调控Tim-3通路在免疫性肝损伤大鼠中对Th17细胞的影响

目的建立免疫性肝损伤模型,探讨Tim-3通路在阻断或激活时对Th17细胞的影响。方法大鼠尾静脉注射刀豆蛋白A(Con A)8周,建立免疫性肝损伤模型。无菌取脾脏制备脾淋巴细胞,取外周血分离血清后于-20℃保存,取肝脏组织放入4%的多聚甲醛中固定备用。在96孔板上将脾淋巴细胞平均分成5组,即阻断实验组、阻断对照组、激活实验组、激活对照组和Con A对照组。用Tim-3的单克隆抗体即Anti-Tim-3来阻断Tim-3通路;用Tim-3的重组配体galectin-9来激活Tim-3通路,37℃、5%CO2培养箱中培养72 h,收集细胞上清液于-20℃保存。生化分析法测血清中ALT、AST和ALB的表达;HE染色观察肝脏组织的病理变化;免疫组化法测肝脏组织中IL-17A和ROR-γt蛋白的表达;ELISA法测细胞上清液中IL-17A及IL-6的表达;实时定量PCR测各组脾淋巴细胞ROR-γt mRNA的表达。结果与对照组相比,模型组HE染色可见明显的炎性细胞浸润、肝脏组织损伤及较多的假小叶,免疫组化可见IL-17A和ROR-γt蛋白的表达明显升高;与阻断对照组相比,阻断实验组中IL-17A和IL-6的水平升高(P<0.05);与激活对照组相比,激活实验组中IL-17A和IL-6的水平降低(P<0.05);实时定量PCR显示与阻断对照组相比,阻断实验组中ROR-γt mRNA的表达明显增加(P<0.05)。结论免疫性肝损伤的发病与Th17细胞密切相关,免疫调控Tim-3通路可通过影响Th17细胞效应,进而参与免疫性肝损伤的发病机制。

Tim-3信号通路调控巨噬细胞极化在鲍曼不动杆菌性肺炎免疫致病和免疫防治中的作用

目的探讨T细胞免疫球蛋白及粘蛋白-3(T-cell Ig-mucin-3,Tim-3)信号通路调控巨噬细胞极化在鲍曼不动杆菌性肺炎免疫致病和免疫防治中的作用。方法选取正常小鼠,定为正常组20只,将小鼠感染为鲍曼不动杆菌毒性临床菌株和疫苗菌株,检查生存率,细菌定量,组织病理等,用Real-time PCR检测细胞因子,用流式检测BALF炎症细胞浸润,分别建立小鼠鲍曼不动杆菌肺炎模型组20只和鲍曼不动杆菌疫苗接种模型组20只。通过ELISA法、Western blot技术检测Tim-3信号通路抑制巨噬细胞极化方向的影响。结果与正常组相比,临床株组IL-1β、TNF-α、IL-6、TGF-β显著升高(P<0.05),与临床株组相比疫苗组IL-1β、TNF-α、IL-6、TGF-β显著降低(P<0.05),差异有统计学意义。正常组肺组织结构正常,无明显病变;临床株组肺组织肺泡结构受损严重,可见血管充血、炎性细胞浸润等现象;与临床株组相比,疫苗组肺组织结构损坏得到缓解。临床株组与正常组比较鲍曼不动杆菌性肺炎性老鼠肺组织巨噬细胞的MI标记基因TNF-a的表达有所减少,但CD32的表达有所增加。M2标记基因CD206和IL-10的表达增加(p)(P<0.05);Tim-3通路抑制巨噬细胞后CD32、TNF-α基因的相对表达量升高,CD206表达升高,IL-10表达降低(P<0.05)。结论Tim-3信号通路调控巨噬细胞极化方向,在鲍曼不动杆菌性肺炎致病中起到免疫防治作用。

