Tim-3信号通路调控巨噬细胞极化在鲍曼不动杆菌性肺炎免疫致病和免疫防治中的作用

目的探讨T细胞免疫球蛋白及粘蛋白-3(T-cell Ig-mucin-3,Tim-3)信号通路调控巨噬细胞极化在鲍曼不动杆菌性肺炎免疫致病和免疫防治中的作用。方法选取正常小鼠,定为正常组20只,将小鼠感染为鲍曼不动杆菌毒性临床菌株和疫苗菌株,检查生存率,细菌定量,组织病理等,用Real-time PCR检测细胞因子,用流式检测BALF炎症细胞浸润,分别建立小鼠鲍曼不动杆菌肺炎模型组20只和鲍曼不动杆菌疫苗接种模型组20只。通过ELISA法、Western blot技术检测Tim-3信号通路抑制巨噬细胞极化方向的影响。结果与正常组相比,临床株组IL-1β、TNF-α、IL-6、TGF-β显著升高(P<0.05),与临床株组相比疫苗组IL-1β、TNF-α、IL-6、TGF-β显著降低(P<0.05),差异有统计学意义。正常组肺组织结构正常,无明显病变;临床株组肺组织肺泡结构受损严重,可见血管充血、炎性细胞浸润等现象;与临床株组相比,疫苗组肺组织结构损坏得到缓解。临床株组与正常组比较鲍曼不动杆菌性肺炎性老鼠肺组织巨噬细胞的MI标记基因TNF-a的表达有所减少,但CD32的表达有所增加。M2标记基因CD206和IL-10的表达增加(p)(P<0.05);Tim-3通路抑制巨噬细胞后CD32、TNF-α基因的相对表达量升高,CD206表达升高,IL-10表达降低(P<0.05)。结论Tim-3信号通路调控巨噬细胞极化方向,在鲍曼不动杆菌性肺炎致病中起到免疫防治作用。

鼻咽癌组织中Tim-3和Galectin-9蛋白表达及其对临床疗效和预后的影响

目的:探讨鼻咽癌组织中Tim-3和Galectin-9蛋白表达及其对临床疗效和预后的影响。方法:收集2016年10月至2019年10月本院收治的60例鼻咽癌患者,所有患者接受调强放射治疗方案。采用免疫组化SP法检测60例鼻咽癌患者癌组织及癌旁组织中Tim-3和Galectin-9蛋白的表达情况,分析蛋白表达与临床特征、放疗疗效及预后的关系。结果:鼻咽癌组织中Tim-3和Galectin-9蛋白阳性表达率均明显高于癌旁组织(58.33%vs 31.67%,71.67%vs 33.33%,均P<0.05);肿瘤组织中Tim-3和Galectin-9的表达与临床分期、是否远处转移相关(P<0.05),与患者性别、肿瘤大小、年龄和血清EB病毒无明显关联(P>0.05);Tim-3和Galectin-9蛋白阳性患者放疗敏感性均显著高于Tim-3和Galectin-9阴性患者(均P<0.05);Tim-3和Galectin-9蛋白阳性表达率与鼻咽癌复发率呈正相关关系(r=0.345,r=0.287,均P<0.05)。结论:Tim-3蛋白和Galectin-9蛋白在鼻咽癌中的侵袭与转移中发挥着重要作用,Tim-3蛋白和Galectin-9蛋白高表达患者预后较差,Tim-3和Galectin-9蛋白组阳性患者放射抗性较低,联合检测Tim-3蛋白和Galectin-9蛋白对鼻咽癌的治疗及预后有一定的指导意义。

