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用λZAPExpress作载体构建金针菇子实体表达型cDNA文库
被引量:
3
1
作者
周凯松
常宁
+2 位作者
彭俊峰
张晗星
张长铠
《菌物系统》
CSCD
北大核心
2003年第1期101-106,共6页
采用QuickPrepmicromRNAPurification试剂盒从新鲜金针菇子实体中快速提取、纯化mRNA,TimeSavercDNASynthesis试剂盒逆转录成cDNA分子后,通过在cDNA分子两端加上EcoRⅠ/NotⅠ接头,在T4多核苷酸激酶的作用下磷酸化,与表达载体λZAPExpres...
采用QuickPrepmicromRNAPurification试剂盒从新鲜金针菇子实体中快速提取、纯化mRNA,TimeSavercDNASynthesis试剂盒逆转录成cDNA分子后,通过在cDNA分子两端加上EcoRⅠ/NotⅠ接头,在T4多核苷酸激酶的作用下磷酸化,与表达载体λZAPExpressPredigestedVector连接,然后用包装蛋白在体外包装连接产物,感染E.coliXL1-BlueMRF捁菇ǔ杀泶颿DNA文库。经检测:文库滴度为4.0×106pfu/ml,文库扩增后,滴度达2.0×1010pfu/ml,重组率为90%,cDNA分子长度在0.3-3.5Kb范围。应用原位免疫杂交,初步筛选出火菇素相关基因的阳性克隆。
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关键词
滴度
重组率
免疫筛选
金针菇子实体
表达型cDNA文库
载体构建
火菇素
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职称材料
禽流感病毒NS1A蛋白诱导人肺癌细胞SPC-A1的凋亡
被引量:
1
2
作者
邓扬
刘殿峰
+1 位作者
王坤
张锐
《中国生物制品学杂志》
CAS
CSCD
2007年第11期821-824,共4页
目的研究禽流感病毒NS1A蛋白对人肺癌细胞SPC-A1增殖的影响。方法将含有NS1A基因的重组质粒pVAX1-NS1A经脂质体介导转染人肺癌细胞SPC-A1,用MTT检测其对细胞增殖的抑制作用;Annexin VFITC-PI结合流式细胞仪检测细胞凋亡率;PI结合流式细...
目的研究禽流感病毒NS1A蛋白对人肺癌细胞SPC-A1增殖的影响。方法将含有NS1A基因的重组质粒pVAX1-NS1A经脂质体介导转染人肺癌细胞SPC-A1,用MTT检测其对细胞增殖的抑制作用;Annexin VFITC-PI结合流式细胞仪检测细胞凋亡率;PI结合流式细胞仪检测细胞周期的变化;对转染细胞的表达产物进行Western blot分析。结果NS1A蛋白能抑制人肺癌细胞SPC-A1增殖且呈时间依赖性。随着作用时间延长,重组质粒转染组细胞凋亡率可达38.17%,细胞周期中G0/G1比例升高,G1期阻滞。Western blot分析显示,重组质粒转染组细胞在相对分子质量约30000处可见特异性反应条带,与NS1A蛋白产物大小相符。结论禽流感病毒NS1A蛋白能够抑制SPC-A1细胞增殖,并诱导SPC-A1细胞凋亡。
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关键词
禽流感病毒
NS1A蛋白
肺癌细胞
SPC-A1细胞
凋亡
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职称材料
低氧诱导因子1α过表达对PC12细胞在CoCl2拟缺氧模型中凋亡的影响
被引量:
5
3
作者
赵宁辉
杨勇涛
+3 位作者
徐蔚
郝金刚
赵娜
黄晓玮
《中华神经医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第12期1189-1192,共4页
目的 研究CoCl2处理拟缺氧损伤条件下低氧诱导因子1α(HIF-1α)过表达对PC12神经细胞凋亡状态的影响.方法 分化后的PC12细胞分为2组,实验组转染pEGFPC1-HIF-1α△ODD表达质粒,对照组转染pEGFPC1.CoCl2处理模拟细胞缺氧损伤条件;Wester...
目的 研究CoCl2处理拟缺氧损伤条件下低氧诱导因子1α(HIF-1α)过表达对PC12神经细胞凋亡状态的影响.方法 分化后的PC12细胞分为2组,实验组转染pEGFPC1-HIF-1α△ODD表达质粒,对照组转染pEGFPC1.CoCl2处理模拟细胞缺氧损伤条件;Western blotting检测2组细胞常氧和缺氧时HIF-1α的表达;Hochest33342染色、流式细胞仪和Caspase-3活性检测3种方法观察神经细胞拟缺氧损伤时HIF-1α的过表达对细胞凋亡的影响.结果 50 μmol/L及100μmol/L CoCl2处理PC12细胞12 h、24 h可以诱导细胞拟缺氧损伤模型,实验组细胞常氧和缺氧时HIF-1α表达均高于对照组.Hochest33342染色结果提示实验组凋亡细胞明显少于对照组细胞.50 μmol/L CoCl2处理24 h后,流式细胞仪结果显示实验组细胞凋亡率为(5.41±3.29)%,对照组为(8.35±2.59)%,差异有统计学意义(P<0.05).加入50μmol/LCoCl2处理12 h后,实验组细胞中Caspase-3活性的增加倍数明显低于实验组细胞.结论 适量CoCl2处理的神经细胞系拟缺氧损伤模型中,HIF-1α的过表达对细胞凋亡有显著的抑制作用.
