Tie2基因对纳米金颗粒进入牙周组织的影响

目的研究Tie2基因表达对不同粒径纳米金颗粒(gold nanoparticles,GNPs)进入牙周组织及停留情况的影响。方法采用实时定量PCR和Western印迹法检测Tie2基因和蛋白在正常和转基因小鼠牙周组织中的表达;冰冻切片检测GFP在牙周组织中相对高表达的部位;小鼠尾静脉注射1 g/kg剂量20、40、60、80 nm粒径GNPs,应用ICP-AES技术检测牙周组织Au含量。结果转基因小鼠比正常小鼠Tie2基因的表达高约2. 5倍。Tie2蛋白在转基因小鼠牙周组织中显著高表达,差异具有统计学意义(P<0. 05)。GFP荧光提示Tie2在转基因小鼠牙周组织血管周围表达相对较高。转基因小鼠和正常小鼠牙周组织中GNPs的累积量随粒径增大而减少,正常小鼠牙周组织中GNPs的累积量明显高于转基因小鼠,差异具有统计学意义(P<0. 05)。结论 Tie2基因高表达不利于GNPs扩散。

转录因子GATA2在TNF-α介导的炎症反应中调节Tie2基因的表达

目的:探讨在炎症刺激因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)介导的炎症反应中转录因子GATA家族成员是否参与了Tie2基因的转录调控。方法:采用实时定量PCR测定TNF-α作用前后人主动脉内皮细胞(HAECs)和肺动脉内皮细胞(HPAECs)中GATA家族成员GATA2、GATA3 mRNA的表达,利用荧光素酶活性检测研究GATA转录因子能否激活Tie2基因启动子,并采用电泳迁移变动分析(EMSAs)和超级迁移率变动试验(super-shift)研究GATA转录因子是否通过与Tie2基因启动子结合,从而激活Tie2基因的表达。结果:TNF-α可诱导人血管内皮细胞HAECs和HPAECs中转录因子GATA2的表达,高表达的GATA2可与Tie2基因启动子上的(T/A)GATA(A/G)序列结合,激活Tie2基因启动子,从而上调Tie2基因的表达。结论:GATA转录因子家族成员GATA2在TNF-α介导的炎症反应中调节了Tie2基因的表达。

表达Tie2基因单核细胞在肿瘤血管生成中作用

近些年来，恶性肿瘤的发病率及死亡率逐年上升。而恶性肿瘤的侵袭、转移、发展已经成治疗肿瘤的瓶颈。从1971年提出“阻断血管，饿死肿瘤”假说，到2004年第1个抑制肿瘤血管药物问世，

Tie2表达载体的构建及其稳定转染SKOV3细胞系的建立

目的构建人Tie2基因真核表达载体,并建立稳定过表达Tie2基因的SKOV3细胞系。方法采用RT-PCR方法从人肝癌细胞BEL-7402细胞系中扩增Tie2基因编码区(c DNA),将产物克隆至p EGFP-N1真核表达载体,构建重组质粒p EGFP-N1-Tie2并测序鉴定。用构建成功的p EGFP-N1-Tie2真核表达载体转染人卵巢癌细胞SKOV3,经G418稳定筛选,分离单克隆,最后获得Tie2稳定表达的SKOV3细胞系,并用实时荧光定量PCR、Western Blot方法鉴定构建结果。结果成功构建p EGFP-N1-Tie2真核表达载体,获得了稳定过表达人Tie2基因的SKOV3细胞株。结论在SKOV3细胞系中稳定过表达人源Tie2基因,为下一步研究Tie2基因的功能和应用奠定了基础。

脑血管畸形中受体酪氨酸激酶TIE_2基因的研究

目的:观察受体酪氨酸激酶TIE_2基因在脑血管畸形中的表达及突变。方法:57例脑血管病(46例脑AVMs)、36例正常人抽取外用静脉血6mL提取基因组 DNA;其中14例 AVMs显微外科手术切除AVM及AVM周围脑组织和8例正常脑血管标本,分别提取总RNA和4％PFA-PBS固定石蜡包埋。采用原位杂交、PCR-SSCP分析TIE_2受体在脑血管畸形中的变化。结果:部分AVMs和AVMs周围脑组织有受体酪氨酸激酶TIE_2 mRNA表达,在“动脉”和“静脉”之间没有明显差别;SSCP电泳结果显示2例 AVMs电泳迁移率与正常对照有差别,与受体酪氨酸激酶TIE_2阳性质粒DNA一致。结论:脑AVMs中有受体酪氨酸激酶TIE_2 mRNA表达,受体酪氨酸激酶TIE_2可能参与脑AVMs的发生。

Tie2-siRNA表达载体对子宫内膜癌Ishikawa细胞株生物学行为的影响

目的探讨Tie2-siRNA表达载体对子宫内膜癌Ishikawa细胞株生物学行为的影响。方法将表达Tie2-siRNA的碱基片段插入含有巨细胞病毒启动子、新霉素抗性基因及绿色荧光蛋白报告基因的质粒中,应用脂质体包涵体技术将质粒转染入子宫内膜癌Ishikawa细胞株,以减少Tie2基因的表达,并采用逆转录PCR及Western blot方法鉴定。用MTT实验描绘各组细胞增殖曲线,流式细胞术检测各组细胞凋亡率。结果成功转染后Tie2基因的mRNA转录水平及蛋白表达水平抑制率分别为75.5%及56.4%,Ishikawa细胞增殖72-h抑制率为73.9%,凋亡率为35.9%。结论体外下调Tie2基因的转录及表达可抑制肿瘤生长,促进细胞凋亡。