Tim-3及其配体Galectin-9在多发性骨髓瘤患者Th1/Th2细胞失衡中的意义

目的:探讨Tim-3及Galectin-9在多发性骨髓瘤患者Th1/Th2细胞失衡中的意义。方法:纳入初诊MM患者55例,健康对照20例,流式细胞术检测外周血CD4^(+)T细胞上Tim-3的表达水平、Th1和Th2细胞水平、Tim-3^(+)Th1和Tim-3^(+)Th2细胞水平,ELISA法检测血清中IFN-γ和IL-4的水平,PCR检测Galectin-9mRNA的水平,并分析Galectin-9mRNA表达与Th细胞亚群和细胞因子水平的相关性,以及Tim-3^(+)Th1/Tim-3^(+)Th2与相应临床特征的关系。结果:MM患者Tim-3^(+)CD4^(+)T细胞、Tim-3^(+)Th1、Tim-3^(+)Th2细胞水平及Tim-3^(+)Th1/Tim-3^(+)Th2细胞比值较健康对照组明显升高(P<0.05),Th1细胞水平及Th1/Th2细胞比值明显下降(P<0.05)。MM患者血清中IFN-γ及IFN-γ/IL-4比值明显下降(P<0.05),IL-4水平明显升高(P>0.05),Galectin-9mRNA的水平明显高于健康对照组(P<0.05)。Galectin-9mRNA与Tim-3^(+)CD4^(+)T细胞、Tim-3^(+)Th2细胞、IL-4均呈正相关(r=0.663,r=0.492,r=0.470),与IFN-γ呈负相关(r=-0.593)。进一步分析显示,患者Tim-3^(+)Th1/Tim-3^(+)Th2细胞比值与临床ISS分期、有溶骨性损害、染色体核型异常呈正相关(r=0.511,r=0.556,r=0.632)。结论:Tim-3及Galectin-9参与了MM患者Th1/Th2失衡,并且Tim-3^(+)Th1/Tim-3^(+)Th2细胞比值高与临床预后较差的指标有关。

Galectin-9/Tim-3信号通路在HBV感染中对机体固有免疫及适应性免疫调控的研究进展

乙型肝炎病毒(HBV)感染过程中,机体固有免疫及适应性免疫功能损伤与HBV感染的慢性化密切相关,特别是T细胞功能的耗竭。T细胞免疫球蛋白黏蛋白3(Tim-3)及其配体半乳糖苷结合蛋白9(Gal-9)在包括HBV在内的多种病毒感染所致的机体免疫功能紊乱过程中发挥着重要作用,是参与机体固有免疫及适应性免疫应答调控的重要信号通路,也是诱导T细胞耗竭的重要负调控分子之一。本文扼要就Galectin-9/Tim-3信号通路在HBV感染过程中对机体免疫功能调控的相关研究进展作综述。

亲缘HLA单倍体相合外周血造血干细胞移植后Tim-3/Galectin-9通路变化特点及临床意义

目的探究Tim-3/Galectin-9负性信号通路在亲缘HLA单倍体相合外周血造血干细胞移植中的变化特点及其临床意义。方法以行单倍体造血干细胞移植的36例患者和20例健康者为研究对象,通过FCM监测患者及健康对照组外周血中CD4^(+)T细胞和Tim-3分子的表达情况,ELISA法检测移植后患者细胞因子Galectin-9、IFN-γ、IL-4、TGF-β和IL-17的动态变化。结果根据西雅图国际诊断标准,移植术后有14例患者发生aGVHD,22例患者未发生aGVHD。①未发生aGVHD患者移植后30~90 d CD4^(+)T细胞百分比均低于健康对照组(P<0.05);未发生aGVHD患者移植后血清中细胞因子Galectin-9、TGF-β、IFN-γ、IL-4和IL-17水平呈现逐渐增高的趋势,Galectin-9和TGF-β水平在移植后60 d达到正常值(P>0.05),IFN-γ、IL-4和IL-17在移植后第90天恢复到正常水平(P>0.05)。Spearman相关分析结果显示Galectin-9与TGF-β变化水平呈正相关(r=0.651,P=0.001);②发生aGVHD患者外周血中Tim-3^(+)CD4^(+)T细胞的百分比和IFN-γ、IL-17水平明显高于不发生aGVHD患者(P<0.01);不发生aGVHD患者的Galectin-9和TGF-β水平更高(P<0.05)。Spearman相关分析结果显示Tim-3^(+)CD4^(+)T细胞的百分比与IFN-γ水平呈正相关(r=0.631,P=0.015)。结论单倍体相合外周血造血干细胞移植后细胞因子Galectin-9和TGF-β的早期快速重建可以避免或减缓aGVHD的发生,移植后动态监测Tim-3^(+)CD4^(+)T细胞持续较多而血清中Galectin-9水平下降可能预示着aGVHD的发生。

