TRFIA检测新生儿TSH作为非缺碘地区标志应用的研究

目的:探讨TRFIA检测新生儿TSH水平作为非缺碘地区标志应用的价值。方法:依据碘缺乏病监测资料,应用TRFIA技术检测新生儿72h足跟血(全血滤纸片)。结果:在人群环境碘营养状况基本符合IDD消除标准,TRFIA检测新生儿全血TSH>5mU/L的比率为2.57%(426/16548),而ELISA法为17.35%(1500/8644,2003年)。结论:TRFIA检测新生儿出生72h足跟血(滤纸片)TSH<5mU/L比率≥97%可作为碘营养状况正常的判定标准(非缺碘地区的标志)。

TRFIA检测干血纸片TSH室内质控结果分析

目的:探讨TRFIA法检测干血纸片TSH的质量控制.方法:对1年的质控干血纸片的TSH值进行统计学x、P50、s、CV、最大值、最小值等指标分析;同时对血斑不同部位的TSH值测定.结果:质控干血纸片TSH测定值的x、P50均在标准值(真值)的±20范围以内,C1、C2的CV值分别在6.6%～11.7%、3.6%～15.5%;血斑取血部位以中心到边缘的1/2处所测TSH值接近真值.结论:TRFIA法筛查新生儿先天性甲状腺功能低下症(CH)干血纸片TSH值精密度高,能有效进行质量监控.

TRFIA螯合剂中间体2,6-二(3′-溴甲基-1′-吡唑基)-4-溴吡啶的合成、分离与表征

以2,6-二(3-甲基-1-H-吡唑基)-4-溴吡啶为原料,经重氮化、溴化合成了新型时间分辨荧光免疫分析(TR-FIA)双功能螯合剂中间体2,6-二(3′-溴甲基-1′-吡唑基)-4-溴吡啶,通过IR、GC-MS1、HNMR和元素分析等对其结构进行了确认,探讨了合成条件及反应机理。同时,通过GC-MS1、HNMR和元素分析等对第一副产物4-溴-2-(3′-溴甲基-1′-吡唑基)-6-(3′-甲基-1′-吡唑基)吡啶的结构也进行了确认,以其为原料可继续合成目标化合物,大幅提高总产率。

TrFIA定量检测HBV血清标志物的临床应用评价

目的:探讨时间分辨荧光免疫分析技术(TrFIA)定量检测乙型肝炎病毒血清标志物(HBV-M)在临床中的应用价值。方法:用TrFIA、微粒子酶免疫分析法(MEIA)和酶联免疫吸附试验(ELISA)同时检测192例HBV感染者和110例正常人血清中的HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe和抗-HBc,并以雅倍AXSYM的ME-IA法作为参照,对三种方法的检测结果进行比较分析。结果:TrFIA法同MEIA法比较,测定结果的符合率分别为HBsAg 99.7%、抗-HBs 98.0%、HBeAg 99.0%、抗-HBe 96.4%和抗-HBc 94.0%,经配对资料卡方检验,无显著性差异(P均>0.05);TrFIA法与ELISA法比较,五项HBV-M的阳性检出率前者均高于后者。结论:TrFIA检测HBV-M具有灵敏度高及特异性强等特点,对提高临床检测水平、指导临床治疗及监测等方面有较大的实用价值。

基于磁珠和时间分辨荧光免疫分析的微囊藻毒素LR单链抗体筛选与鉴定

【目的】从鼠源合成噬菌体抗体库中,快速分离获得微囊藻毒素LR单链抗体。【方法】采用磁珠筛选和负筛选方法,设计两轮微囊藻毒素LR单链抗体的筛选方案。用噬菌体产出投入比和多克隆噬菌体免疫分析,对每轮筛选后微囊藻毒素LR特异性噬菌体的富集效果进行鉴定。再将第2轮筛选获得的次级库提取单链抗体基因,转入可溶性表达载体;诱导表达后,采用时间分辨荧光免疫法,对单个噬菌体克隆鉴定并测序。【结果】两轮筛选的噬菌体产出投入比分别为4.8×10-8和2.88×10-6。第2轮筛选后的次级库,经多克隆噬菌体免疫分析得到的荧光信噪比,比原始抗体库提高了22.8倍。最终鉴定得到5株不同的阳性噬菌体克隆,其中最佳的克隆对微囊藻毒素LR的检测灵敏度(IC10)为13 ng.mL-1,抑制中浓度(IC50)为435 ng.mL-1,线性范围在31—5 952 ng.mL-1。【结论】本研究筛选到的单链抗体,有潜力应用于微囊藻毒素LR的免疫学检测或免疫亲和柱的制备,同时也探索了一种高效的微囊藻毒素LR单链抗体的库筛选、鉴定方法。