Galectin-9/Tim-3信号通路在HBV感染中对机体固有免疫及适应性免疫调控的研究进展

乙型肝炎病毒(HBV)感染过程中,机体固有免疫及适应性免疫功能损伤与HBV感染的慢性化密切相关,特别是T细胞功能的耗竭。T细胞免疫球蛋白黏蛋白3(Tim-3)及其配体半乳糖苷结合蛋白9(Gal-9)在包括HBV在内的多种病毒感染所致的机体免疫功能紊乱过程中发挥着重要作用,是参与机体固有免疫及适应性免疫应答调控的重要信号通路,也是诱导T细胞耗竭的重要负调控分子之一。本文扼要就Galectin-9/Tim-3信号通路在HBV感染过程中对机体免疫功能调控的相关研究进展作综述。

基于Tim-3-Gal-9通路探讨补肾安胎冲剂对复发性流产小鼠Th1/Th2、Th17/Treg细胞平衡的影响

目的观察补肾安胎冲剂对复发性流产(RSA)小鼠Th1/Th2、Th17/Treg细胞平衡的影响,从Tim-3-Gal-9通路探讨其作用机制。方法以雌性CBA/J小鼠与雄性DBA/2小鼠合笼饲养建立RSA小鼠模型,将成模小鼠随机分为模型组及补肾安胎冲剂低、高剂量组,每组10只,另设10只与雄性BALB/c小鼠合笼交配的雌性CBA/J小鼠为正常妊娠组。使用相应药物干预15 d,ELISA检测小鼠血清γ干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-2、IL-4、IL-5、IL-10、IL-12、IL-17、IL-23含量,流式细胞术检测小鼠外周血CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)/CD4^(+)和CD4^(+)Foxp3^(+)细胞比例,RT-PCR和Western blot分别检测小鼠蜕膜组织Tim-3、Gal-9 mRNA和蛋白表达。结果与正常妊娠组比较,模型组小鼠流产率、胚胎丢失率显著升高,血清IL-2、IL-12、IFN-γ、TNF-α、IL-17、IL-23含量显著增加,IL-4、IL-5、IL-10含量显著减少,CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)/CD4^(+)和CD4^(+)Foxp3^(+)细胞比例显著降低,差异均有统计学意义(P<0.01),蜕膜组织Tim-3 mRNA和蛋白表达显著升高,Gal-9 mRNA和蛋白表达显著降低(P<0.01);与模型组比较,补肾安胎冲剂低、高剂量组小鼠流产率、胚胎丢失率显著降低(P<0.05,P<0.01),补肾安胎冲剂高剂量组小鼠血清IL-2、IL-12、IFN-γ、TNF-α、IL-17、IL-23含量显著减少,IL-4、IL-5、IL-10含量显著增加,CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)/CD4^(+)和CD4^(+)Foxp3^(+)细胞比例显著升高,蜕膜组织Tim-3 mRNA和蛋白表达显著降低,Gal-9 mRNA和蛋白表达显著升高,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论补肾安胎冲剂可能通过调控Tim-3-Gal-9通路调节Th1/Th2、Th17/Treg细胞平衡,从而治疗RSA。