Tim-3与Galectin-9在鼻咽癌中的表达及其相关性

研究T免疫球蛋白及黏蛋白分子3(T-cell immunoglobulin domain andmucin domainprotein-3,Tim-3)及半乳糖苷结合蛋白9(β-galactoside-binding protein,Galectin-9)在鼻咽癌发生、发展中的作用。方法 采用免疫组织化学法对我院的50例鼻咽癌组织和29例正常鼻咽部组织进行了表达情况的检测。通过分析发现,鼻咽癌组织与正常鼻咽部组织中的Tim-3和Galectin-9的表达存在明显差异。同时,我们还研究了二者的表达与鼻咽癌临床病理特征之间的关系,以及它们之间的相关性。这一研究将有助于深入了解鼻咽癌的发展机制,并为治疗和预防提供新的思路。结果 (1)研究发现,Tim-3在鼻咽癌中的表达水平高于正常鼻咽组织,并且这种差异具有统计学意义(P值为0.017)。这一发现有望为鼻咽癌的诊断和治疗提供新的线索。(2)研究还发现,Galectin-9在鼻咽癌中的表达水平显著高于正常鼻咽组织,并且这种差异具有统计学意义(P值为0.001)。这一发现可能有助于深入理解鼻咽癌的发生机制,并提供新的治疗靶点。(3)此外,研究结果还显示,在鼻咽癌中,Tim-3和Galectin-9的表达水平与浸润和转移呈正相关。这提示着Tim-3和Galectin-9可能参与了鼻咽癌的肿瘤浸润和转移过程。(4)Tim-3和Galectin-9的表达在相对早期的鼻咽癌病例中呈正相关。结论 Tim-3和Galectin-9在鼻咽癌发生中起促进作用,并可能存在协同作用;Tim3及Galectin-9的表达与鼻咽癌浸润、转移相关。

肠愈宁对溃疡性结肠炎大鼠PI3K/AKT信号通路作用机制的研究

目的探讨肠愈宁方对2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)诱导的溃疡性结肠炎(UC)大鼠结肠组织磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路中PTEN、TLR2、Caspase-3、Caspase-9蛋白的作用机制。方法将70只SPF级大鼠适应性喂养7天后分为空白组10只和造模组60只,造模组大鼠采用TNBS/乙醇溶液灌肠诱导UC模型。将成功建立模型的大鼠随机分为模型组,美沙拉嗪组,肠愈宁高、中、低剂量组、肠愈宁高、中、低剂量组分别灌服相当于生药量为4 g·mL^(-1)、2 g·mL^(-1)、1 g·mL^(-1)的肠愈宁方溶液10 mL·kg^(-1),美沙拉嗪组灌服相当于生药量为0.2 g·kg^(-1)美沙拉嗪悬浊液10 mL·kg^(-1),空白对照组、模型组给予等量10 mL·kg^(-1)生理盐水灌胃。各组大鼠灌胃均每天1次,连续14天。末次给药后处死大鼠取材。评估疾病活动指数,HE染色观察结肠变化,进行结肠组织损伤指数评分,蛋白免疫印迹法检测结肠组织PI3K、AKT、PTEN、TLR2、Caspase-3、Caspase-9蛋白的表达。结果与空白组比较,模型组PI3K、AKT、Caspase-3、Caspase-9及TLR2蛋白表达水平增高(P<0.05),PTEN蛋白表达水平降低(P<0.05)。与模型组比较,肠愈宁高剂量组PI3K、AKT、Caspase-3、Caspase-9、TLR2蛋白表达水平均明显下降(P<0.05),PTEN蛋白表达水平显著升高(P<0.05);美沙拉嗪组、肠愈宁中剂量PI3K、AKT、Caspase-3水平均降低(P<0.05),PTEN蛋白表达水平升高(P<0.05),在Caspase-9中表达无统计学意义;肠愈宁低剂量组在各蛋白表达情况与模型组无统计学意义。结论肠愈宁方治疗UC作用显著,其机制可能与调控PI3K/AKT信号通路及其相关蛋白PTEN、TLR2、Caspase-3、Caspase-9有关,能够有效缓解UC大鼠症状,减轻结肠病理损伤。

