TIM基因家族在疾病中作用的研究进展

1 TIM基因家族概述TIM基因家族在免疫调节和免疫相关性疾病中的作用机制越来越受到研究者的关注。鼠类Tim家族由8个成员组成（Tim1~8）,位于鼠类染色体11B1.1上;而人类TIM基因家族由3个成员组成（TIM-1、TIM-3和TIM-4）,位于人类染色体5q33.2上,这一染色体区域已经多次表明与哮喘、过敏和自身免疫性疾病等连锁[1-3]。TIM蛋白是一类具有共同基序的跨膜糖蛋白。

用PCR扩增tim基因检测蓝氏贾第鞭毛虫

采用聚合酶链反应 (PCR)对蓝氏贾第鞭毛虫 (Giardialamblia)的磷酸丙糖异构酶 (triosephosphateisomerase ,缩写为tim)基因进行特异性扩增 ,结果扩增出 1条 6 83bp的DNA片段。此方法的特异性可高达10 0 % ,而其它DNA样本 ,如日本血吸虫 (Schistosomajaponicum)、刚地弓形虫 (Toxoplasmagondii)、微小隐孢子虫 (Cryptosporidiumparvum)、溶组织内阿米巴 (Entamoebahistolytica)、旋毛虫 (Trichinellaspiralis)和阴道毛滴虫 (Trichomonasvaginalis) ,以及人体血细胞等均未出现扩增反应。本法的敏感性也很高 ,可检测到0 4pg贾第虫包囊的DNA。 13株来自不同地理位置和 或宿主的贾第虫DNA样本在PCR中均各产生 1条长为 6 83bp的目的片段。

蓝氏贾第虫分离株tim基因序列分析比较研究

为了探讨来源于不同地理位置贾第虫分离株之间的遗传学关系，采用 ｔｉｍ 基因扩增、限制性酶切和 Ｄ Ｎ Ａ 序列分析方法对来自我国（ Ｃ１、 Ｃ２、、 Ｃ Ｈ２、 Ｃ Ｈ３）、柬埔寨（ Ｃ Ａ Ｍ ）、澳大利亚（ Ａ１、 Ａ２）和美国（ Ｂ Ｐ、 Ｃ Ｄ Ｃ）共９ 株蓝氏贾第虫的基因型进行了分析比较。结果表明， Ａ１、 Ａ２ 和 Ｃ Ａ Ｍ 属第１ 型（ Ｗ Ｂ）； Ｃ Ｈ２ 和 Ｃ Ｈ３ 属第２ 型（ Ｊ Ｈ）； Ｃ１、 Ｃ２、 Ｂ Ｐ和 Ｃ Ｄ Ｃ属第３ 型（ Ｇ Ｓ）。本实验结果提示，虫株间遗传学关系并非由地理位置的远近所决定。来源于同一地理位置的虫株其遗传学特性可有很大的差异。相反，来源于地理位置相隔很远的虫株其遗传学特性却可极为相近。贾第虫分离株基因型的确定可为本虫分子系统进化和分子流行病学研究提供重要资料。

TIM基因家族主要成员在调节T细胞依赖的免疫应答中的作用

T细胞免疫球蛋白与黏蛋白域蛋白(TIM)基因是近年来研究者们极为关注的基因之一。研究表明,TIM家族成员通过对辅助性T细胞的作用,可对T细胞依赖的免疫应答的发生、发展发挥重要的调控作用。该文拟就有关内容作一综述。

水仙芽可溶性糖含量及NtTIM基因的表达分析

以3年生水仙(Narcissus tazetta var.chinensis)鳞茎主芽为材料,采用蒽酮-硫酸法测定可溶性糖含量;采用PCR法从主芽中分离克隆NtTIM基因并对其序列进行生物信息学分析;采用qRT-PCR方法分析主芽不同生长发育时期和温度诱导下的表达变化。可溶性糖含量测定结果表明,水仙鳞茎膨大期,主芽可溶性糖含量逐渐降低;休眠期先升高后降低;花芽分化期其含量在均衡的水平(4%左右)。生物信息学分析表明:分离克隆到了1个NtTIM基因,该基因含有765 bp开放阅读框,编码254个氨基酸,属于TIM-phosphatebinding基因家族,推导的氨基酸序列与油菜、芜菁、拟南芥、甘蓝等植物具有85%以上的同源性;编码的蛋白为稳定的呈酸性的疏水蛋白,无信号肽位点但含有1个跨膜结构域、2个N-糖基化位点。qRT-PCR分析表明,水仙生长发育过程中鳞茎膨大期主芽NtTIM基因表达量略升高;休眠期表达量呈阶段性降低;花芽分化期表达量略升高;20℃、25℃、30℃、35℃温度处理时,主芽NtTIM基因表达量随着温度升高而降低,且处理时间越长,其表达量越低。推测NtTIM基因参与调控水仙鳞茎主芽休眠。为进一步研究NtTIM基因的分子功能,以及深入研究水仙夏休眠的分子机制提供帮助。