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关键词
细胞低氧
低氧诱导因子1Α
二氯化钴
细胞凋亡
原文传递
题名
用λZAPExpress作载体构建金针菇子实体表达型cDNA文库
被引量:
3
1
作者
周凯松
常宁
彭俊峰
张晗星
张长铠
机构
山东大学微生物技术国家重点实验室
出处
《菌物系统》
CSCD
北大核心
2003年第1期101-106,共6页
基金
教育部博士点基金(No. 2000042212)
文摘
采用QuickPrepmicromRNAPurification试剂盒从新鲜金针菇子实体中快速提取、纯化mRNA,TimeSavercDNASynthesis试剂盒逆转录成cDNA分子后,通过在cDNA分子两端加上EcoRⅠ/NotⅠ接头,在T4多核苷酸激酶的作用下磷酸化,与表达载体λZAPExpressPredigestedVector连接,然后用包装蛋白在体外包装连接产物,感染E.coliXL1-BlueMRF捁菇ǔ杀泶颿DNA文库。经检测:文库滴度为4.0×106pfu/ml,文库扩增后,滴度达2.0×1010pfu/ml,重组率为90%,cDNA分子长度在0.3-3.5Kb范围。应用原位免疫杂交,初步筛选出火菇素相关基因的阳性克隆。
关键词
滴度
重组率
免疫筛选
金针菇子实体
表达型cDNA文库
载体构建
火菇素
Keywords
tilter recombinant rate
,
western blotting
分类号
Q943 [生物学—植物学]
下载PDF
职称材料
题名
禽流感病毒NS1A蛋白诱导人肺癌细胞SPC-A1的凋亡
被引量:
1
2
作者
邓扬
刘殿峰
王坤
张锐
机构
吉林省人民医院急诊内科
吉林大学实验动物中心
长春市药品检验所
长春市标准化信息编码研究所
出处
《中国生物制品学杂志》
CAS
CSCD
2007年第11期821-824,共4页
文摘
目的研究禽流感病毒NS1A蛋白对人肺癌细胞SPC-A1增殖的影响。方法将含有NS1A基因的重组质粒pVAX1-NS1A经脂质体介导转染人肺癌细胞SPC-A1,用MTT检测其对细胞增殖的抑制作用;Annexin VFITC-PI结合流式细胞仪检测细胞凋亡率;PI结合流式细胞仪检测细胞周期的变化;对转染细胞的表达产物进行Western blot分析。结果NS1A蛋白能抑制人肺癌细胞SPC-A1增殖且呈时间依赖性。随着作用时间延长,重组质粒转染组细胞凋亡率可达38.17%,细胞周期中G0/G1比例升高,G1期阻滞。Western blot分析显示,重组质粒转染组细胞在相对分子质量约30000处可见特异性反应条带,与NS1A蛋白产物大小相符。结论禽流感病毒NS1A蛋白能够抑制SPC-A1细胞增殖,并诱导SPC-A1细胞凋亡。
关键词
禽流感病毒
NS1A蛋白
肺癌细胞
SPC-A1细胞
凋亡
Keywords
Objective To study the influence of NS1A protein of avian influenza virus on the proliferation of human lung cancer SPC-A1 cells.Methods Transfect human lung cancer SPC-A1 cells with
recombinant
plasmid pVAX1-NS1A in mediation of liposome.Determine the inhibiting effect on cell proliferation by MTT method,the apoptosis
rate
by Annexin V FITC kit,PI and flow cytometry,and the cell cycle by PI and flow cytometry.Identify the expressed product in transfected SPC-A1 cells by
western
blot.Results NS1A protein showed a time-dependent inhibiting effect on the proliferation of SPC-A1 cells.The apoptosis
rate
of SPC-A1 cells transfected with
recombinant
plasmid pVAX1-NS1A reached 38.17%,and the percentage of cells at G0/G1 stages increased as time goes on.The cycle of transfected SPC-A1 cells was blocked at stage G1.Wesetent blot showed a specific reaction band with relative molecular mass of about 30 000,which was consistent with that of NS1A protein.Conclusion The NS1A protein of avian influenza virus inhibited the proliferation and induced the apoptosis of human lung cancer SPC-A1 cells.Avian influenza virus
NS1A protein
Lung cancer
SPC-A1 cells
Apoptosis
分类号
R734.2 [医药卫生—肿瘤]
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职称材料
题名
低氧诱导因子1α过表达对PC12细胞在CoCl2拟缺氧模型中凋亡的影响
被引量:
5
3
作者
赵宁辉
杨勇涛
徐蔚
郝金刚
赵娜
黄晓玮
机构
昆明医学院第二附属医院神经外科
昆明医学院第二附属医院放射科
云南大学生物资源保护与利用重点实验室
出处
《中华神经医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第12期1189-1192,共4页
基金
国家自然科学基金面上项目(30660190)
云南省科技厅-昆明医学院联合专项基金(2008CD021,20080CD19)
云南省中青年学术技术带头人后备人才项目(2009C1034)
文摘
