Tim-1蛋白表达及其基因多态性与系统性红斑狼疮患者营养功能的相关性

目的探讨Tim-1蛋白表达及其基因多态性与系统性红斑狼疮(SLE)患者营养功能指标的相关性。方法收集126例SLE患者外周血样;采用ELISA法检测血清中人Tim-1蛋白水平;采用PCR-RFLP法检测外周血DNA样本Tim-1基因-416G>C和-1454G>A多态性;应用免疫比浊法检测血清标本中前白蛋白、铜蓝蛋白、视黄醇结合蛋白的水平;采用电化学发光法检测血清标本中铁蛋白、1,25-二羟维生素D3的水平。结果血清Tim-1蛋白、前白蛋白、铜蓝蛋白、视黄醇结合蛋白、铁蛋白及1,25-二羟维生素D3的浓度分别为(249.7±30.2)pg/m L、(226±42)μg/m L、(363±95)μg/m L、(29.4±13.2)μg/m L、(355±164)ng/m L、(26.4±11.5)ng/m L;-416G>C位点上GG基因型占11.9%,GC基因型占57.1%,CC基因型占31.0%;-1454G>A位点上GG基因型占67.5%,GA基因型占26.2%,AA基因型占6.3%。-416G>C位点不同基因型之间(F=0.575,P=0.564)及-1454G>A位点不同基因型之间(F=1.255,P=0.289)Tim-1蛋白浓度均无统计学差异。Tim-1与前白蛋白显著负相关(r=-0.176,P=0.033),与铜蓝蛋白(r=0.205,P=0.014)和1,25-二羟维生素D3(r=0.166,P=0.042)均显著正相关。-1454G>A位点GG基因型患者血清中前白蛋白水平显著降低(P=0.027),AA基因型患者血清中1,25-二羟维生素D3水平显著降低(P=0.024)。结论血清Tim-1蛋白水平及Tim-1基因-1454G>A位点多态性与SLE患者营养功能指标存在相关性。

云南汉族人群Tim-3启动子区-1516G>T位点多态性与系统性红斑狼疮关联性研究

目的探讨T细胞免疫球蛋白域和黏蛋白域蛋白(Tim)-3启动子区-1516G>T位点基因多态性与云南高原地区汉族人群系统性红斑狼疮(SLE)的遗传易感性及其相关自身抗体的表达有无关联。方法采用限制性片段长度多态性聚合酶链反应方法对132例云南汉族SLE患者和120例健康体检者Tim-3启动子区多态性位点-1516G>T的基因多态性进行检测,同时采用间接免疫荧光法和线性免疫印迹法检测其双链DNA抗体、Sm抗体、核糖核蛋白抗体三种自身抗体。采用直接计数法计算基因型和等位基因频率,进行Hardy-Weinberg平衡检验,基因型和等位基因频率的组间比较、各自身抗体和基因型的相关性比较均采用χ2检验。结果云南汉族人群Tim-3启动子区多态性位点-1516G>T的基因型GG、GT、TT在SLE组频率为:0.818 2、0.181 8、0.0000,在对照组频率为:0.916 7、0.075 0、0.008 3,其基因型和等位基因频率在两组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论云南汉族人群Tim-3启动子区-1516位点存在单核苷酸多态性变异,且其多态性变异与系统性红斑狼疮遗传易感性相关,但其不同基因型可能不会影响SLE相关自身抗体的表达。

儿童哮喘外周血Tim家族基因表达的变化及其意义

目的探讨儿童哮喘外周血Tim家族基因表达的变化及其意义。方法随机选取于2008年6月至2009年1月在笔者所在医院就诊的哮喘患儿纳入哮喘组，哮喘诊断全部符合2003年中华医学会儿科分会呼吸学组修订的《支气管哮喘诊断标准》，共计47例。同时，选取性别和年龄与哮喘组匹配的健康查体儿童51例作为对照组。收集外周静脉全血，抽提总RNA，采用RT—PCR检测Tim-1 mRNA和Tim-3 mRNA的相对表达量．比较两组之间Tim-1 mRNA、Tim-3 mRNA相对表达量的差异。结果哮喘组外周血细胞中Tim-1 mRNA相对表达值（0．104±0．009）显著高于对照组（0．066±0．011）（P〈0．01），哮喘组外周血细胞中Tim-3 mRNA相对表达值（0．250±0．042）显著高于对照组（0．109±0．014）（P〈0．01）。结论哮喘患儿外周血Tim家族基因过度表达，Tim家族基因参与儿童哮喘的发生。