Tim-3/Gal-9信号通路参与妊娠的研究进展

成功的妊娠依赖于母体对胎儿的免疫耐受。近年来研究证实：Tim-3/Gal-9信号通路通过抑制Th1细胞的活性、Th17细胞的分化和功能以及促进Th2细胞的功能,调节T细胞亚群平衡和诱导外周免疫耐受。Tim-3/Gal-9信号通路在母胎界面和妊娠中的功能已经在人和动物模型中有较多报道。本文将从Tim-3/Gal-9信号通路调节T细胞平衡这一生物学功能着手,阐明其在母胎免疫耐受的诱导和维持，

6-姜酚通过Akt/GSK3-β信号通路改善心肌缺血再灌注损伤的研究

目的通过Akt/GSK3-β信号通路研究6-姜酚对心肌缺血再灌注损伤(I/R)的影响。方法(1)选取相同月龄的健康雄性Wistar大鼠32只,依据随机数字表法将大鼠分为对照组1、I/R1组、I/R+2 mg/kg组及I/R+4 mg/kg组各8只,对I/R1组、I/R+2 mg/kg组及I/R+4 mg/kg组制备I/R模型,分别给予I/R+2 mg/kg组及I/R+4 mg/kg组2 mg/kg及4 mg/kg的6-姜酚溶液2 mL灌胃,对照组1及I/R1组大鼠灌注等量蒸馏水。比较各组干预后心肌细胞凋亡水平、半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、血清乳酸脱氢酶(LDH)、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、核因子κB(NF-κB)、Akt、p-Akt、GSK3-β及p-GSK3-β表达水平。(2)H9C2心肌细胞分为对照组2、I/R2组、I/R2+50 mmol/L组、I/R2+100 mmol/L组,每组3份。对I/R2组、I/R2+50 mmol/L组、I/R2+100 mmol/L组H9C2心肌细胞建立I/R模型,分别将对照组2、I/R2组、I/R2+50 mmol/L组及I/R2+100 mmol/L组H9C2心肌细胞置于含有0 mmol/L、0 mmol/L、50 mmol/L和100 mmol/L的6-姜酚DMEM培养基中,比较H9C2心肌细胞干预后的凋亡水平、Caspase-3、LDH、Akt、p-Akt、GSK3-β、p-GSK3-β的表达水平。结果(1)I/R+4 mg/kg组的细胞凋亡面积及Caspase-3、LDH、IL-6、TNF-α及NF-κB水平均低于I/R1组(P<0.05),且I/R+4 mg/kg组的细胞凋亡面积及Caspase-3及IL-6水平低于I/R+2 mg/kg组(P<0.05);I/R+4 mg/kg组的p-Akt/Akt及p-GSK3-β/GSK3-β均高于I/R1组及I/R+2 mg/kg组(P<0.05)。(2)I/R2+100 mmol/L组的细胞凋亡率、Caspase-3及LDH均低于I/R2组及I/R2+50 mmol/L组(P<0.05),I/R2+100 mmol/L组的p-Akt/Akt及p-GSK3-β/GSK3-β均高于I/R2组及I/R2+50 mmol/L组(P<0.05)。结论6-姜酚处理后的大鼠心肌细胞I/R程度显著减轻,炎症因子降低,心肌细胞的p-Akt/Akt及p-GSK3-β/GSK3-β信号通路相关蛋白比值升高,考虑6-姜酚通过激活Akt/GSK3-β信号通路达到改善心肌I/R的效果。

