人类肿瘤中Tie2阳性单核巨噬细胞研究进展

Tie2阳性单核巨噬细胞(TEMs)是一类表达酪氨酸激酶受体Tie2的单核细胞或巨噬细胞,在人类和鼠类中均有发现,可存在于外周血和组织中,参与肿瘤血管生成、淋巴管生成和免疫抑制等肿瘤微环境的形成。现有研究发现TEMs对于多种肿瘤具有潜在的临床诊断及预后指导意义,有望为肿瘤治疗提供新的靶向策略,本文就TEMs在肿瘤中的研究进展作一综述。

依达拉奉对小鼠单核巨噬细胞白血病细胞RAW264.7炎性反应的抑制作用

目的 探讨依达拉奉(EDA)对小鼠单核巨噬细胞白血病细胞RAW264.7炎性反应的抑制作用。方法 以脂多糖诱导RAW264.7细胞,复制炎性细胞模型。采用CCK-8法检测EDA的细胞毒性作用。实验分为空白组(等体积培养基)、模型组(等体积培养基)、给药组(40μg/mL EDA)。采用Griess法检测细胞中一氧化氮(NO)水平,采用酶联免疫吸附(ELISA)法测定细胞中前列腺素E2(PGE2)、白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素18(IL-18)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、活性氧(ROS)水平;采用实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)法测定细胞中IL-1β和IL-18 mRNA表达水平;采用Western blot法检测细胞中JAK2/信号转导和转录激活因子3(STAT3)通路相关蛋白JAK2,p-JAK2,STAT3,p-STAT3,IL-1β,IL-18的蛋白表达水平。结果 与0μg/mL比较,20,40,80,160μg/mL EDA处理下细胞存活率无显著变化(P <0.05)。与模型组比较,给药组细胞中NO,PGE2,IL-1β,IL-18,TNF-α,ROS水平均显著降低(P <0.05);IL-1β与IL-18 mRNA及蛋白表达水平和p-JAK2/JAK2与p-STAT3/STAT3均显著降低(P <0.05)。结论 EDA可能通过抑制JAK2/STAT3通路的激活而抑制RAW264.7细胞的炎性反应。

表达Tie2单核巨噬细胞在肿瘤进展中的作用

骨髓来源的髓系细胞在肿瘤的转移及血管生成的过程中发挥重要作用,其中一类表达Tie2的单核/巨噬细胞（Tie2＋monocyte/macrophage,TEM）是最近被发现,并引起关注的髓系细胞。在小鼠、人外周血和多个实体肿瘤组织等部位发现了TEMs的存在依据,并且通过与血管内皮细胞的相互作用,参与调节肿瘤微环境中血管的生成。

支原体巨噬细胞活化脂肽-2经Btk/PI3K/Nrf2通路诱导单核细胞表达HO-1

目的观察支原体巨噬细胞活化脂肽2(macrophage-activating lipopeptide-2,MALP-2)诱导人单核细胞系THP-1表达血红素氧合酶-1(hemeoxygenase,HO-1)的分子机制。方法体外培养THP-1细胞,用5 ng/ml的MALP-2刺激12 h。Real-time PCR检测HO-1 mRNA的表达,Western blot检测其蛋白水平及Akt磷酸化;THP-1细胞与不同浓度的Bruton’酪氨酸激酶(Bruton’s tyrosine kinase,Btk)抑制剂LFM-A13作用1 h,随后用MALP-2刺激12 h,Western blot观察其对HO-1表达以及Akt磷酸化的影响;分别采用EMSA和免疫荧光检测核转录因子Nrf2的DNA结合活性和核转位,并观察PI3K抑制剂LY294002对Nrf2的激活和DNA结合活性的改变情况;siRNA干扰Nrf2表达,以证实其在HO-1表达中的作用;最后,采用LFM-A13和血红素处理THP-1细胞,MTT法检测细胞的存活率。结果 MALP-2处理可显著诱导THP-1细胞表达HO-1蛋白和mRNA,LFM-A13处理后,HO-1表达水平随其浓度的增高而降低;同时,LFM-A13也能抑制MALP-2诱导PI3K的激活(Akt磷酸化)。MALP-2能促进Nrf2的核转位并增强其DNA结合活性,而PI3K抑制剂LY294002处理后可抑制Nrf2的激活;RNA干扰Nrf2表达后,HO-1表达显著降低;此外,LFM-A13也可降低血红素处理后THP-1细胞的存活率。而采用HO-1激动剂CoPP诱导后,THP-1细胞的存活率有所增高。结论 MALP-2通过Btk/PI3k/Nrf2诱导THP-1细胞表达HO-1,从而发挥对细胞的保护作用。