稳定高表达小鼠Tim-4巨噬细胞系RAW264.7-T4的建立

目的建立研究小鼠Tim-4功能的细胞模型。方法常规分离小鼠腹腔巨噬细胞,RT-PCR扩增Tim-4全长基因片段,构建含Tim-4全基因片段的真核表达载体pcDNA3.0-Tim-4,通过BamHⅠ、HindⅢ双酶切及测序鉴定其正确性。利用脂质体将pcDNA3.0和pcDNA3.0-Tim-4分别转染小鼠巨噬细胞系RAW264.7,通过G418加压筛选,建立稳定高表达Tim-4的RAW264.7,并采用RT-PCR、流式细胞术和免疫细胞化学染色法检测Tim-4 mRNA和蛋白的表达水平。结果RT-PCR扩增产物经BamHⅠ、HindⅢ双酶切,与pcDNA3.0连接构建的重组体经酶切和测序,结果与GenBank报道序列一致。RT-PCR结果显示,RAW264.7-T4细胞表达Tim-4 mRNA的水平显著高于对照组,流式细胞术显示RAW264.7-T4高水平表达Tim-4蛋白,免疫细胞化学染色表明Tim-4主要表达于胞膜。结论成功构建了携载小鼠Tim-4全基因的表达载体,并用该重组体建立了稳定高表达Tim-4 mRNA和蛋白的小鼠巨噬细胞系,为进一步探讨Tim-1与Tim-4的相互作用及对免疫细胞功能的影响奠定基础。

Tim-3基因4个SNP位点多态性与宁夏地区回族人群类风湿性关节炎易感性的关联性分析

目的:探讨宁夏地区回族人群中Tim-3基因4个单核苷酸多态性(SNP)位点多态性与类风湿性关节炎(RA)易感性的关联性,为RA的早期预防提供理论依据。方法:采用序列特异性引物聚合酶链式反应(SSP-PCR)及限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)2种方法检测113例RA患者及111例健康个体Tim-3基因-574、-882、-1541和4259共4个位点的单核苷酸多态性。结果:宁夏回族健康人群和RA患者中,Tim-3基因-574、-882、-1541基因型频数和等位基因频数的分布差异均无统计学意义(P>0.05),4259位点基因型和等位基因频数分布差异有统计学意义(P<0.05),RA患者组G等位基因频数(6.36%)显著高于健康组(1.58%)。结论:宁夏回族人群Tim-3基因-574、-882、-1541和4259位点存在单核苷酸多态性变异,其中4259T>G的变异与宁夏回族人群RA发生有关。

Tim-3基因多态性与乙型肝炎病毒感染转归的相关性

目的:研究中国汉族人群T淋巴细胞免疫球蛋白黏蛋白-3(Tim-3)基因标签单核苷酸多态性(tagSNP)rs11741184C/G和rs13170556A/G位点多态性与乙型肝炎病毒(HBV)感染转归的关系.方法:采用SNaPshot技术检测996例慢性乙型肝炎患者及301例急性HBV感染自限性恢复患者Tim-3基因rs11741184和rs13170556tagSNP位点的多态性,计算其基因型和等位基因分布频率及单体型分布频率.结果:Tim-3基因tagSNPrs11741184位点基因型CC、CG、GG在急性乙型肝炎患者中的分布频率分别为84.39%(254/301)、15.28%(46/301)、0.33%(1/301),在慢性乙型肝炎组中分布频率分别为86.04%(857/996)、13.65%(136/996)、0.3%(3/996),两组比较无统计学差异;Tim-3基因tagSNP rs13170556基因型AA、GA、GG在急性乙型肝炎患者中的分布频率分别为68.77%(207/301)、28.57%(86/301)、2.66%(8/301),慢性乙型肝炎组患者中的分布频率分别为68.07%(678/996)、28.41%(283/996)、3.51%(35/996),两组比较无统计学差异.单体型分析显示,中国汉族人群中存在3种单体型(C-A、C-G、G-A),这3种单体型在急性乙型肝炎组分别为75.08%、16.94%、7.97%,慢性乙型肝炎组分别为75.15%、17.72%、7.13%,3种单体型与HBV感染的转归均无相关性.结论:中国汉族人群中Tim-3基因tagSNPrs11741184和rs13170556位点多态性可能与HBV感染的转归不具相关性.