EFNA3和ITGA9基因多态性与公猪精液品质性状的关联分析

精液品质性状是评估公猪繁殖性能的重要性状。本研究通过基因组分析,筛选出磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路中影响公猪精液品质性状的候选基因肝配蛋白A3(Ephrin A3,EFNA3)和整合素α9(Integrin Alpha 9,ITGA9)。进一步鉴定出EFNA3基因的g.94708472 G>A位点与总精子数、精子活力和精子畸形率性状显著相关;ITGA9基因的g.22284275 G>T位点与精子活力和精子畸形率性状显著相关,g.22437684 C>T位点与有效精子密度、精子活力和精子畸形率性状显著相关。ITGA9基因的2个SNPs位点连锁不紧密。EFNA3基因g.94708472G>A位点与ITGA9基因g.22284275G>T和g.22437684C>T位点存在互作关系。EFNA3基因g.94708472G>A位点与ITGA9基因g.22284275G>T和g.22437684C>T位点与公猪精液品质性状显著关联,可作为公猪精液品质选育的潜在分子标记。

Tim-3/Galectin-9与Th1/Th2相关因子在人细粒棘球蚴感染中的表达研究

目的探讨人细粒棘球蚴感染中Tim-3/Galectin-9与Thl/Th2的平衡关系及其与该疾病发生、发展的关系。方法用实时荧光定量PCR法分别检测30例慢性细粒棘球蚴感染者和30例健康体检人群外周血中Tim-3、Galectin-9、T-bet和GATA-3mRNA的表达,同时用酶联免疫吸附(ELISA)法检测慢性细粒棘球蚴感染者和健康对照者血清中可溶性Tim-3和Galectin-9及IFN-γ、IL-12和IL-4的水平。结果 (1)实时荧光定量PCR检测结果显示:与健康对照组相比,感染组Tim-3和Galectin-9mRNA水平显著升高,T-bet mRNA水平显著降低,GATA-3mRNA水平显著升高。(2)ELISA检测结果显示:与健康对照组相比,感染组血清中可溶性Tim-3和Galectin-9水平显著升高,IFN-γ和IL-12水平显著下降,IL-4水平显著升高。Tim-3与Galectin-9呈正相关(P=0.000,r=0.776);Tim-3与T-bet呈负相关(P=0.000,r=-0.645);Tim-3与GATA-3呈正相关(P=0.000,r=-0.752)。结论 Tim-3/Galectin-9在人细粒棘球蚴持续性感染中发挥一定的作用,Tim-3/Galectin-9可能通过影响Th1/Th2相关的转录因子T-bet/GATA-3和细胞因子IL-12、IFN-γ和IL-4的水平变化,促进Th1/Th2细胞失衡现象的发生,从而促进感染的持续性发展。

Tim-3及其配体Galectin-9与病毒感染的关系

T细胞免疫球蛋白黏蛋白3(Tim-3)基因是Tim家族成员,与其配体半乳凝素-9(Galectin-9)结合可显著抑制T细胞的活化和增殖,并调节细胞因子的表达和分泌。Tim-3/Galectin-9参与免疫反应的调节及抗病毒免疫反应,阻断此通路可促进CD8+T细胞应答和对病毒的控制。因此,Tim-3/Galectin-9通路可能与病毒感染慢性化有关。本文对Tim-3及其配体的生物学特性、功能及在病毒感染中的研究近况进行综述。