亲缘HLA单倍体相合外周血造血干细胞移植后Tim-3/Galectin-9通路变化特点及临床意义

目的探究Tim-3/Galectin-9负性信号通路在亲缘HLA单倍体相合外周血造血干细胞移植中的变化特点及其临床意义。方法以行单倍体造血干细胞移植的36例患者和20例健康者为研究对象,通过FCM监测患者及健康对照组外周血中CD4^(+)T细胞和Tim-3分子的表达情况,ELISA法检测移植后患者细胞因子Galectin-9、IFN-γ、IL-4、TGF-β和IL-17的动态变化。结果根据西雅图国际诊断标准,移植术后有14例患者发生aGVHD,22例患者未发生aGVHD。①未发生aGVHD患者移植后30~90 d CD4^(+)T细胞百分比均低于健康对照组(P<0.05);未发生aGVHD患者移植后血清中细胞因子Galectin-9、TGF-β、IFN-γ、IL-4和IL-17水平呈现逐渐增高的趋势,Galectin-9和TGF-β水平在移植后60 d达到正常值(P>0.05),IFN-γ、IL-4和IL-17在移植后第90天恢复到正常水平(P>0.05)。Spearman相关分析结果显示Galectin-9与TGF-β变化水平呈正相关(r=0.651,P=0.001);②发生aGVHD患者外周血中Tim-3^(+)CD4^(+)T细胞的百分比和IFN-γ、IL-17水平明显高于不发生aGVHD患者(P<0.01);不发生aGVHD患者的Galectin-9和TGF-β水平更高(P<0.05)。Spearman相关分析结果显示Tim-3^(+)CD4^(+)T细胞的百分比与IFN-γ水平呈正相关(r=0.631,P=0.015)。结论单倍体相合外周血造血干细胞移植后细胞因子Galectin-9和TGF-β的早期快速重建可以避免或减缓aGVHD的发生,移植后动态监测Tim-3^(+)CD4^(+)T细胞持续较多而血清中Galectin-9水平下降可能预示着aGVHD的发生。

Tim-3/aPKC-ι通路在英夫利西单抗治疗克罗恩病病程判断中的作用

目的:探讨克罗恩病(CD)患者接受英夫利西(IFX)治疗前后Tim-3/aPKC-ι通路的变化并分析其临床意义和在病程判断中的作用。方法:制备外周血T细胞亚群同时构建靶向RNA干扰Tim-3基因的慢病毒载体,体外转染T细胞亚群,检测细胞因子分泌水平和Tim-3以及aPKC-ιmRNA的变化,确认Tim-3/aPKC-ι通路的存在;收集2009年6月至2019年7月武汉大学人民医院符合研究标准的45例CD患者,分别在第0、2、6周时给予IFX治疗。以同期16例健康体检者为健康对照组。CD患者于治疗开始前(0周)和治疗第5、10和15周时取静脉血,并经结肠镜检查取肠黏膜活组织检查标本。观察CD患者克罗恩病活动指数(CDAI)、血沉(ESR)、C-反应蛋白(CRP)的变化。使用荧光定量PCR方法分析外周血和肠黏膜组织内Tim-3和aPKC-ιmRNA基因表达水平变化。结果:RNA干扰Tim-3基因在T细胞表达后,可抑制下游的aPKC-ι mRNA表达水平以及T细胞增殖的作用,提示CD发病机制中存在Tim-3/aPKC-ι通路。IFX治疗前,CD患者在外周血Tim-3和aPKC-ι mRNA表达水平(5.25±0.89和5.11±0.45)和肠黏膜组织内Tim-3和aPKC-ι mRNA表达水平(5.77±0.56和5.07±0.35)均明显高于健康对照者,差异均有统计学意义(均P<0.05)。第10周和15周时,CD患者外周血Tim-3和aPKC-ιmRNA表达水平和肠黏膜组织内Tim-3和aPKC-ι mRNA表达水平均明显低于治疗前,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:证实Tim-3/aPKC-ι通路在CD的发病机制中有重要作用,活动期CD患者经IFX治疗后Tim-3和aPKC-ιmRNA表达水平下降,提示Tim-3/aPKC-ι通路参与IFX治疗活动期CD,可以导致临床缓解,下降的幅度对病程判断具有临床意义。

T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子-3-半乳糖凝集素-9通路维持妊娠免疫耐受的作用

半乳糖凝集素-9(galectin-9,Gal-9)是凝集素家族的成员之一,在自然杀伤细胞、树突状细胞、巨噬细胞、辅助性T细胞及调节性T细胞等多种细胞均有表达。T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子-3(T cell immunoglobulin domain and mucin domain-3,Tim-3)与配体Gal-9相互作用,在不同免疫细胞介导不同的免疫调节作用,而且与多种疾病状态有关,如自身免疫性疾病、肿瘤、病毒感染及妊娠相关疾病等。本文综述了Tim-3-Gal-9通路通过调节固有免疫及适应性免疫应答以维持妊娠免疫耐受的机制及作用,并展望将其作为妊娠相关疾病免疫治疗新靶点的前景。