湖北汉族人群Tim-3基因启动子及编码区的分子突变

目的:检测湖北汉族人群Tim-3基因启动子区和编码区的单核苷酸多态性,寻找Tim-3基因的遗传标记。方法:采用分段扩增直接测序的方法检测60名湖北汉族人Tim-3基因的启动子区、全部的外显子区及部分内含子区,将测序结果与NCBI及HapMap计划库中其他人种的数据进行对比,确定湖北汉族人群Tim-3基因突变的位置、类型和频率。结果:在Tim-3基因启动子区和外显子区共发现9个SNPs,包含5个已报道的SNPs和4个新发现的突变位点。湖北汉族人群中检出的4个SNPs rs4704853、rs10515746、rs4704846、rs9313439与日本人分布相似(P>0.05),与欧洲人及非洲人的分布则有统计学意义(P<0.01)。结论:湖北汉族人群Tim-3基因的SNPs分布有别于其他人种,可为在汉族人群中研究Tim-3基因与疾病关联提供依据。

蓝氏贾第虫分离株tim基因序列分析比较研究

为了探讨来源于不同地理位置贾第虫分离株之间的遗传学关系，采用 ｔｉｍ 基因扩增、限制性酶切和 Ｄ Ｎ Ａ 序列分析方法对来自我国（ Ｃ１、 Ｃ２、、 Ｃ Ｈ２、 Ｃ Ｈ３）、柬埔寨（ Ｃ Ａ Ｍ ）、澳大利亚（ Ａ１、 Ａ２）和美国（ Ｂ Ｐ、 Ｃ Ｄ Ｃ）共９ 株蓝氏贾第虫的基因型进行了分析比较。结果表明， Ａ１、 Ａ２ 和 Ｃ Ａ Ｍ 属第１ 型（ Ｗ Ｂ）； Ｃ Ｈ２ 和 Ｃ Ｈ３ 属第２ 型（ Ｊ Ｈ）； Ｃ１、 Ｃ２、 Ｂ Ｐ和 Ｃ Ｄ Ｃ属第３ 型（ Ｇ Ｓ）。本实验结果提示，虫株间遗传学关系并非由地理位置的远近所决定。来源于同一地理位置的虫株其遗传学特性可有很大的差异。相反，来源于地理位置相隔很远的虫株其遗传学特性却可极为相近。贾第虫分离株基因型的确定可为本虫分子系统进化和分子流行病学研究提供重要资料。

支气管哮喘易感区域5q31-33内Tim-3基因单体型分析

目的:探讨染色体上支气管哮喘易感区域5q31-33内Tim-3基因多态性与支气管哮喘的关系。方法:应用限制性片段长度多态性技术方法,分析了118个儿童变应性哮喘核心家系Tim-3基因4个SNPs(rs10053538、rs10515746、rs13170556和rs9313441)的基因型;采用基于家系传递不平衡检验(TDT),分析基因分型数据;应用TRANSMIT软件构建单体型并进行单体型关联分析。结果:①基于家系的TDT分析显示,Tim-3基因的4个SNPs由杂合子父母传递给患病子代的等位基因频率不比预期值高,与哮喘无关(P>0.05)。②Transmit多个位点单体型分析结果显示由Tim-3基因rs10053538、rs13170556、rs9313441构建的单体型与支气管哮喘有关联(Global 2=10.83,P<0.05)。父母传递给患病子女GGG单体型的观察值小于期望值,差异显著(2=8.24,P<0.01)。结论:中国汉族人群中,位于染色体5q31-33区域的Tim-3基因本身或其附近的基因可能与儿童变应性哮喘的易感性相关。