阿托伐他汀对急性冠脉综合征患者外周血单核细胞源性巨噬细胞脂蛋白相关磷脂酶A2的影响

目的观察阿托伐他汀对急性冠脉综合征(ACS)患者外周血单核细胞源性巨噬细胞脂蛋白相关磷脂酶A2[Lp-PLA(2)]的影响。方法入选2013年3月—2013年12月ACS患者38例,分离培养ACS患者外周血单核细胞源性巨噬细胞,分为4组:空白对照组、氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)组、阿托伐他汀低浓度组和阿托伐他汀高浓度组。分别给予不同处理,收集培养细胞上清液及巨噬细胞,实时定量RT-PCR法检测巨噬细胞Lp-PLA(2)mRNA表达,Western-blot法检测巨噬细胞Lp-PLA(2)蛋白表达,ELISA法检测培养细胞上清液Lp-PLA(2)、超敏C反应蛋白(hsCRP)、单核细胞趋化因子(MCP-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素6(IL-6)水平。结果 ox-LDL刺激可以明显增加ACS患者外周血单核细胞源性巨噬细胞Lp-PLA(2)mRNA与蛋白的表达,而阿托伐他汀可以显著降低其诱导的Lp-PLA(2)表达增加及炎症因子分泌,且该反应呈浓度依赖性。结论阿托伐他汀抑制ACS患者外周血单核细胞源性巨噬细胞Lp-PLA(2)的表达,从而起到调节炎症反应,稳定斑块作用。

PaCLR介导PaLECT2激活脂多糖刺激的香鱼(Plecoglossus altivelis)单核巨噬细胞功能

香鱼(Plecoglossus altivelis)白细胞衍生趋化因子2(leukocyte cell-derived chemotaxin 2,PaLECT2)可以激活香鱼头肾来源的单核巨噬细胞(monocytes/macrophages,MO/MΦ),提高细菌感染后香鱼存活率。进一步研究显示,PaLECT2与香鱼C型凝集素受体(C-type lectin receptor,PaCLR)相互作用可激活静息状态下香鱼MO/MΦ,增强其免疫活性。在前期基础上,本研究通过抗体封闭实验检测PaCLR是否介导PaLECT2激活LPS刺激的MO/MΦ功能。结果显示,重组PaLECT2成熟肽(rPaLECT2m)显著提高了LPS刺激的香鱼MO/MΦ细胞因子的表达,并增强了其吞噬能力和杀菌活性。封闭PaCLR显著抑制了rPaLECT2m激活LPS刺激的香鱼MO/MΦ细胞因子表达、吞噬和杀菌功能。因此,PaCLR介导PaLECT2可以激活病理状态香鱼MO/MΦ。这一认识进一步揭示了LECT2在病理状态的鱼类巨噬细胞调控和炎症反应中的作用及机制。

单核巨噬细胞上IL-2受体的表达与意义

IL-2R在单核巨噬细胞上的表达,不仅与IL-2调节单核巨噬细胞的功能有关,而且在某些与免疫系统相关联的疾病中也有重要作用.本文将就IL-2R的结构、在单核巨噬细胞中表达的特点及其作用等方面的研究进展作一介绍.

支原体巨噬细胞活化脂肽-2诱导人单核细胞分泌MMP-9

目的观察支原体巨噬细胞活化脂肽-2（MALP-2）对人单核细胞分泌基质金属蛋白酶-9（MMP-9）的影响。方法体外培养人单核细胞系THP-1,分别采用0、0.1、1.0和5.0μg/mL MALP-2刺激THP-1细胞12-18 h,采用实施定量PCR检测MMP-9 m RNA的表达,荧光共振能量转移（FRET）检测MMP-9的酶活性变化,ELISA检测培养上清中MMP-9的含量。结果 THP-1细胞未刺激时,MMP-9的m RNA表达量、酶活性以及分泌水平极低。当给予0.1-5.0μg/mL MALP-2作用18 h后,MMP-9的分泌水平显著增高,细胞培养上清液中MMP-9的酶活性也明显增强。此外,5.0μg/mL MALP-2刺激THP-1细胞6 h后即可诱导MMP-9 m RNA表达,16 h后达到峰值。结论 MALP-2可诱导人单核细胞表达MMP-9,这可能是支原体感染早期重要的致病因素。

