土茯苓乙酸乙酯部位总黄酮纯化工艺、特征图谱及其对重金属铅解毒作用研究

目的优选土茯苓乙酸乙酯部位总黄酮的纯化条件,建立其特征图谱,并评价其对重金属铅解毒作用,以期为土茯苓解铅毒作用方面的开发和应用提供数据基础及参考。方法采用紫外分光光度法测定总黄酮的含量,并以此作为评价指标,考察6种不同色谱填料对土茯苓乙酸乙酯部位总黄酮纯化性能,筛选最佳纯化工艺;采用高效液相色谱法建立纯化后总黄酮的特征图谱;并以重金属铅致小鼠慢性毒性为动物模型,以铅含量、生化指标及组织形态学检测结果为指标,评价纯化后总黄酮解铅毒的活性。结果土茯苓乙酸乙酯部位总黄酮最佳纯化工艺为选用微孔树脂(MCI)填料,25%乙醇水溶液为上样溶剂冲洗3倍柱体积(VB),60%乙醇水溶液为洗脱溶剂洗脱3 VB,总黄酮含量78.0%。建立了总黄酮高效液相色谱(HPLC)特征图谱,指认了5个特征共有峰。与模型组对比,总黄酮组小鼠采食量增加,血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、肌酐(Cr)、血尿素氮(BUN)水平趋于正常,小鼠血液、肝脏和肾脏铅含量显著降低;病理切片结果显示,总黄酮对于铅诱导的肝、肾功能损伤具有一定的保护作用。结论土茯苓总黄酮纯化工艺具有结果稳定、操作方便、含量较高特点。总黄酮特征图谱精密度、重复性和稳定性良好。纯化后的总黄酮对重金属铅具有显著解毒作用。研究结果可为土茯苓解铅毒的药效物质基础阐明提供参考,并为研发解铅毒新药提供理论基础。

基于UPLC特征图谱和多成分定量评价不同采收时间枸橘药材质量

目的:基于不同采收时间枸橘药材UPLC特征图谱,结合黄酮类和香豆素类成分的含量测定,明确枸橘成分积累规律,为枸橘的采收和质量控制提供依据。方法:采用UPLC法构建30批枸橘特征图谱,采用相似度评价、聚类分析、主成分分析和正交偏最小二乘判别分析对数据进行处理。采用HPLC法测定其中6个成分的含量。结果:30批样品UPLC特征图谱共标定25个共有峰,相似度为0.913~0.993,指认了7个成分,其中6个成分芸香柚皮苷、柚皮苷、枸橘苷、欧前胡素、异欧前胡素、葡萄内酯的含量分别为0.62~2.40 mg/g、5.75~27.52 mg/g、7.00~53.86 mg/g、0.63~2.94 mg/g、0.11~0.45 mg/g、3.69~9.29 mg/g;聚类分析可将样品分为3类,正交偏最小二乘判别分析筛选出5个质量差异标志性成分。不同采收时间枸橘药材可以通过果皮颜色区分,枸橘苷、柚皮苷、欧前胡素等是导致枸橘药材质量产生差异的主要标志物。结论:果皮颜色可作为枸橘药材的采收依据;枸橘苷、柚皮苷和欧前胡素等是枸橘药材质量差异标志物。

3种铁皮石斛种源HPLC特征图谱比较研究

目的研究不同产地种源铁皮石斛高效液相色谱（HPLC）特征图谱,并初步比较丹霞地貌种源（广东、福建、浙江、江西）、浙江本地种、铁皮兰种（广西、云南）特征图谱的差异。方法采用Zorbax SB Aq色谱柱;流动相为乙腈-体积分数为0.2%的甲酸溶液（梯度洗脱）;检测波长为270 nm;柱温为35益;流速为1.0 mL·min^-1。采用国家药典委员会中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件（2004A版）生成对照图谱。结果 10批丹霞种源样品标示出37个特征共有峰,以对照图谱为对照,10批样品的相似度为0.907～0.972;10批丹霞种源生成的对照图谱与5批浙江本地种对照图谱、5批铁皮兰种对照图谱的相似度分别为0.855,0.700。结论分析方法准确可靠,重复性好;提出了铁皮石斛＂丹霞铁皮种＂、＂浙江本地种＂、＂铁皮兰种＂的种源概念;3种铁皮石斛种源主要成分群基本一致,显示铁皮石斛内在成分的稳定性;不同道地产地种源成分群比例以及少数特征峰存在差异,又为区分丹霞种源、浙江本地种、铁皮兰种区域特征提供一定依据。