蓝氏贾第鞭毛虫基因分型—磷酸丙糖异构酶(tim)基因序列分析

蓝氏贾第鞭毛虫（简称贾第虫）细胞内的磷酸丙糖异构酶（ｔｉｍ）基因编码磷酸丙糖异构酶。对扩增后的ｔｉｍ基因做序列分析，可对来源于不同地理位置和／或不同宿主的贾第虫株进行基因分型，并以此确定它们之间的遗传学关系。为了确定中国虫株的基因型，我们对分离自北京（Ｃ１），四川（Ｃ２）和福建（Ｃ３）３株人源贾第虫ｔｉｍ基因序列进行了分析。结果表明，Ｃ１和Ｃ２具有相同的遗传学特性，可划归为目前公认的分型系统中的第３型（ＧＳ）。Ｃ３含有两种不同的遗传学类型，即第１型（ＷＢ）和第３型（ＧＳ），表明Ｃ３可能为两种不同遗传学类型的混合株。本研究结果进一步表明，用ｔｉｍ基因扩增和序列分析方法，可探寻世界范围内贾第虫株之间的遗传学关系。

人TIM-4基因启动子的生物信息学分析

目的探讨T细胞免疫球蛋白粘蛋白分子-4(T cell immunoglobulin and mucin domain containing 4,TIM-4)基因启动子区的序列特征、转录因子及其结合位点。方法 NCBI数据库中获取TIM-4基因启动子2500 bp区域,利用Promoter 2.0,Neural Network Promoter Prediction,Promoter SCAN预测TIM-4基因5’端上游的启动子数目及分布;利用CpG Island Promoter Detection与CpG finder预测CpG岛位置;利用Ali Baba 2.1程序搜索TRANSFAC数据库,预测与TIM-4结合的潜在转录因子及结合位点。结果 TIM-4基因序列定位于5q 33.2,序列全长为47505bp;TIM-4基因上游至5’侧翼共2500 bp的序列中存在两个启动子区;启动子序列中未发现CpG岛;TIM-4启动子区共发现187个转录因子结合位点。结论生物信息学在线软件能预测TIM-4基因启动子功能,提高研究启动子的效率,为后续实验构建TIM-4基因启动子表达载体及启动子的定位和功能分析提供理论依据。

变应性鼻炎与Tim-3启动子区基因多态性的研究

目的探讨T细胞免疫球蛋白粘蛋白分子-3（Tim-3）启动子区-1541C〉T基因多态性与变应性鼻炎的关系。方法运用多聚酶链反应技术检测88例变应性鼻炎及102例正常人Tim-3启动子区-1541C〉T基因多态性。结果变应性鼻炎组Tim-3启动子区-1541C〉TC／C、C／T、T／T表型频率分别为：0．9733、0、0．0227，对照组分别为：0．8922、0．0882、0．1960；变应性鼻炎组Tim-3启动子区-1541C、Tim-3启动子区-1541T基因频率分别为：0．9733、0．0227，对照组分别为：0．9363、0．0637，Tim-3启动子区-1541C〉T各种基因型频率在患者组与正常对照组之间的差异无显著性（P〈0．05）。结论广东汉族人群Tim-3启动子区-1541存在单核苷酸多态性变异，Tim-3启动子区-1541C〉T基因多态性与变应性鼻炎明显相关。