Tie2阳性表达的单核细胞在肿瘤血管生成中的作用

肿瘤的转移和复发与肿瘤血管的生成密切相关，肿瘤新生血管的发生机制以及相关的抗肿瘤治疗策略已成为近期的研究热点。何胜利等[1]研究表明，Tie2／血管生成素（angiopoietin，Ang）体系在肿瘤血管生成中发挥重要作用。Ang是一种分泌型的生长因子家族，该家族主要由4种因子组成，其中Ang-1、Ang-2和它们共同的受体Tie2与血管生成密切相关。

高密度脂蛋白和载脂蛋白AⅠ促进单核细胞源性巨噬细胞产生前列腺素E_2

前列腺素 E2 (PGE2 )是巨噬细胞产生的二十烷酸代谢的主要产物之一。为探讨高密度脂蛋白 (HDL )和载脂蛋白 A (apo A )抗动脉硬化的作用机制 ,观察了二者对单核细胞源性巨噬细胞产生 PGE2 的影响。培养的人外周血单核细胞源性巨噬细胞先经过脂质负载 ,再分别与 HDL3和 apo A 孵育 ;利用酶联免疫测定法检测细胞培养物上清液中的 PEG2 含量。结果显示 :孵育 2 4 h后 HDL3组细胞合成与分泌的 PGE2 是对照组的 370 % ,apo A 也增加巨噬细胞 PGE2的产生。HDL3的作用明显大于 apo A ,且呈时间依赖性。表明 HDL3和无脂质 apo A 都可以促进巨噬细胞产生 PGE2 ,这可能参与 HDL和 apo A

2型糖尿病患者单核/巨噬细胞功能研究

目的研究2型糖尿病(T2DM)患者单核/巨噬细胞分泌功能。方法分析T2DM患者及健康者在葡萄糖耐量试验中白细胞介素(IL)-1、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α及胰岛素(Ins)的动态变化。结果 T2DM患者IL-1、IL-6、TNF-α、Ins分泌异常,空腹值偏高,服糖后分泌下降(P<0.05)。结论单核/巨噬细胞与胰腺β细胞分泌功能障碍与T2DM发病机制密切相关。

siRNA对人-单核巨噬细胞TLR2基因表达的抑制

目的:筛选特异性抑制人-单核巨噬细胞TLR2基因表达的siRNA(small interference RNA)序列,在分子水平上初步讨论其在HIV治疗方面的前景。方法:在基因库中寻找TLR2基因的mRNA序列,针对TLR2基因设计并合成3条siRNA,阳性对照为人类看家基因GAPDH siRNA,阴性对照为6-羧基荧光素标记的siRNA(NC-FAM)。采集健康人新鲜外周血,分离单个核细胞,再经贴壁法培养纯化为人-单核巨噬细胞。采用阳离子脂质体试剂Lipofectamine 2000介导转染培养的人-单核巨噬细胞。用q-PCR法测定干扰后单核巨噬细胞的TLR2 mRNA的表达,Western blot法测定干扰后TLR2蛋白表达。结果:转染72 h后,阳性对照组GAPDH mRNA及蛋白的表达明显降低(P<0.05)。siRNAs组TLR2 mRNA表达水平整体有显著性差异(F=41.957,P<0.001),与阴性对照组比较,TLR2 siRNA各组的TLR2 mRNA相对表达水平均明显降低(P<0.05),抑制率分别为46%、43%、43%。WB结果显示,TLR2 siRNA各组的TLR2蛋白表达量显著降低(P<0.05)。结论:本研究设计的siRNA能够有效抑制人-单核巨噬细胞TLR2基因的表达,从分子免疫学角度出发,表明通过阻断siRNA介导的TLR2信号传导通路能够为HIV治疗提供新思路。

90 K／Mac-2 BP 基因沉默增强 HIV-1感染的单核巨噬细胞凋亡

目的研究人单核巨噬细胞株U937的90K/Mac-2BP基因沉默后其mRNA和蛋白水平的表达及其对HIV-1感染单核巨噬细胞凋亡的影响。方法用人单核巨噬细胞株U937作为细胞模型,用R5嗜性的HIV-1全长感染性质粒包装并获得HIV-1病毒,待HIV-1感染U937细胞5 d后,细胞经PE-Annexin V,PerCP-7-AAD染色,用流式细胞仪检测细胞凋亡情况。采用基因沉默技术,将U937细胞中的90K/Mac-2BP基因沉默后,再经HIV-1感染,5 d后检测细胞凋亡情况。结果正常人单核巨噬细胞株U937,经HIV-1感染后细胞凋亡率为(16.27±0.30)%,而90K/Mac-2BP基因沉默后的U937细胞,经HIV-1感染后细胞凋亡率分别增加至(31.26±0.35)%、(25.76±0.30)%、(23.69±0.33)%,具有统计学差异(P<0.05)。结论 90K/Mac-2BP的表达水平能调节HIV-1感染的单核巨噬细胞凋亡。

