.94±5.43)pg/mL和(0.95±0.43)ng/mL(P<0.05)。单因素相关分析结果显示:透出液中IL-6和Tie-2水平均与D/Pcr呈正相关(r=0.366,P=0.004;r=0.402,P=0.001);多元逐步回归分析结果显示:透出液中IL-6和Tie-2水平是影响D/Pcr的独立危险因素(β=0.007,P=0.026;β=0.162,P=0.006)。结论腹膜高转运的CAPD患者存在较明显的腹腔局部炎症和血管新生。透出液中IL-6和Tie-2水平是影响腹膜通透性的独立危险因素,提示腹腔局部炎症和血管新生与腹膜通透性的改变有关。

中药红景天对大鼠缺血心肌Flt-1、KDR及Tie-2表达的影响

目的观察中药红景天对大鼠心肌梗死后心肌内血管内皮生长因子(VEGF)各受体表达的影响。方法在确定造模成功的基础上将大鼠随机分为4组:模型组、红景天组、阳性对照组及假手术组。饲养6周后处死动物,摘取心脏制作石蜡切片,进行标准免疫组化染色操作。染色后切片在IMS细胞图像分析系统中用免疫组化定量软件进行定量分析。计算阳性面积(area)和平均光密度值(OD)。观察缺血心肌VEGF受体:Flt- 1、KDR及血管生成素(angiopoietin)的受体Tie 2的表达情况。结果中药红景天可提高红景天组大鼠心肌Flt -1与Tie -2的表达,与阳性对照组、模型组比较差异有显著性(P <0 . 0 5) ;红景天组心肌局部KDR的表达较假手术组和未干预组增加(P <0 .0 5) ,但与阳性对照组、模型组比较,差异无显著性。结论中药红景天可能通过改变缺血心肌Flt -1及Tie- 2的表达,达到促进血管新生,改善心肌缺血的作用。

Ang-1和Ang-2及其受体Tie-2在鼻咽癌患者血循环中的表达及临床意义

目的探讨Ang-1和Ang-2及其受体Tie-2在鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)患者血循环中的表达及其临床意义。方法应用酶联免疫吸附试验检测2009年5月至2010年6月本科收治的低分化鳞状细胞癌患者68例,其中男性52例,女性16例,中位年龄42(19～65)岁(初治32例,完全缓解20例,复发16例)及20例健康对照者血清Ang-1和Ang-2及其受体Tie-2水平。结果初治组和复发组NPC患者血清Ang-1和Ang-2及其受体Tie-2的水平均高于完全缓解组及健康对照组(P<0.01),而这些分子的含量在完全缓解组和健康对照组比较无明显差异(P>0.05)。Ang-2及Tie-2的水平在NPC患者不同T分期、临床分期比较有差异(P<0.05),并随着NPC进展呈上升趋势;Ang-1水平在不同T分期、临床分期比较差异不显著(P>0.05);Ang-2水平在不同N分期比较有差异(P<0.05)。转移NPC患者血清Ang-2及其受体Tie-2水平明显高于无转移组(P<0.01)。Ⅰ+Ⅱ期NPC患者血清Ang-1/Ang-2比值高于Ⅲ+IVa期(P<0.01)。结论 Ang-1和Ang-2及其受体Tie-2在鼻咽癌的发生、发展过程中起重要作用,并与肿瘤的侵袭转移有密切关系。

生肌象皮膏对糖尿病溃疡大鼠Ang/Tie-2通路的影响

[目的]通过对糖尿病溃疡组织中酪氨酸激酶受体(Tie-2)、血管紧张素Ⅰ(Ang-1)及血管紧张素Ⅱ(Ang-2)mRNA转录水平的动态观察,探讨生肌象皮膏对糖尿病溃疡大鼠Ang/Tie-2通路的影响。[方法]首先应用链脲佐菌素(STZ)经大鼠尾静脉注射及背部打孔法制备2型糖尿病难愈性溃疡动物模型,按照血糖和体质量分层随机分为糖尿病对照组、生肌象皮膏组、凡士林组及空白对照组。生肌象皮膏组采用生肌象皮膏纱条于溃疡处外敷,凡士林组用凡士林纱条外敷,空白对照组、糖尿病对照组均以生理盐水纱条外敷,各组分别于创伤后1、3、7、14、21 d分别处死部分大鼠,并取溃疡组织,应用聚合酶链式反应(PCR)法检测各组大鼠溃疡组织中Ang-1、Ang-2和Tie-2 m RNA的转录水平。[结果]生肌象皮膏组各时间点肉芽组织中Ang-1、Tie-2蛋白表达水平均高于其余各组,Ang-2表达水平均低于其余各组(P<0.05)。[结论]生肌象皮膏可能通过增加创面肉芽组织中Ang-1,Tie-2的表达水平,抑制Ang-2表达方式,促进糖尿病大鼠溃疡面血管新生,加快糖尿病溃疡愈合。