Tim-4基因rs7700944位点多态性与宁夏回族人群RA的关联性分析

目的对宁夏回族人群Tim-4基因rs7700944位点多态性与类风湿关节炎(RA)的关联性进行分析,旨在为RA的早期预防提供理论依据。方法采用限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法,对宁夏回族210例RA患者(RA组)和198名健康个体(对照组)Tim-4基因rs7700944位点进行基因型检测及分析。结果在对照组及RA组间,基因型频率(χ2=29.051)及等位基因频率(χ2=14.106)的分布差异均有统计学意义(P<0.01);等位基因A的频率在对照组中显著高于RA组,OR(95%CI)为0.549(0.400～0.752);而等位基因G的频率在对照组中显著低于RA组,OR(95%CI)为1.823(1.330～2.498)(P<0.01)。结论 Tim-4基因rs7700944位点多态性与宁夏回族人群RA的发生具有关联性,其中等位基因G为宁夏回族人群易患RA的危险因子,而等位基因A为保护因子。

尘螨变应性鼻炎与T细胞免疫球蛋白域黏蛋白域蛋白-3(Tim-3)启动子区-882T>C基因多态性的研究

目的探讨T细胞免疫球蛋白域黏蛋白域蛋白-3启动子区-882T>C基因多态性与尘螨变应性鼻炎的关系。方法运用多聚酶链反应技术检测88例尘螨变应性鼻炎及102例正常人Tim-3启动子区-882T>C基因多态性。结果尘螨变应性鼻炎组Tim-3启动子区-882T>CC/C、C/T、T/T表型频率分别为:0.9773、0.0227、0,对照组分别为,0.9804、0.0196、0;尘螨变应性鼻炎组Tim-3启动子区-882T>C、Tim-3启动子区-882T>C基因频率分别为:0.9886、0.0114。对照组分别为:0.9902、0.0098,Tim-3启动子区-882T>C各种基因型频率在患者组与正常对照组之间的差异无显著性(P>0.05)。结论广东汉族人群Tim-3启动子区-882T>C存在单核苷酸多态性变异,Tim-3启动子区-882T>C基因多态性与尘螨变应性鼻炎无明显相关。

云南汉族人群Tim-1基因多态性与系统性红斑狼疮关联性研究

目的探讨Tim-1启动子区-416G>C和-1454G>A位点基因多态性与云南高原地区汉族人群系统性红斑狼疮(SLE)的遗传易感性有无关联。方法采用PCR-RFLP方法对132名云南汉族SLE病人和120名健康体检者Tim-1启动子区多态性位点-416G>C和-1454G>A的基因多态性进行检测,同时采用间接免疫荧光法检测其抗双链DNA抗体、抗Sm抗体、抗RNP抗体三种自身抗体。结果 SLE组和对照组Tim-1启动子区多态性位点-416G>C的基因型及等位基因频率差异均无统计学意义(P>0.05),而-1454G>A位点的基因型及等位基因频率在SLE组与对照组中的差异均有统计学意义(P<0.05);SLE组和对照组三种SLE相关自身抗体检测阳性率差异有统计学意义(P<0.05);SLE组两个位点不同基因型中三种自身抗体检测阳性率的差异均无统计学意义(P>0.05)。结论云南汉族人群Tim-1启动子区-416G>C和-1454G>A位点存在单核苷酸多态性变异,且-1454G>A位点多态性变异与SLE遗传易感性相关,但两位点不同基因型不会影响SLE相关自身抗体的表达。