外周血Tim-3及其配体Galectin-9在三阴性乳腺癌患者的表达变化及临床意义

目的探究三阴性乳腺癌(triple negative breast cancer,TNBC)患者外周血Tim-3及其配体Galectin-9的表达水平及其临床价值。方法选取52例TNBC和50例年龄匹配的健康人群作为对照组,荧光定量PCR测定外周血单个核细胞Tim-3及其配体Galectin-9 mRNA水平;酶联免疫吸附试验测定血清IL-10浓度;同时记录实验室指标。结果与对照组相比,TNBC患者WBC、LYM、MON、Hb和ALB均显著下降;而Tim-3 mRNA和Galectin-9 mRNA表达水平则显著升高。此外,TNBC具有更高水平的血清IL-10浓度。Tim-3 mRNA与肿瘤大小、淋巴结转移及TNM分期密切相关,但与Ki67表达并不相关;而Galectin-9 mRNA则仅与肿瘤大小相关。相关性分析显示Tim-3 mRNA和Galectin-9 mRNA均与血清IL-10浓度显著正相关,且Tim-3 mRNA和Galectin-9 mRNA间亦呈正相关性。结论Tim-3 mRNA和Galectin-9 mRNA在TNBC中异常上调,与临床病理学资料相关,并与IL-10密切相关,可能成为TNBC的生物标志物。

左西孟旦对缺氧复氧诱导的H9c2细胞凋亡、PTEN和PI3K/Akt信号通路的影响

[目的]研究左西孟旦对缺氧复氧(H/R)条件下H9c2细胞凋亡的影响及相关机制。[方法]体外培养H9c2细胞,将细胞分为空白对照组、H/R组、左西孟旦低剂量组、左西孟旦中剂量组、左西孟旦高剂量组。采用四甲基偶氮噻唑蓝法检测H9c2细胞增殖;流式细胞仪检测H9c2细胞凋亡;超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒、丙二醛(MDA)试剂盒分别检测SOD活性及MDA含量;荧光探针法检测活性氧(ROS)水平;Western blot检测增殖细胞核抗原(PCNA)、B淋巴细胞瘤2蛋白(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、磷酸酶及张力蛋白同源物(PTEN)及磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(Akt)信号通路蛋白表达。[结果]与空白对照组比较,H/R组H9c2细胞增殖抑制率、凋亡率、MDA含量、ROS水平、PTEN蛋白表达均显著升高(P<0.05),PCNA、Bcl-2、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt均显著降低,Bax显著升高(P<0.05)。与H/R组比较,左西孟旦低剂量组、左西孟旦中剂量组、左西孟旦高剂量组H9c2细胞增殖抑制率、凋亡率、MDA含量、ROS水平、PTEN蛋白表达均显著降低(P<0.05),PCNA、Bcl-2、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt均显著升高,Bax显著降低(P<0.05);且左西孟旦剂量越高,上述指标的相应变化越明显。[结论]左西孟旦可能通过抑制PTEN并激活PI3K/Akt信号通路,促进H/R条件下H9c2细胞增殖,抑制细胞氧化应激和凋亡。

细粒棘球蚴病患者Tim-3/Galectin-9对Th17/Treg的影响作用

目的探讨人细粒棘球蚴感染中T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子-3/半乳糖凝集素-9(Tim-3/Galectin-9)与Th17/Treg关系。方法收集28例细粒棘球蚴感染患者(CE组)以及30例健康体检人员(正常对照组)外周血,用酶联免疫吸附(ELISA)法检测细粒棘球蚴感染患者外周血白细胞介素-10(IL-10)、白细胞介素-17A(IL-17A)、转化生长因子β(TGF-β)的水平,实时定量PCR检测Tim-3 mRNA、Galectin-9 mRNA以及Th17转录因子(RORγt)和Treg细胞转录因子(FOXP3),并进行相关性分析。结果细粒棘球蚴感染患者CD4^+T细胞上Tim-3表达水平高于正常对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);与正常对照组相比,CE组患者外周血中TGF-β、IL-10含量明显增加,差异具有统计学意义(P<0.05)。CE组患者血清中Galectin-9水平高于正常对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。而转录因子Foxp3在CE患者外周血单个核细胞(PBMC)中水平高于正常对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。Tim-3^+CD4^+T和Galectin-9分别与TGF-β和IL-10呈正相关(P<0.05)。Tim-3mRNA、Galectin-9 mRNA分别与FOXP3呈正相关(P<0.05)。结论Tim-3/Galectin-9参与了细粒棘球蚴感染患者的免疫应答,Tim-3/Galectin-9可能通过改变Treg细胞转录因子及细胞因子,促进Th17/Treg细胞平衡改变,导致细粒棘球蚴持续感染。

