Tim-1基因4个SNP位点及其单倍型与宁夏地区回族人群类风湿性关节炎的关联性分析

目的:探讨Tim-1基因4个SNP位点及单倍型与宁夏地区回族人群类风湿性关节炎(RA)的关联性,旨在为RA的早期预防提供理论依据。方法:采用序列特异性引物聚合酶链式反应(SSP-PCR)及限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)2种方法对108例RA患者及104例健康个体Tim-1基因-1637A>G、-1454G>A、-416G>C和-232A>G共4个SNP位点进行检测,对各基因位点基因型频数、等位基因频数及单倍型分布情况进行比较和分析。结果:健康对照组与RA患者组-1637、-232位点基因型频数分布差异有统计学意义,在RA患者中-1637位点等位基因A的频数高于等位基因G(P<0.01)。4个位点共检出15种单倍型,单倍型AGCA(OR值9.611,95% CI 3.13～29.52)、AGCG(OR值4.361,95% CI 2.12～8.96)在宁夏回族RA患者组中的频数高于健康人群(P<0.01);而单倍型GGCA(OR值0.374,95% CI 0.22～0.64)、GGCG(OR值0.199,95% CI 0.08～0.49)及GAGA(OR值0.023,95%CI 0.002～0.26)在宁夏回族人群RA患者组中的频数低于健康对照组(P<0.01)。结论:-1637位点A>G的突变与宁夏回族人群RA发生有关,等位基因A的存在可增加RA发病风险,而等位基因G对RA的发生具有保护作用;AGCA、AGCG这2种单倍型可增加宁夏回族人群RA发生的风险,而单倍型GGCA、GGCG、GAGA对宁夏回族人群RA的发生具有保护作用。

人源Tim-1基因过表达载体的构建与鉴定

目的构建可在真核细胞中高效表达人Tim-1的真核表达质粒,并在人胚胎肾细胞293(HEK293)细胞株中鉴定其过表达效率,以便后续用于Tim-1免疫治疗的研究。方法获取健康人外周血,设计并合成人Tim-1基因引物,用Taq聚合酶扩增Tim-1基因,用Eco RI和Bam HI限制性内切酶切下人Tim-1基因,连接到Eco RI和Bam HI酶切的p LVX-IRES-Zs Green1载体中,构建Tim-1-p LVX-IRES-Zs Green1真核质粒。脂质体方法转染至HEK293细胞,q-PCR、免疫印迹法以及流式细胞仪法检测人Tim-1过表达效率。结果 Tim-1-p LVX-IRES-Zs Green1质粒通过脂质体转染至HEK293细胞后,q-PCR、免疫印迹及流式细胞仪法显示人Tim-1在HEK293细胞株中m RNA和蛋白以及绿色荧光蛋白都过度表达。结论成功构建了可在真核细胞中高效表达Tim-1基因的Tim-1-p LVXIRES-Zs Green1真核表达质粒,为进一步研究Tim-1的免疫功能治疗奠定了实验基础。