木瓜黄酮的提取及其紫外光谱特征

木瓜含有清除人体活性氧自由基的黄酮类化合物。本文介绍以乙醇浸提、乙酸乙酯萃取提取木瓜中的黄酮类化合物,并以AB-8大孔树脂对粗提物进一步提纯的工艺。对纯化提取物的分析结果表明:木瓜黄酮的含量(以芦丁标准品计)为4.8%,对其紫外光谱特征谱图的观察分析发现:木瓜提取物中含有A-环苯酰结构和B-环肉桂酰结构,图谱特征与对照品芦丁相似,这一图谱特征说明木瓜提取物具有类黄酮化合物C6-C3-C6的基本结构。

黄芪中氨基酸、黄酮类成分的特征薄层图谱鉴别

目的建立黄芪中氨基酸、异黄酮类成分的薄层特征图谱检查方法。方法归纳总结《中国药典》2005年版、中药成方制剂标准及新药转正标准等相应标准中涉及黄芪中氨基酸、异黄酮类成分的检查法,试验筛选比较,最终确定特征薄层图谱。结果两类成分的特征成分分离良好。结论本方法简便易行,可用于黄芪中氨基酸、异黄酮类成分的检查。

基于酚类特征图谱的人参质量表征关联分析研究

目的建立基于酚类特征图谱的人参质量表征关联分析方法与评价模式,为有效精准地评价人参质量奠定基础。方法运用HPLC-PDA法表征人参酚类特征图谱中13个特征峰及其所属化学类型,对16批人参饮片进行质的表征;建立HPLC同时测定对羟基苯甲酸、阿魏酸、槲皮素、山奈酚、异鼠李素含量的方法,并表征酚类成分和指标;建立可见分光光度法测定人参饮片中总酚的含量,基于酚类成分及其和指标与总酚的含量对16批人参饮片进行量的表征;对人参中各酚类成分及其和指标与总酚含量的关联性、质量表征规律进行分析,并基于参比饮片(批号16)对16批人参质与量的表征结果进行关联性分析。结果 16批人参酚类特征图谱中均含有13个特征峰,其中酚酸类10个,黄酮类3个;得出酚类有效指标性成分与总酚含量的相关系数范围及各成分含量分布规律,并得出各批次人参饮片中各成分含量与参比饮片比较的总体含量变化趋势及关联度。结论所建立的基于酚类特征图谱的人参质量表征关联分析模式,为关注人参质量整体关联性与应用有效性及有效精准地评价人参饮片质量奠定基础。

基于“以广南者为佳”的广西铁皮石斛HPLC特征图谱研究

目的探讨"以广南者为佳"的广西铁皮石斛种源的主要来源,建立广西铁皮石斛HPLC特征图谱分析方法。方法采用Agilent ZORBAX SB C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈-10 mmol/L乙酸铵溶液(梯度洗脱);检测波长为340 nm;柱温为35℃;流速为1.0 mL/min。结果 12批广西铁皮石斛可分为2类,其中第Ⅰ类10批样品(产于广西丹霞地貌),标示出10个共有峰,相似度为0.856~0.970;第Ⅱ类2批(产于石灰岩地貌),共标示出9个共有峰,此2批石斛与第Ⅰ类共有模式的相似度分别为0.422、0.332。在选取的保留时间范围内,对照药材、福建丹霞种、浙江种、云南种与广西种第Ⅰ类铁皮石斛共有模式比较,相似度分别为0.575、0.158、0.397、0.757。结论广西容县、桂平等广西丹霞地貌原生的铁皮兰为"以广南者为佳"之广西铁皮石斛的代表性承载主体,且与云南广南等地的种源相似度较高,但与广东、福建等地丹霞地貌种、浙江本地种存在一定差异。建议《中国药典》采用的铁皮石斛对照药材应充分考虑这种不同道地种源之间的差异。