Tim基因家族及其与自身免疫性疾病和过敏性疾病的关系

T细胞免疫球蛋白及粘蛋白域蛋白(Tim)基因家族有调节Th1和Th2细胞介导的免疫应答的作用。Tim1有共刺激T细胞增殖,促进细胞因子分泌的作用;Tim2主要表达于Th2细胞上;Tim3蛋白特异性表达于Th1细胞表面并且有抑制Th1细胞免疫功能的作用;Tim4是Tim1的天然配体。在哮喘和多发性硬化症的小鼠模型中,影响Tim分子的功能就会改变疾病的表型。因此,理解Tim分子如何调节Th1和Th2细胞效应功能的机制对免疫相关疾病的治疗和调变有重大意义。

Tim基因家族在免疫调节中的作用

近年来研究发现，Tim基因家族在人体免疫应答中发挥着重要的作用。Tim基因可以调节Th1／Th2免疫状态的平衡及相关免疫细胞功能，阻断或激活Tim基因的功能有助于机体免疫功能的调节。此文对Tim基因家族在免疫调节中的作用进行综述。

Tim基因家族的研究进展及其与变态反应性疾病的关系

Tim基因家族是近来发现的新的基因家族,它们与T细胞免疫应答及Th1和Th2细胞的分化有关。在哮喘的发生和发展中的作用已得到普遍认同,关于它们在异位性皮炎、湿疹和过敏性鼻炎等变态反应性疾病中的作用也已有初步的研究。

TIM2转基因细胞瘤苗对小鼠作用的初步研究

目的观察小鼠TIM2转基因H22肝癌细胞瘤苗在小鼠体内的成瘤作用,初步研究其免疫原性。方法构建TIM2基因真核表达载体pIRES2-EGFP-TIM2,脂质体法转染H22细胞,制备得到TIM2基因修饰的H22细胞瘤苗,建立小鼠肝癌移植瘤模型,观察其在小鼠体内的成瘤作用。结果成功得到TIM2基因修饰的H22细胞瘤苗,免疫接种小鼠后,可明显抑制小鼠体内肿瘤的发生和发展;给予H22-TIM2接种的小鼠CD4亚群、CD4/CD8比值显著高于H22-EGFP细胞接种组、荷瘤对照组和正常对照组。结论TIM2基因修饰H22细胞后,可显著降低H22细胞的体内成瘤性,抑制小鼠肿瘤生长,同时。在体内具有一定的免疫原性,为进一步探讨TIM2在肿瘤生物治疗中的作用提供了初步的实验依据。

TIM2基因修饰的H22细胞体内成瘤作用的研究

目的观察小鼠TIM2基因修饰的H22肝癌细胞在小鼠体内的成瘤作用,初步研究TIM2基因在肿瘤生物治疗中的作用。方法构建TIM2基因的真核表达载体pIRES2-EGFP-TIM2,脂质体法转染H22细胞,体外筛选得到稳定表达TIM2基因的阳性单克隆H22细胞株,用以建立小鼠肝癌移植瘤模型,同时以转染了pIRES2-EGFP空载体的H22-EGFP细胞和H22细胞做为对照,观察不同处理的H22细胞对小鼠的成瘤情况。结果重组真核表达载体pIRES2-EGFP-TIM2转染H22细胞后,经体外筛选和鉴定,得到稳定表达EGFP和TIM2基因的阳性单克隆细胞株H22-TIM2,免疫接种小鼠后可明显抑制小鼠肿瘤的发生和发展,小鼠肿瘤组织块的体积明显小于接种H22-EGFP细胞和H22细胞组。此外,接种H22-TIM2细胞组小鼠的生长情况也明显好于其他各组。结论TIM2基因转染H22细胞后可显著降低小鼠H22肝癌细胞的成瘤性,抑制小鼠体内肿瘤的生长。本研究为进一步探讨TIM2在肿瘤生物治疗中的作用提供了初步的实验依据。

人外周血TIM3基因敲除T淋巴细胞的制备及其抗肿瘤作用

目的:通过CRISPR-Cas9基因编辑技术及质粒电转染技术制备T细胞免疫球蛋白黏液素3(TIM3)基因敲除的人外周血T淋巴细胞,探讨敲除TIM3基因后能否增强T细胞免疫功能及其抗肿瘤作用。方法:通过电转染法将hTIM3 sgRNA/Cas9双质粒共转染EBV阳性胃癌患者外周血T淋巴细胞,电转24 h后流式细胞术检测转染效率并利用荧光显微镜观察;体外培养过程中观察基因敲除后T细胞增殖活性,流式细胞术验证TIM3基因敲除效率以及细胞表型的变化。用肿瘤抗原肽活化T细胞检测TIM3基因敲除后T细胞分泌细胞因子水平及体外杀伤胃癌AGS-EBV细胞的能力。结果:电转染法能够有效地将hTIM3 sgRNA/Cas9双质粒敲除体系转入人外周血T淋巴细胞,其转染效率平均达(41.5±3.6)%,基因敲除效率波动在40.0%～50.0%(均P<0.01);经抗原活化后的基因敲除组T细胞的增殖活性和免疫表型未见明显变化,表面活化分子中仅见HLA-DR较对照组明显提高(P<0.05);TIM3基因敲除T细胞分泌TNF-α、IFN-γ的水平显著增高(P<0.01或P<0.05),体外杀伤胃癌AGS-EBV细胞的能力也明显增强(均P<0.05)。结论:用CRISPR-Cas9基因编辑及质粒电转染技术制备人外周血TIM3基因敲除T淋巴细胞的方法简易可行,在体外的扩增活化中保持TIM3基因水平下调并具有更高的免疫应答水平以及更强的抗肿瘤作用。这一新技术的研发为基因工程化细胞免疫治疗提供了新的思路。