TIM-3基因在上皮性卵巢癌中高表达并促进癌细胞的增殖和迁移

目的通过挖掘GEPIA数据库中的基因信息,分析T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子3(TIM-3)基因在上皮性卵巢癌(EOC)中的表达及作用机制。方法采用GEPIA数据库在线分析TIM-3基因在EOC组织和正常卵巢组织中的表达水平。收集2018年6月~2019年12月在我院实施卵巢手术治疗的82例EOC癌变组织标本和18例正常卵巢组织标本,免疫组织化学法检测标本组织中TIM-3的表达水平,分析TIM-3表达与EOC临床病理参数的相关性;采用Kaplan-MeierPlotter分析TIM-3表达水平与EOC患者生存之间的关系。qRT-PCR法检测卵巢癌组织和正常组织标本TIM-3和Wnt1 mRNA表达水平及相关性。采用pMAGic 4.0质粒转染构建TIM-3沉默卵巢癌SKOV3细胞系,将细胞分为SKOV3组(未转染的SKOV3细胞系)、沉默阴性对照组(SKOV3+NCsiRNA组:转染pMAGic 4.0 NC siRNA质粒的SKOV3细胞系)和沉默TIM-3组(SKOV3+TIM-3 siRNA组:转染pMAGic 4.0 TIM-3 siRNA质粒的SKOV3细胞系);采用pcDNA3.1质粒转染构建TIM-3过表达卵巢癌SKOV3细胞系,将细胞分为SKOV3组、过表达阴性对照组(pcDNA NC组:转染pcDNA3.1质粒的SKOV3细胞系)和过表达TIM-3组(pcDNA TIM-3组:转染pcDNA3.1 TIM-3质粒的SKOV3细胞系)。MTT法检测细胞增殖能力,Annexin V-FITC/PI染色检测细胞凋亡能力,划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,TOPflash/FOPflash双荧光素酶报告基因实验检测Wnt/β-catenin通路活性,qPCR检测Wnt/β-catenin信号通路中转录因子TCF-7、TCFL-2及靶基因CD44的mRNA水平,Westernblot检测SKOV3细胞中MMP-9,CD44、Wnt1、β-catenin及E-cad蛋白表达。结果TIM-3在正常卵巢组织中呈阴性表达,在EOC组织中呈阳性表达,EOC组织中TIM-3阳性表达率(84.14%)显著高于正常卵巢组织(16.67%,P<0.05)。TIM-3表达与FIGO分期、组织分化程度及淋巴结是否转移有关(P<0.05),与年龄、病理类型无关(P>0.05)。且TIM-3与Wnt1水平呈正相关(P<0.05)。沉默TIM-3基因后,Wnt/β-catenin通路活性受到抑制,SKOV3细胞增殖、迁移和侵袭能力显著降低(P<0.05),凋亡能力显著升高(P<0.05),转录因子TCF-7、TCFL-2及靶基因CD44的mRNA水平显著下调,细胞MMP-9,CD44、Wnt1、β-catenin蛋白水平均显著下调,EMT相关蛋白E-cad水平显著上调(P<0.05)。过表达TIM-3基因后,Wnt/β-catenin通路活性被激活,SKOV3细胞增殖、迁移和侵袭能力显著升高(P<0.05),凋亡能力显著降低(P<0.05),转录因子TCF-7、TCFL-2及靶基因CD44的mRNA水平显著上调,细胞MMP-9,CD44、Wnt1、β-catenin蛋白水平均显著上调,EMT相关蛋白E-cad水平显著下调(P<0.05)。结论TIM-3在EOC组织中高表达,可促进卵巢癌细胞的恶性生物学行为,其机制可能与Wnt/β-catenin信号通路的激活有关。

人TIM-1和TIM-3 mRNA实时SYBR Green Ⅰ定量RT-PCR检测方法的建立

目的建立实时SYBR Green I定量RT-PCR检测人TIM-1和TIM-3mRNA的方法。方法从人外周血单个核细胞提取的总RNA中逆转录扩增人TIM-1和TIM-3的cDNA,将将纯化的人TIM-1和TIM-3的扩增产物分别与pMD18-T Simple载体进行连接,转化宿主菌DH5α,提取重组质粒DNA,PCR鉴定并测序分析。纯化质粒并检测260nm吸光值,确定重组质粒原液的拷贝浓度并以此制备荧光定量PCR梯度浓度标准品,进行实时荧光定量PCR实验。结果建立了TIM-1和TIM-3基因基因mRNA表达实时荧光定量PCR检测方法,检测灵敏度达103拷贝,线性范围为103-107拷贝。阈值循环数(Ct)与PCR体系中起始模板量的对数值之间有着良好的线性关系,线性相关系数分别为1.00和1.00,扩增效率分别为1.070和1.023,批内及批间变异系数<5%。熔解曲线分析表明,产物为特异的单峰。结论我们成功建立检测人TIM-1和TIM-3的实时荧光定量PCR方法,为进一步研究人TIM-1和TIM-3功能奠定基础。