下调Tim-3对肝癌干细胞自我更新能力及Wnt信号通路的影响

目的探讨Tim-3对肝癌干细胞(liver cancer stem cells,LCSCs)自我更新能力及Wnt信号通路的影响.方法培养人肝癌细胞系HepG2、SMMC7721及正常干细胞系L02,流式细胞仪分选Nanog阳性(+)的肝癌干细胞;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测Tim-3在3个细胞系中的mRNA表达水平及在肝癌干细胞中的mRNA表达水平;HepG2肝癌干细胞转染Tim-3 siRNA,荧光显微镜和光学显微镜检测转染率,Western blot法检测转染后Tim-3蛋白水平;qRT-PCR检测转染前后Tim-3、Wnt3、β-catenin的mRNA表达水平;细胞克隆形成试验和细胞成球试验检测转染前后HepG2肝癌干细胞的自我更新能力的变化.结果 qRT-PCR检测Tim-3在肝癌细胞系HepG2、SMMC7721中的mRNA表达显著高于正常肝细胞L02(P<0.05);Tim-3在HepG2肝癌干细胞的表达明显高于肝癌细胞(P<0.05);在SMMC7721肝癌干细胞与肝癌细胞比较Tim-3mRNA表达有低趋势;经荧光镜和光学显微镜观察,Tim-3 siRNA转染细胞良好;Western blot法结果表明,Tim-3蛋白水平在siRNA-451组细胞中的表达显著低于siRNA-750、siRNA-NC、未转染细胞(P<0.05);转染后HepG2干细胞Tim-3、Wnt3、β-catenin的mRNA表达水平均显著下降;克隆形成实验和细胞球形成实验显示转染Tim-3 siRNA后,细胞的克隆形成能力和细胞球生长能力均显著降低(P<0.05).结论下调Tim-3表达水平后,可通过抑制Wnt信号通路,最终减弱肝癌干细胞的自我更新能力.

微小RNA-9-3p对甲状腺乳头状癌细胞侵袭迁移和Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的探讨微小RNA-9-3p(miR-9-3p)对Wnt/β-连环蛋白(β-cat)信号通路的调控作用及甲状腺乳头状癌(PTC)细胞TPC-1侵袭和迁移的影响。方法体外培养TPC-1细胞,转染miR-9-3p inhibitor(抑制组)和空质粒(空转染组),同时设置空白对照组。采用实时荧光定量PCR(QPCR)检测3组miR-9-3p的表达情况;采用MTT法、划痕实验和Transwell侵袭实验检测3组细胞的增殖、迁移和侵袭情况;采用Western blotting检测3组TPC-1细胞中β-cat、血管内皮钙黏素(VE-cad)、Twist1和上皮钙黏素(E-cad)的蛋白表达情况。结果抑制组TPC-1细胞miR-9-3p的表达水平为0. 21±0. 10,低于空白对照组的1. 02±0. 16和空转染组的0. 98±0. 15(P<0. 05)。MTT结果显示,抑制组TPC-1细胞培养24、48、72、96 h后的增殖率分别为(95. 68±4. 34)%、(87. 46±4. 59)%、(78. 11±4. 63)%和(71. 24±3. 91)%,低于空转染组,差异有统计学意义(P<0. 05)。Transwell侵袭实验结果显示,抑制组TPC-1细胞侵袭数为(157±62)个,少于空白对照组和空转染组(P<0. 05)。划痕实验结果显示,抑制组TPC-1细胞愈合率为(34. 02±7. 11)%,低于空白对照组和空转染组(P<0. 05)。抑制组TPC-1细胞β-cat核转移情况弱于空白对照组和空转染组。抑制组TPC-1细胞β-cat、VE-cad和Twist1蛋白表达水平分别为1. 15±0. 29、0. 23±0. 08和0. 65±0. 20,低于空白对照组和空转染组(P<0. 05),而E-cad蛋白表达水平为0. 85±0. 17,高于空白对照组和空转染组(P <0. 05)。结论下调miR-9-3p可抑制Wnt/β-cat信号通路的激活,逆转TPC-1细胞的上皮间质转化,从而降低PTC的侵袭和迁移活性。