高糖诱导大鼠视网膜微血管周细胞Ang-2/Tie-2系统表达改变及牛磺酸的防护效应研究

目的通过检测牛磺酸对高糖培养大鼠视网膜微血管周细胞(retinal microvascular pericytes,RMPs)中血管生成素-2(Angiopoietin-2,Ang-2)/Tie-2系统表达的影响,探讨其防护糖尿病视损伤的机制。方法高糖培养大鼠RMPs,实验分正常对照组(Con,5mM D-glucose)、低剂量牛磺酸对照组(Con+0.1mM Tau)、中剂量牛磺酸对照组(Con+1mM Tau)、高剂量牛磺酸对照组(Con+10mM Tau)、甘露醇渗透对照组(Con+mannitol)、高糖组(HG,25mM D-glucose)、低剂量牛磺酸干预高糖组(HG+0.1mM Tau)、中剂量牛磺酸干预高糖组(HG+1mM Tau)、高剂量牛磺酸干预高糖组(HG+10mM Tau)、甘露醇高糖对照组(HG+mannitol)。用免疫细胞荧光双标鉴定大鼠RMPs,用荧光定量PCR技术和ELISA技术检测大鼠RMPs中Ang-2/Tie-2系统表达。结果高糖培养后,大鼠RMPs中Ang-2表达明显增加,Tie-2及磷酸化Tie-2明显降低,牛磺酸干预明显降低高糖组Ang-2表达,明显增加高糖组Tie-2及磷酸化Tie-2水平,呈剂量依赖关系。结论牛磺酸经调节Ang-2/Tie-2系统表达抑制糖尿病引起的视损伤。

少腹逐瘀汤含药血清对子宫内膜异位症在位内膜分泌Ang-1、Ang-2和Tie-2的影响

目的研究少腹逐瘀汤含药血清对子宫内膜异位症在位内膜分泌Ang-1、Ang-2和Tie-2的影响。方法实验分为少腹逐瘀汤含药血清高剂量组、低剂量组及空白对照组。收集接收手术治疗的子宫内膜异位症病人的在位子宫内膜组织,经体外分离、培养,以实时荧光定量PCR分析不同浓度少腹逐瘀汤含药血清对在位内膜细胞表达Ang-1、Ang-2和Tie-2的影响。结果少腹逐瘀汤含药血清能剂量依赖性抑制在位内膜细胞表达Ang-1、Ang-2和Tie-2。结论少腹逐瘀汤含药血清可抑制体外培养的子宫内膜异位症在位内膜细胞Ang-1、Ang-2和Tie-2的分泌,提示少腹逐瘀汤对于治疗子宫内膜异位症可能具有一定的作用。

大肠癌组织中Ang-1、Ang-2及受体Tie-2的表达及意义

目的:旨在研究促血管生成素-1(Ang-1)、促血管生成素-2(Ang-2)和促血管生成素受体(Tie-2)在大肠癌中的表达,分析Ang-1、Ang-2和Tie-2的表达与大肠癌的组织学分化程度的关系,探讨三者在大肠癌进展中的作用,为大肠癌的临床治疗提供新的靶点。方法:应用免疫组化SP法检测64例大肠癌组织中的Ang-1、Ang-2和Tie-2的表达;RT-PCR检测Ang-1、Ang-2和Tie-2mRNA在大肠癌组织中的的表达。结果:Ang-1、Ang-2与Tie-2在癌组织高、中、低分化程度上的表达呈现为肿瘤的分化程度越低,蛋白与RNA表达越明显(P<0.05)。结论:Ang-1、Ang-2及Tie-2的表达程度与大肠癌的进展呈正相关。

益气活血中药对脑出血大鼠脑组织Tie-2受体蛋白表达的影响

目的测定补阳还五汤及其益气组分、活血组分干预后脑出血大鼠脑损伤区组织Tie-2的表达,初步探讨益气活血中药治疗脑出血的作用机制。方法SD大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、益气活血组、益气组和活血组。用Ⅶ型胶原酶诱导脑出血大鼠模型。各组分别灌服相应益气活血法代表方补阳还五汤全方及其益气组分、活血组分药物,于术后1、4、7、14、21和28d分别检测血肿侧脑组织Tie-2的表达。结果正常组、假手术组各时间点Tie-2的表达未见明显阳性信号;模型组、益气组、活血组及益气活血组脑出血后1d即有Tie-2表达,模型组在21d达到高峰、随后下降,益气组、活血组及益气活血组表达高峰时间提前至14d,益气活血组各个时间点表达均高于同时间点其它组。结论益气活血中药可能通过使脑出血血肿周围脑组织Tie-2受体的表达增强,而促进脑出血损伤区血管新生和成熟的作用,并促进脑出血大鼠神经功能的恢复。