NDV或H9N2 AIV感染对坦布苏病毒继发感染宿主单核-巨噬细胞的影响

为研究新城疫病毒(NDV)或H9N2禽流感病毒(AIV)对坦布苏病毒(TMUV)继发感染宿主单核-巨噬细胞的影响及其潜在机制,试验通过实时荧光定量PCR方法检测NDV或H9N2 AIV预先感染鸭单核-巨噬细胞和HD11细胞后再感染TMUV 12,24小时时的TMUV基因组拷贝数,分析是否可用HD11细胞替代鸭单核-巨噬细胞进行后续试验;分别通过高分辨率活细胞共聚焦显微镜和ELISA检测NDV和H9N2 AIV感染12,24 h对HD11细胞中活性氧(ROS)和Ⅰ型干扰素(IFN)含量的影响;通过实时荧光定量PCR方法分别检测PMA、外源Ⅰ型IFN与细胞共孵育后,感染TMUV 12,24小时时ROS和24小时时Ⅰ型IFN对TMUV基因组在细胞中复制的影响。结果表明:感染12,24小时时,在鸭单核-巨噬细胞中,NDV混合感染组的TMUV基因组拷贝数极显著低于TMUV单独感染组(P<0.01);感染12,24小时,H9N2 AIV混合感染组的TMUV基因组拷贝数分别显著和极显著低于TMUV单独感染组(P<0.05,P<0.01)。在HD11细胞中,NDV混合感染组的TMUV基因组拷贝数分别显著和极显著低于TMUV单独感染组(P<0.05,P<0.01);H9N2 AIV混合感染组的TMUV基因组拷贝数极显著低于TMUV单独感染组(P<0.01)。感染12,24小时时,NDV和H9N2 AIV均可极显著提高HD11细胞中ROS的含量(P<0.01)。感染24小时时,NDV可显著提高IFN-α的含量(P<0.05),感染12,24小时时,NDV可极显著提高IFN-β的含量(P<0.01);H9N2 AIV可在感染12,24小时时极显著提高IFN-β的含量(P<0.01)。ROS可在感染TMUV 12,24小时时极显著抑制TMUV基因组的复制(P<0.01),Ⅰ型IFN可在感染TMUV 24小时时显著抑制TMUV基因组的复制(P<0.05)。说明可用HD11细胞替代鸭单核-巨噬细胞进行后续试验;在鸭单核-巨噬细胞中,NDV或H9N2 AIV感染均可以有效抑制TMUV基因组的复制,其作用可能是通过提高ROS和Ⅰ型IFN含量实现的。

CTLL_2细胞增殖检测单核/巨噬细胞ADCC效应方法的应用研究

探讨ＣＴＬＬ２细胞增殖检测单核／巨噬细胞ＡＤＣＣ效应方法的应用价值，利用此方法检测比较了健康志愿者外周血单核细胞ＡＤＣＣ效应和非特异杀伤效应，ＬＰＳ刺激单核细胞前后其ＡＤＣＣ效应变化。结果表明检测单核细胞ＡＤＣＣ效应和非特异杀伤效应不存在相关性（Ｐ＞０．０５），活化后单核细胞ＡＤＣＣ效应较活化前明显增强（Ｐ＜０．０１），提示ＣＴＬＬ２细胞增殖检测单核／巨噬细胞ＡＤＣＣ效应方法是特异、灵敏的实验方法，为临床广泛研究单核／巨噬细胞ＡＤＣＣ效应提供一种可靠的检测手段。

过氧化氢刺激RAW264.7巨噬细胞促炎细胞因子和趋化因子基因表达

免疫反应细胞经呼吸瀑布作用产生的活性氧是巨噬细胞促炎细胞因子和趋化因子表达的信号分子,但目前缺乏过氧化氢(H2O2)刺激巨噬细胞表达促炎细胞因子和趋化因子的直接证据.本研究以离体培养的小鼠RAW264.7巨噬细胞为研究体系,探讨外源H2O2对RAW264.7巨噬细胞促炎因子和趋化因子基因表达和生成的影响.MTT法结合实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、酶联免疫吸附试验(ELISA)结果显示,RAW264.7细胞在H2O2浓度低于40μmol/L时不影响RAW264.7细胞的增殖活力.20μmol/L和40μmol/L H2O2显著增强RAW264.7细胞TNF-α、IL-1β、MCP-1和MIP-2基因转录和蛋白质生成,并存在剂量依赖效应;而200 U/m L过氧化氢酶预处理则可减弱由H2O2刺激的TNF-α、IL-1β、MCP-1和MIP-2基因表达和蛋白生成.这些结果提示,H2O2是刺激巨噬细胞促炎因子和趋化因子表达或生成的重要因子,对机体炎症反应的发生具有重要作用.