Galectin-3调控Wnt信号通路影响骨肉瘤细胞增殖侵袭的实验研究

目的探讨沉默骨肉瘤细胞中半乳凝集素-3(Galectin-3)的表达对细胞增殖及侵袭的影响及机制。方法从骨肉瘤组织及相应的瘤旁组织中提取总蛋白,Western blot检测Galectin-3的蛋白表达;阴性对照组(NC-siRNA)和RNA干扰组(Galectin-3-siRNA)转染至人骨肉瘤MG63细胞,不经任何处理的细胞作为空白对照组,转染48 h后,提取细胞中的蛋白,Western blot检测各组细胞中Galectin-3的蛋白表达;CCK8实验和Transwell小室分别检测细胞增殖和侵袭能力;Western blot检测ki67、MMP-2、MMP-9、β-catenin、Cyclin D1蛋白表达。结果转染Galectin-3-siRNA能显著降低MG63细胞中Galectin-3的蛋白表达;与对照组及NC-siRNA组比较,Galectin-3-siRNA组细胞存活率及细胞侵袭数显著降低,ki67、MMP-2、MMP-9、β-catenin、Cyclin D1蛋白表达显著下调(P<0.05)。结论 Galectin-3在骨肉瘤组织中的表达显著高于瘤旁组织,RNA干扰沉默Galectin-3的表达可显著降低细胞的增殖及侵袭能力,其机制与抑制wnt信号通路有关。

TIM-3表达对肝癌细胞的作用及其机制研究

目的 首先明确TIM-3在肝癌组织中的表达,之后在体外细胞水平上探究TIM-3诱发肝癌细胞恶性生物学行为及其可能涉及的作用机制。方法 收集南京市第二医院2021年1月—2021年12月实施肝癌手术治疗的34例原发性肝癌(HCC)癌组织及邻近癌旁组织,采用免疫组织化学法检测肝癌组织中TIM-3的表达情况,分析TIM-3的表达与其临床病理参数的相关性。构建低表达TIM-3的肝癌细胞系验证肝癌细胞增殖迁移能力。Western blot方法探究TIM-3表达及其与Galectin-9的结合对NF-κB/STAT3/IL-6信号轴的影响。结果 肿瘤组织中TIM-3基因的表达为73.5%(25/34),高于癌旁正常组织50%(17/34),差异有统计学意义(χ^(2)=3.985,P=0.046)。在肝癌组织中TIM-3的表达与组织学分型、临床分期有显著相关性(χ^(2)=7.404、5.625,P<0.05)。沉默TIM-3的肝癌细胞增殖率、迁移率(t=12.39、3.129,P<0.05)显著降低。TIM-3的表达上调了NF-κB/STAT3/IL-6相关蛋白,阻断Galectin-9后通路相关蛋白的表达受到抑制。结论 TIM-3在HCC组织中高表达,可促进肝癌细胞的恶性增殖和迁移,TIM-3的表达以及与Galectin-9的相互作用激活IL-6/STAT3/NF-κB信号轴而诱导肝癌细胞恶性生物学进展。

Wnt/β-catenin信号通路调控肝细胞生长及Galectin-3的重要作用

最早的wnt基因是由Nusse等于1982年发现并报道，从鼠类乳腺癌病毒（MMTV）诱导的小鼠乳腺癌中克隆出的种原癌基因，当时被称为int-1基因。接下来的研究发现int-l基因与1973年Sharma报道的果蝇的无翅基因Wingless（wg）为同源基因，所以将两者合并命名为Wnt。后来运用PCR技术发现了大量Wnt家族成员，从线虫到脊椎动物的许多物种中均有Wnt基因家族成员的存在，人类基因组中已经发现和经试验证实共有19个wnt基因，果蝇中有7个。