鸡Tie-2受体胞外片段的原核表达及目的蛋白免疫原性的研究

目的 研究鸡 Tie- 2受体胞外片段 (配体结合域 )的原核表达以及目的蛋白对小鼠的抗原性。方法 用 PCR方法从既往构建的包含鸡 Tie- 2受体胞外段基因的表达质粒扩增目的片段 ,进而构建 PQE原核表达载体并诱导其目的蛋白的表达 ,将目的蛋白进一步纯化、复性并免疫小鼠 ,获得抗血清 ,用 EL ISA和 Western blotting检测抗血清中抗体的存在。结果 经酶切分析及测序鉴定表明获得了鸡 Tie- 2受体胞外目的片段的 PQE原核表达载体 ,能高效表达目的蛋白 ,将其免疫小鼠可产生抗重组蛋白的抗体。结论 用原核表达的方式可成功的获得鸡Tie- 2受体胞外目的片段的蛋白 。

Ang-1、Ang-2及Tie-2在前列腺癌中的表达

很多细胞因子参与癌症的发生发展,其中参与血管新生的血管生成素（Ang）在肿瘤中的作用愈发明显。研究表明〔1〕在大多数癌组织中Ang-1,Ang-2及其受体Tie-2的表达激活,具有调控肿瘤新生血管形成及重建的作用。本文探讨前列腺癌组织中Ang-1、Ang-2及其受体Tie-2与前列腺癌血管生成的关系。

补阳还五汤对rt-PA溶栓后急性脑梗死大鼠神经细胞凋亡及Ang/Tie-2蛋白表达的影响

目的探究补阳还五汤对rt-PA溶栓后大鼠神经细胞凋亡以及Ang-1、Ang-2和Tie-2基因表达的影响。方法将78只大鼠随机分为正常组(蒸馏水灌胃)、模型组(大脑中动脉栓塞模型组)、rt-PA组(大脑中动脉栓塞模型注射rt-PA)、rt-PA+补阳还五汤低剂量组(大脑中动脉栓塞模型注射rt-PA加补阳还五汤7.42 g/kg)、rt-PA+补阳还五汤中剂量组(大脑中动脉栓塞模型注射rt-PA加补阳还五汤14.84 g/kg)、rt-PA+补阳还五汤高剂量组(大脑中动脉栓塞模型注射rt-PA加补阳还五汤29.69 g/kg),TUNEL法检测细胞凋亡,RT-PCR法检测Bcl-2、Bax、Caspase-3、Ang-1、Ang-2、Tie-2 mRNA的表达,免疫组织化学染色计算Ang-1、Ang-2、Tie-2阳性细胞数量。结果rt-PA+补1组、rt-PA+补2组和rt-PA+补3组神经细胞的凋亡率显著低于rt-PA组(P<0.05);rt-PA+补1组、rt-PA+补2组和rt-PA+补3组中Bcl-2 mRNA的表达显著高于rt-PA组(P<0.05);rt-PA+补1组、rt-PA+补2组和rt-PA+补3组中Bax和Caspase-3 mRNA的表达显著低于rt-PA组(P<0.05);rt-PA+补1组、rt-PA+补2组和rt-PA+补3组中Ang-1 mRNA的表达和Ang-1阳性细胞数量显著高于rt-PA组(P<0.05);rt-PA+补1组、rt-PA+补2组和rt-PA+补3组中Ang-2 mRNA的表达和Ang-2阳性细胞数量明显高于rt-PA组(P<0.05)。结论补阳还五汤对rt-PA溶栓后急性脑梗死大鼠神经细胞凋亡具有抑制作用,同时能够促进Ang-1、Ang-2、Tie-2 mRNA和阳性细胞数量的表达,从而说明补阳还五汤对急性脑梗死起到一定的改善作用,尤其是高剂量的作用效果最为明显。

Ang/Tie-2信号传导系统与视网膜微血管形成

促血管生成素(angiopoietins,Ang)及其受体Tie-2构成的Ang/Tie-2信号传导系统对于血管生成(angiogenesis)过程中血管成熟与稳定、调控血管完整性具有重要意义。该家族不同因子对于血管生成作用不同,而且同一因子对于血管生成的作用也随条件的不同而改变。对于生理和病理状态下的视网膜微血管形成,Ang/Tie-2信号传导系统起到调节血管结构的持久稳定性,调节渗漏的作用,这对于糖尿病视网膜病变(diabeticretinopathy,DR)的治疗提供了一个重要的思路。