目的 研究CoCl2处理拟缺氧损伤条件下低氧诱导因子1α(HIF-1α)过表达对PC12神经细胞凋亡状态的影响.方法 分化后的PC12细胞分为2组,实验组转染pEGFPC1-HIF-1α△ODD表达质粒,对照组转染pEGFPC1.CoCl2处理模拟细胞缺氧损伤条件;Western blotting检测2组细胞常氧和缺氧时HIF-1α的表达;Hochest33342染色、流式细胞仪和Caspase-3活性检测3种方法观察神经细胞拟缺氧损伤时HIF-1α的过表达对细胞凋亡的影响.结果 50 μmol/L及100μmol/L CoCl2处理PC12细胞12 h、24 h可以诱导细胞拟缺氧损伤模型,实验组细胞常氧和缺氧时HIF-1α表达均高于对照组.Hochest33342染色结果提示实验组凋亡细胞明显少于对照组细胞.50 μmol/L CoCl2处理24 h后,流式细胞仪结果显示实验组细胞凋亡率为(5.41±3.29)%,对照组为(8.35±2.59)%,差异有统计学意义(P<0.05).加入50μmol/LCoCl2处理12 h后,实验组细胞中Caspase-3活性的增加倍数明显低于实验组细胞.结论 适量CoCl2处理的神经细胞系拟缺氧损伤模型中,HIF-1α的过表达对细胞凋亡有显著的抑制作用.
关键词
细胞低氧
低氧诱导因子1Α
二氯化钴
细胞凋亡
Keywords
Objective To investigate the effects of over-expression ofhypoxia inducible factor 1α (HIF-1α) on apoptosis of PC12 cells under hypoxic injury condition mimicked by CoCl2. Methods To obtain the neural cell line over-expressing HIF-1α, the
recombinant
eukaryotic expression vector of pEGFPC1-HIF-1α△ODD was transfected into the differentiated PC12 cells, and pEGFPC1 was transfected into the PC12 cells as control group. PC12 cells under simulative hypoxic injury condition was constructed by CoCl2 treatment. The expression of HIF-1α was analyzed under normal and hypoxia conditions, respectively, using the method of
western blotting
. Then Hoechst33342 staining, flow cytometer and caspase-3 activity detection were employed to measure and compare the cell apoptosis
rate
s between the over-expressing HIF-1α cell line and the controls. Results We successfully constructed the model with simulative hypoxic injury to the PC12 cell line via the treatment of 50 μ mol/L or 100 μ mol/L CoCl2 for 12-24 h. The results from
western blotting
illust
rate
d that cells transfected by pEGFPC1-HIF-1α△ODD highly expressed HIF-1α under both normal and hypoxic conditions as compared with the control cells. Furthermore, Hoechst33342 staining indicated that the apoptosis
rate
in those transfected by pEGFPC1-HIF-1α△ODD was significantly decreased as compared with that in the control cells
the apoptosis
rate
in those transfected by pEGFPC1-HIF-1α△ODD (5.41±3.29)% and the control cells (8.35±2.59)% was obviously different 24 h after treatment with 50 μ mol/L CoCl2 (P<0.05).The caspase-3 activities were significantly different between those transfected by pEGFPC1-HIF-1α△ODD (2.152±0.384) and control cells (0.921 ±0.287) 12 h after treatment with 50μmol/L CoCl2 (P<0.05). Conclusion In the model of neural cells undergoing simulative hypoxic injury by the treatment of CoCl2, over-expression of HIF-1α can inhibit the cell apoptosis.Keywords:Cell hypoxia
Hopoxia inducible factor
CoCl2
Apoptosis
分类号
R686 [医药卫生—骨科学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
用λZAPExpress作载体构建金针菇子实体表达型cDNA文库
周凯松
常宁
彭俊峰
张晗星
张长铠
《菌物系统》
CSCD
北大核心
2003
3
下载PDF
职称材料
2
禽流感病毒NS1A蛋白诱导人肺癌细胞SPC-A1的凋亡
邓扬
刘殿峰
王坤
张锐
《中国生物制品学杂志》
CAS
CSCD
2007
1
下载PDF
职称材料
3
低氧诱导因子1α过表达对PC12细胞在CoCl2拟缺氧模型中凋亡的影响
赵宁辉
杨勇涛
徐蔚
郝金刚
赵娜
黄晓玮
《中华神经医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2010
5
原文传递
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