蓝氏贾第鞭毛虫河北株的分离及其基因型研究

目的 探讨河北承德地区蓝氏贾第鞭毛虫包囊大小与基因型的关系。 方法 对河北承德地区进行贾第虫流行病学调查 ,分离出 3株贾第虫 (CH2、CH3、CH4)。用 PCR技术对此 3虫株 DNA进行 tim基因扩增和序列测定 ,并与Gen Bank登记虫株比较和用 DNAstar软件处理。 结果 此 3株贾第虫株的基因型属 2型 (JH型 )。 结论 该地区贾第虫包囊形态之大小 。

Tim家族的研究进展及与哮喘的关系

T细胞免疫球蛋白域粘蛋白域蛋白(Tim)基因是新近发现的一类基因家族,研究表明Tim家族与T细胞免疫反应及Th1和Th2细胞分化有关,可能对哮喘和自身免疫病的发生与发展起重要作用,本文拟就有关内容作一综述。

蓝氏贾第虫河北株的分离及其基因型研究

目的探明河北承德贾第虫包囊大小与遗传特性的关系。方法以包囊形式分离3株贾第虫(CH2、CH3、CH4)。用PCR技术对虫株DNA进行tim基因扩增和序列测定。最后与GenBank登记的虫株比较,并用DNAstar软件处理。结果此3株贾第虫株的基因型属2型(JH型)。结论该地区贾第虫包囊形态大小与基因并无直接关系。

蓝氏贾第鞭毛虫承德株分子生物学研究

目的 :探讨蓝氏贾第鞭毛虫大、小型包囊存在的原因。方法 :用分子生物学技术对 3株贾第虫 (CH2、CH3、CH4)进行 tim基因扩增和序列测定。结果 :经与 Gen Bank登记虫株比较和用 DNAstar软件处理的结果表明 ,此 3株贾第虫的基因型属 2型 (JH型 )。结论 :大、小型包囊在形态学上经过统计学处理显示有显著差异 ,但与基因型无关。

甲型肝炎病毒与过敏性哮喘的互作关系

为研究哮喘的易感基因,科学家们发现了一个新的基因家族--Tim基因家族,而生物信息学研究发现人Tin1就是人甲型肝炎病毒细胞受体（huHAVcr-1）,另外,流行病学调查结果显示甲型肝炎病毒（HAV）感染下降与哮喘发病上升这一反转现象.此文就HAV感染对哮喘的影响,以及HAV-Tim1途径对T细胞分化的作用等方面研究进展进行综述.

T细胞免疫球蛋白及黏蛋白域蛋白-3基础研究及其与风湿性疾病的关系

近年来，作为T细胞免疫球蛋白及黏蛋白域蛋白（Tcell immunoglobulin domain and mucin domain,TIM）冢族中的一员，TIM-3以其特殊的基因位点及免疫系统中的多重作用日益受到关注。小鼠TIM基因位于染色体11B1.1,与多个免疫疾病基因区域相联，包括哮喘、过敏和其他自身免疫性疾病等。小鼠TIM基因家族南8个成员组成：

DNA sequence analysis of the triose phosphate isomerase gene from isolates of Giardia lamblia

Objective To confirm the genetic relation between Giardia lamblia (G. lamblia) isolates from different geographic regions of China and other countries.Methods Genomic DNA were extracted from the trophozoites or cysts of Giardia lamblia. The triose phosphate isomerase (tim) gene was amplified using polymerase chain reaction (PCR) technique. PCR products were digested with endonuclease and sequenced. The data of sequencing were analyzed with the DNAstar software and compared with that of the isolates acquired from GenBank.Results Of nine isolates of Giardia lamblia from China (C1, C2, CH2 and CH3), Cambodia (CAM), Australia (A1 and A2) and America (BP and CDC), respectively, 3 (A1, A2 and CAM) fit into Group 1 (WB), 2 (CH2 and CH3)) into Group 2, and 4 (C1, C2, BP and CDC) into Group 3 (GS). The results confirmed the genetic relatedness of G. lamblia isolates from all over the world.Conclusion Genotyping isolates of G. Lamblia provides important information for establishing the phylogenetic relationship or for the epidemiological evaluation of the spreading of this organism.