口腔鳞癌中促血管生成素-2及受体Tie-2的表达与肿瘤临床病理学参数和微血管特征的关系

目的:探讨口腔鳞癌中促血管生成素-2(Angiopoietin-2,Ang-2)和受体Tie-2的表达及其与肿瘤血管生成、成熟及口腔鳞癌进展的关系。方法:采用免疫组织化学的方法检测62例口腔鳞癌及30例癌旁正常组织和10例正常口腔黏膜中Ang-2、Tie-2、CD34及α-SMA的表达;研究Ang-2及Tie-2的表达与肿瘤微血管密度及血管成熟指数和临床病理学参数间的关系。应用BioMias图像处理系统处理图像。结果:口腔鳞癌中Ang-2及Tie-2的表达显著高于癌旁正常组织和正常口腔黏膜(P均<0.05);Ang-2的表达和肿瘤微血管密度在有淋巴结转移组显著高于无淋巴结转移组(P<0.05);口腔鳞癌间质微血管与癌旁和正常口腔黏膜微血管相比具有血管密度高、不成熟、形态不规则、周长较小的特点(P均<0.01);Ang-2及Tie-2的表达与微血管密度显著相关(P<0.05);Ang-2的表达还与血管成熟指数显著相关(P<0.05)。结论:口腔鳞癌组织中Ang-2及Tie-2表达的上调与肿瘤进展和血管生成密切相关。

基于分子对接研究吲哚咔唑类小分子对Tie-2/VEGFR2的双效抑制作用模式

运用分子对接技术研究了吲哚咔唑类小分子对人血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)和人血管生成素受体Tie-2(ANG-R-Tie-2)的双效抑制作用模式。研究结果表明,吲哚咔唑类小分子的双效抑制作用主要源于两种受体相似的活性口袋,小分子与两者的铰链区均可形成氢键,使其催化活性受到抑制,从而抑制肿瘤细胞的生长。抑制活性的差异主要源于活性口袋的细微差异所导致疏水、静电等相互作用的不同。其中,疏水作用的差异是影响配体选择性的主要原因,静电作用、氢键及空间位阻对结合稳定也有一定影响。该文的研究结果为多靶点酪氨酸激酶小分子抑制剂的设计及提高激酶抑制剂的选择性提供了重要的理论依据。

血管生成素-1、-2及受体Tie-2对胎儿生长受限的影响

目的探讨血管生成素-l(Ang-1)、血管生成素-2(Ang-2)及受体Tie-2在胎儿生长受限(FGR)发病机制中所起作用,为临床上预防和治疗FGR提供新的理论依据。方法采用RT-PCR测定23例正常晚期妊娠妇女(正常妊娠组)及23例FGR晚期妊娠妇女(FGR组)胎盘组织中Ang-1、Ang-2及受体Tie-2mRNA的表达水平。结果 Ang-1、Ang-2及受体Tie-2在两组标本中均有表达。FGR组胎盘组织中Ang-1mRNA表达水平为0.60±0.06,低于正常妊娠组的0.64±0.07,但差异无统计学意义(P>0.05)。FGR组胎盘组织中Ang-2、Tie-2 mRNA表达水平分别为0.34±0.04、0.54±0.04,明显低于正常妊娠组的0.50±0.05、0.73±0.08,差异有统计学意义(P<0.01)。胎盘组织中Ang-1与Ang-2、Tie-2的mRNA表达水平呈正相关(r=0.719、0.729,P<0.01),而且Ang-2与Tie-2 mRNA的表达也呈正相关(r=0.960,P<0.01)。结论 Ang-1、Ang-2及受体Tie-2在胎盘组织标本中均有表达,结合Angs/Tie系统的生物学特性,提示Ang-1、Ang-2及其Tie-2受体在胎盘形成和发展过程中具有重要作用。Ang-1、Ang-2及受体Tie-2在胎盘组织中的表达变化,在FGR的发病中起重要的作用。

急性心肌梗死患者可溶性Tie-2的检测及其对血管新生作用的研究

目的探讨急性心肌梗死患者血清中血管生成素-1(Ang-1)及可溶性酪氨酸激酶受体Tie-2(sTie-2)的浓度变化及重组人可溶性Tie-2/Fc嵌合体对内皮细胞存活及管状形成的作用。方法ELISA法检测急性心肌梗死患者(AM I组,入院当天、发病48、72 h及1周时分别取血)和健康对照组血清中VEGF、Ang-1及sTie-2浓度变化。体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC),观察重组Ang-1及Tie-2/Fc对内皮细胞存活及管状形成的影响。结果AM I组VEGF及Ang-1浓度与对照组相比无显著差异。AM I组sTie-2浓度显著高于对照组,其中以发病48 h的浓度最高,男性血清sTie-2浓度显著高于女性。重组Ang-1能够协同VEGF促进内皮细胞管状形成,重组Tie-2/Fc诱导内皮细胞凋亡,抑制管状形成。结论AM I时血清sTie-2浓度升高并随病程发展而变化,Tie-2/Fc抑制管状形成可能提示AM I患者急性期存在血管新生减低。