高糖对体外培养巨噬细胞MIP-2和MCP-1表达的影响

目的观察高糖环境对体外培养巨噬细胞中趋化因子巨噬细胞炎症蛋白-2(MIP-2)和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)表达的影响。方法自小鼠腹腔灌洗液中提取巨噬细胞,分别用高糖型(含葡萄糖25.5 mmoL/L,高糖组)和正常糖型(含4.5 mmol/L葡萄糖,正常组)DMEM培养基进行体外培养,于不同时间点(0、2、4、8、12、24、48 h)收集上清及细胞,分别采用ELISA法和RT-PCR技术检测MCP-1、MIP-2蛋白和mRNA的表达,并进行统计学分析。结果正常组巨噬细胞MIP-2、MCP-1蛋白和mRNA表达在各时间点无统计学差异(P>0.05)。培养后4 h时,高糖组MIP-2蛋白和mRNA表达明显增高,以后逐渐下降;培养后8 h时,高糖组MCP-1蛋白和mRNA表达开始显著增高,12 h时达高峰,24、48 h时略有下降。结论高糖环境可使体外培养的小鼠腹腔巨噬细胞中MIP-2、MCP-1表达明显增加。提示在糖尿病创面愈合过程中,高糖可能通过刺激创面局部巨噬细胞表达趋化因子并导致炎症细胞持续存在而影响其愈合进程。

Toll样受体在金黄色葡萄球菌所致单核-巨噬细胞功能障碍中的作用

目的探讨Toll样受体2(TLR2)和Toll样受体4(TLR4)在金黄色葡萄球菌所致单核-巨噬细胞功能障碍中的作用。方法利用小干扰RNA(siRNA)在单核-巨噬细胞中干预TLR2和TLR4的表达,同时设计无义序列作为对照。利用单核-巨噬细胞对金黄色葡萄球菌的清除实验分析吞噬能力的变化。结果 siRNA-TLR2和siRNA-TLR4的相对表达率分别为45.2%和40.7%,显著低于无义序列的100.0%(P<0.05);金黄色葡萄球菌对siRNA-TLR2和siRNA-TLR4的U937细胞黏附率分别为50.2%和47.1%,与无义序列的100.0%比较差异有统计学意义(P<0.05);金黄色葡萄球菌在siRNA-TLR2和siRNA-TLR4的U937细胞中的清除率分别为46.3%和43.5%,与无义序列的100.0%比较差异有统计学意义(P<0.05);将金黄色葡萄球菌介质处理过的U937细胞的清除率设为100.0%,则金黄色葡萄球菌在TLR2抑制剂Pam3CSK4和TLR4抑制剂脂多糖处理过的U937细胞中的清除率分别为42.7%和40.6%,与无义序列的100.0%比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 TLR2和TLR4的表达有利于单核-巨噬细胞对金黄色葡萄球菌的清除。

丙泊酚调节脂多糖诱导的RAW264.7单核巨噬细胞M1/M2型极化的研究

目的研究丙泊酚对脂多糖诱导的RAW264.7单核巨噬细胞M1/M2型极化的影响.方法不同剂量的丙泊酚处理脂多糖诱导的RAW264.7单核巨噬细胞,CCK8检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡率和线粒体膜电位的变化,Western印迹检测Bax/Bcl-2、iNOS和Arg-1蛋白质水平,RT-PCR检测iNOS、IL-1β、Arg-1和IL-10 mRNA水平,ELISA检测IL-6、TNF-α、IL-4和IL-10含量.结果与模型组比较,25和50μmol/L丙泊酚组细胞活力显著升高(P<0.05),细胞凋亡率和Bax/Bcl-2蛋白质水平显著降低(P<0.05),JC-1红绿荧光比值显著升高(P<0.05),iNOS和IL-1βmRNA水平显著降低,Arg-1和IL-10 mRNA水平显著增高(P<0.05),IL-6和TNF-α含量显著降低,IL-4和IL-10含量显著增高(P<0.05).结论丙泊酚能够抑制脂多糖诱导的RAW264.7单核巨噬细胞M1型极化,促进M2型极化.