淫羊藿配方颗粒UPLC特征图谱及主要成分含量测定研究

目的:建立淫羊藿配方颗粒UPLC特征图谱及含量测定方法,为淫羊藿配方颗粒的质量控制提供依据。方法:采用HPLC法及紫外-可见分光光度法分别测定淫羊藿配方颗粒中淫羊藿苷和总黄酮含量,并建立淫羊藿配方颗粒UPLC特征图谱。结果:18批淫羊藿配方颗粒中淫羊藿苷和总黄酮的含量范围分别为3.2%~5.9%、19.2%~31.6%;UPLC特征图谱确定了5个共有峰,通过与对照品比较,分别为朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷和宝藿苷-Ⅰ,对18批淫羊藿配方颗粒进行相似度比较,其相似度均大于0.900。结论:本研究建立的方法精密度、重复性和稳定性良好,可用于淫羊藿配方颗粒的质量控制和评价。

3种种源铁皮石斛叶黄酮类成分HPLC特征图谱比较

目的:研究不同产地种源铁皮石斛叶黄酮类成分HPLC特征图谱,并初步比较丹霞地貌种源(广东、福建、浙江、江西)、浙江本地种、铁皮兰种(广西、云南)特征图谱的差异。方法:采用Kromasil 100-5 C_(18)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相甲醇-水(梯度洗脱),检测波长340 nm,柱温25℃,流速0.8 m L·min^(-1)。采用国家药典委员会"中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件"(2004A版)生成共有模式。结果:3种种源的23批样品共标示出14个共有特征峰。其中,10批丹霞种源样品标示出12个共有特征峰(峰14为最强峰),样品相似度为0.880~0.996;6批浙江本地种源样品标示出13个共有特征峰(主要峰的相对峰面积较接近),样品相似度0.774~0.981;7批铁皮兰种源样品标示出9个共有特征峰(峰10,峰11相对峰面积较大),样品相似度0.922~0.974。丹霞种源对照图谱与浙江本地种对照图谱、铁皮兰种对照图谱的相似度分别为0.395,0.061,铁皮兰种对照图谱与浙江本地种对照图谱相似度仅为0.370。结论:该分析方法准确可靠,重复性好;相同种源铁皮石斛叶黄酮类成分群基本一致,显示铁皮石斛叶内在的稳定性;不同产地种源成分群组成及比例存在明显差异,亦为快速区分丹霞种源、浙江本地种、铁皮兰种区域特征提供了依据。

蒲公英酚类特征成分含量测定及其特征图谱质量表征关联分析

目的：建立蒲公英酚类特征成分的含量测定方法及其酚类特征图谱质量表征关联分析方法,应用关联分析评价模式,以有效、精准地评价蒲公英饮片质量。方法：采用HPLC对15批蒲公英饮片中的酚类特征成分（原儿茶酸、单咖啡酰酒石酸、绿原酸、咖啡酸、对香豆酸、异绿原酸A和菊苣酸、木犀草素、木犀草苷）进行含量测定。建立蒲公英酚类特征图谱,基于特征图谱中特征峰的梳理及所属化学类型对15批蒲公英饮片进行质的表征;基于特征图谱中特征成分原儿茶酸,单咖啡酰酒石酸,绿原酸,咖啡酸,对香豆酸,异绿原酸A,菊苣酸,木犀草苷,木犀草素及酚酸类（以咖啡酸表征）,黄酮类（以木犀草素表征）的含量和峰面积分别对15批蒲公英饮片进行量的表征,并基于基准饮片对15批蒲公英饮片质与量的表征结果进行关联性分析。结果：各特征成分均具有良好的线性关系,方法学考察符合定量要求。以样品S1为基准饮片,在蒲公英酚类特征图谱中共含有14个特征峰,其中酚酸类成分特征峰10个,黄酮类成分特征峰4个,15批饮片色谱图中均含有此14个特征峰。采用质量表征关联分析与评价模式,得出特征成分含量总体较高的样品为S3,S14,S4,S6,S9和S12;与基准饮片关联度较高的样品为S10,S6,S12,S7和S2;综合评价得优良度居前的样品为S6,S12,S3,S10和S1。结论：所建立的蒲公英酚类特征成分含量测定方法简便、准确,构建的蒲公英酚类特征图谱质量表征关联分析模式可用于分析蒲公英饮片的质量与应用有效性,可有效精准地评价蒲公英的质量。

