进境黑麦草种子中黑麦草腥黑粉菌的鉴定

从广州 (1997)和天津 (1999)进境的美国黑麦草种子中均发现一种类似中国一类危险性有害生物小麦印度腥黑粉菌 (TilletiaindicaMitra)的冬孢子。其大小分别为 2 8 9～ 4 3 7μm和 2 9 2～ 4 0 2 μm ,淡黄色至暗褐色 ,半透明至不透明 ,球形至亚球形 ,疣状突起常呈钝圆状 ,表面有脊状突起。检疫中常因其与印腥冬孢子极为相似而引起误诊。经形态学特征观察、PCR分析和PCR扩增产物测序分析 ,鉴定为黑麦草腥黑粉菌 (Tilletiawalkeri)。

小麦印度腥黑穗病菌和黑麦草腥黑穗病菌的单孢检测

设计了小麦印度腥黑穗病菌 (Tilletiaindica)和黑麦草腥黑穗病菌 (Tilletiawalkeri)通用引物H4 /H7和H11/H12 ,结合T .indica特异性引物Tin3/Tin4和T .walkeri特异性引物Tin11/Tin4建立了检测T .indica和T .walkeri冬孢子的套式PCR (nestedPCR)检测方法。检测的灵敏度达 1个冬孢子 ,检测时间缩短为 8h。PCR产物的测序验证了PCR反应的可靠性。这一方法克服了冬孢子休眠或不具存活力以及常规PCR检测时间长的困难 。

小麦印度腥黑粉菌与近似种的形态学比较

利用光学显微镜和扫描电镜对小麦印度腥黑粉菌及其近似种的形态学特征进行了系统研究。T. indica和T. horrida不同菌株冬孢子大小变化范围均较大。在所研究的种中,T. indica与T. walkeri最近似,前者冬孢子大小平均值比后者略大,分别为:38.35?5.92祄和32.86?1.53祄。T. indica与其它具有疣状或刺状突起的腥黑粉菌:T. horrida, T. barclayana, T. setariae, T. opaca, T. sumatii和T. savilei等区别明显,T. indica冬孢子大小平均值明显大于这些腥黑粉菌,前者大于30祄,后者则小于30祄, T. indica孢壁纹饰与这些腥黑粉菌也有一定区别。应用光学显微镜和扫描电镜,能将T. indica与除T. walkeri之外的其它近似种区别开,但在区别T. indica与T. walkeri方面则有一定的局限性。

PCR技术在印度腥黑穗病菌检测和鉴定中的应用

利用 2对小麦印度腥黑穗病菌 (Tilletiaindica Mitra)特异性引物 (Tin3/Tin4 ,F3/R1)和 2对黑麦草腥黑穗病菌T .walkeri特异性引物 (Tin7/Tin8,Tin11/Tin4 )建立快速鉴定T .indica及其近似种T .walkeri的PCR程序。引物Tin3/Tin4 ,F3/R1可特异性扩增T .indica分别得到 4 15bp和 4 98bp产物 ,扩增 T .walkeri无产物 ;引物Tin7/Tin8,Tin11/Tin4可特异性扩增T .walkeri 得到 391bp和 4 15bp产物 ,扩增 T .indica 无产物。 4对引物扩增 T .horrida、T .controversa和T .laevis无产物。产物片段的测序验证了PCR反应的可靠性。为进口粮检疫中T .indica的鉴定提供了快速、简便。

利用ITS和mtDNA序列鉴定进境小麦样品中的黑麦草腥黑穗菌

从上海口岸进境美国小麦样品中发现一种腥黑穗菌冬孢子,其形态特征与黑麦草腥黑穗菌(Tilletia walkeri)相似。为了对该冬孢子进行准确鉴定,利用PCR扩增其ITS区和线粒体DNA序列,PCR产物测序结果显示ITS区序列和线粒体DNA序列均与T.walkeri高度相似。根据冬孢子形态特征、ITS区和线粒体DNA序列分析结果,将该冬孢子鉴定为黑麦草腥黑穗菌(T.walkeri)。