梨小食心虫生物钟基因Gmper和Gmtim的鉴定及其对羽化节律的影响

【目的】本研究旨在探究梨小食心虫Grapholita molesta生物钟基因Gmper和Gmtim的分子特性与表达模式,分析其对羽化节律的调控作用,为梨小食心虫的防控提供潜在新靶标。【方法】根据梨小食心虫转录组数据,采用PCR技术克隆生物钟基因Gmper和Gmtim的cDNA全长;利用RT-qPCR测定这两个基因在梨小食心虫成虫头、胸、腹和足中的表达量,及其在蛹头部中的日表达模式;应用siRNA进行RNAi技术分析Gmper和Gmtim在梨小食心虫羽化节律中的作用。【结果】克隆获得梨小食心虫Gmper基因(GenBank登录号:MN862636)和Gmtim基因(GenBank登录号:MN862637)全长cDNA。Gmper基因开放阅读框长2862 bp,编码953个氨基酸,序列中含2个PAS结构域和1个PAC结构域;Gmtim开放阅读框长3048 bp,编码1015个氨基酸。Gmper和Gmtim在雌雄成虫头部中的表达水平均高于其他组织中的;蛹期头部两基因在暗期的表达水平显著高于光期的。RNAi下调这两个基因的表达均导致梨小食心虫羽化时间更加分散以及羽化高峰期的羽化成虫数量显著降低。【结论】梨小食心虫生物钟基因Gmper和Gmtim具有组织和昼夜表达差异性,两基因对梨小食心虫羽化节律的调控有重要作用。研究结果为开发基于发育行为节律调控的梨小食心虫监测和防控方法提供了新线索。

山东汉族TIM-1基因多态性与2型糖尿病肾脏病的相关性

目的探讨T细胞免疫球蛋白域和黏蛋白域蛋白-1(TIM-1)基因多态性与山东汉族2型糖尿病肾病的相关性。方法采用病例-对照的方法,收集2型糖尿病肾病患者112例,正常对照组201例。采用改良的聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)检测TIM-1基因的两个SNP位点:rs1039438和rs6878732,计算其基因型频率及等位基因频率并统计分析。结果 rs1039438位点的基因型频率与等位基因频率在对照组和2型糖尿病肾病组中有显著的统计学差异(P值分别为0.005和0.002),rs6878732位点的基因型频率与等位基因频率在两组间无统计学差异。结论 TIM-1基因与山东汉族人群2型糖尿病肾病的发病有明显相关性,rs1039438位点的G等位基因可以增加2型糖尿病肾病发病风险,而此位点的A等位基因则为保护因素。

实验感染C57 BL/6N小鼠粪内蓝氏贾第鞭毛虫tim基因检测

建立蓝氏贾第鞭毛虫感染动物模型 ,用PCR技术对感染动物粪内该虫tim基因进行检测 ,探讨蓝氏贾第鞭毛虫基因检测方法。用人源蓝氏贾第鞭毛虫河北株 (CD)和江苏株 (XZ)的包囊分别接种两组C5 7BL 6N小鼠 ,于接种后第 6天、1 0天和 1 4天收集粪便标本 ,采用酚 氯仿法提取总DNA。将提取液分别按 1 0 0 、 1 0 - 1 、 1 0 - 2 和 1 0 - 3稀释并纯化。根据该虫磷酸丙糖异构酶 (Triosephosphateisomerase,tim)基因合成 1对特异性引物 ,采用PCR技术分别扩增各个稀释度的样本。结果贾第虫阳性样本均被扩增出相应基因的 1条 683bp长的片段 ,纯化后的各个稀释度样本的PCR检测阳性率随稀释倍数的增加而增高。本研究结果为贾第虫感染基因检测方法的进一步研究提供了实验资料。