铁皮石斛黄酮苷类成分HPLC特征图谱优化及不同种源特征性分析

目的:优化铁皮石斛黄酮苷类成分HPLC特征图谱分析方法,明确不同种源的共性成分与特异性成分。方法:色谱条件采用Kromasil 100-5 C18色谱柱;流动相四氢呋喃-乙腈-甲醇(10∶22∶5)-0.05%磷酸水溶液梯度洗脱;检测波长340nm;柱温30℃;流速1.0mL·min^-1。结果:27批铁皮石斛共标示出13个黄酮类特征峰,鉴别了6个黄酮碳苷(新西兰牡荆苷Ⅱ,新西兰牡荆苷Ⅰ,夏佛塔苷,异夏佛塔苷,佛莱心苷,异佛莱心苷)与1个黄酮氧苷(芦丁)共7个特征峰。不同批次样品检出7~11个特征峰,其中新西兰牡荆苷Ⅱ为不同来源样品相对稳定的共有峰,芦丁、佛莱心苷与异佛莱心苷特征峰差异较大。根据特征峰的相对丰度,可将样品分为3大类,其中第Ⅰ类10批样品主要来源于广东、江西、福建、浙江(武义)等丹霞地貌(即"丹霞种"),以检出明显的芦丁强峰为特征;第Ⅱ类11批样品主要来源于云南、广西等地(包括了"云南广南种""广西铁皮兰种"),以能检出佛莱心苷与异佛莱心苷特征峰为特征;而第Ⅲ类6批样品主要来源于浙江(即"浙江本地种"),以难以检出佛莱心苷与异佛莱心苷特征峰,检出不同程度的芦丁峰为特征。比较"丹霞种"与"广西铁皮兰种"的仿野生和大棚栽培铁皮石斛HPLC特征图谱,结果仿野生铁皮石斛中的特征峰在大棚栽培石斛中也能稳定检出,验证了铁皮石斛种源的可靠性。结论:所建立的分析方法能对铁皮石斛黄酮类特征峰达到较好的分离效果,重复性好,基本明确了不同种源铁皮石斛的共性及特异性黄酮苷类成分。提示新西兰牡荆苷Ⅱ适合作为特征图谱的参照物峰;可根据芦丁相对丰度或佛莱心苷与异佛莱心苷特征峰的检出及相对丰度作为铁皮石斛"丹霞种""云南广南与广西铁皮兰种"与"浙江本地种"的判断依据。

奥兰替胃康片多指标质量控制体系的建立

目的：探索奥兰替胃康片的多指标质量控制方法,建立其HPLC特征图谱,并测定其主要黄酮苷类成分的含量。方法：选择新北美圣草苷、柚皮芸香苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷为指标成分,采用YMC-Pack ODS-A色谱柱（4.6 mm×250 mm,5μm）,以乙腈-0.1%磷酸水溶液（18∶82）为流动相等度洗脱,检测波长283 nm,流速1.0 mL·min^-1,柱温30℃。结果：建立了奥兰替胃康片的HPLC特征图谱,对10批次奥兰替胃康片中的5个特征峰进行含量测定,新北美圣草苷、柚皮芸香苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷质量浓度分别在0.266 5-10.66 mg·L^-1（r=0.999 9）,1.055-42.20 mg·L^-1（r=1.000 0）,7.070-282.8 mg·L^-1（r=1.000 0）,0.797 8-31.91 mg·L^-1（r=0.999 9）,6.955-278.2 mg·L^-1（r=1.000 0）与峰面积呈良好线性关系,平均加样回收率分别为99.4%（RSD 1.0%）,100.5%（RSD 0.6%）,97.8%（RSD 0.9%）,96.7%（RSD 0.7%）和98.3%（RSD 0.8%）。奥兰替胃康片与原料枳实总黄酮苷提取物的特征图谱相似度1.000。结论：建立的特征图谱和指标成分含量测定方法稳定可行、专属性强,可作为奥兰替胃康片的多指标质量控制方法。