间接竞争时间分辨荧光免疫分析法检测稻米中Cry1C毒素

利用免疫新西兰大白兔制备Cry1C毒素多克隆抗体,建立间接竞争时间分辨荧光免疫分析（CI-TRFIA）方法,用于稻米中Cry1C毒素的残留检测。通过4次免疫,采集Cry1C毒素多克隆抗体血清,并用饱和硫酸铵沉淀和Protein A柱纯化,测定抗体效价;以制备Eu-N1标记的羊抗兔IgG作为检测抗体,建立Cry1C毒素的CI-TRFIA检测方法,并进行抗原类似物的特异性分析和Cry1C毒素在稻米中的添加回收试验。结果表明：获得的多克隆抗体质量浓度为3.86 mg·mL^-1,效价为1∶48 000;建立的CI-TRFIA检测方法,其灵敏度（IC10）为0.074 ng·mL^-1,中抑制浓度（IC50）为60.16 ng·mL^-1,线性检测范围（IC20~IC80）为0.96~1 633.60 ng·mL^-1;对Cry1B、Cry1Ab和Cry1Ac均有一定的交叉反应;添加回收试验的批内、批间回收率为84.53%~107.12%,变异系数为6.05%~11.24%。结论：该检测方法稳定性和重复性较好,可以满足Cry1C毒素的检测要求。

时间分辨荧光免疫分析及其在临床检测中的应用

本文介绍了时间分辨荧光免疫分析法的检测原理、检测方法 。

时间分辨荧光免疫分析和放射免疫分析测量精度的比较

采用时间分辨荧光免疫分析和放射免疫分析法对血清样品进行分析,对其加样精度、测定精度和系统精度进行了比较。结果表明:①血清加样时,手动加样CV>3.4％,自动加样CV<O.7％,P<0.001;试剂加样时,手动加样CV>1.3％,自动加样CV<0.3％,P<0.001。②测量精度,放免法CV=2.4％,时间分辨法CV=0.8％,P<0.001。③系统精度,放免法CV=3.6％,时间分辨法CV=1.3％,P<0.001。以上结果提示:时间分辨荧光免疫分析在加样精度、测定精度和系统精度上都显著优于放射免疫分析。

时间分辨免疫荧光法定量检测癌胚抗原(CEA)试剂临床应用研究

目的对自制时间分辨免疫荧光法定量检测癌胚抗原(CEA)试剂盒进行临床应用研究,为该试剂盒临床应用及临床疗效评价提供科学依据。方法收集血清标本326份,用自制试剂盒按试剂盒操作说明书对血样进行测定,并以化学发光法(R oche)为对照方法,W ALLAC公司的CEA时间分辨免疫测定药盒(A u toDELF IATMhCEA)作为复核试验,获取相关目标实验数据,并计算得“真实性”和“可靠性”等统计学数据。结果以化学发光法为对照试验,其阳性符合率为95.83%,阴性符合率为98.73%,检验无显著性差异;自制试剂盒的定量测定值与化学发光法的测定值较为一致,相关系数达0.93,相关性好。结论试剂盒检测性能与现在临床广泛应用的方法相仿,能满足临床应用的需要。

HBsAg反应性/核酸筛查无反应性献血者乙肝感染多方法确认研究

目的了解深圳市HBsAg ELISA反应性核酸筛查无反应性献血者乙肝感染状况。方法收集2019~2020年HBsAg ELISA反应性NAT无反应性标本,应用全自动时间分辨荧光分析法(TRFIA)和罗氏电化学发光免疫法(ECLIA)及中和试验检测HBsAg;分别采用商用罗氏MPX和Ultrio Elite单人份检测HBV DNA,经2.5 mL大容量提取病毒核酸,采用实时定量PCR检测病毒载量,巢式PCR扩增BCP/PC区和S区基因;同时检测HBV血清学标志物,对可疑结果标本进行追踪检测。综合多方法分析检测结果。结果67602份血样中有73(0.11%)份HBsAg ELISA反应性NAT无反应性血液标本参与本研究。TRFIA、ECLIA、中和试验及5种核酸检测方法确证HBsAg阳性标本15例(20.5%,15/73),另外2例(2.7%,2/73)标本经追踪检测后确认;17例确证HBsAg+标本病毒载量为(未检出~378)IU/mL,中位数为10.1IU/mL;HBsAg浓度与HBV DNA载量间相关性较弱(R^(2)=0.3944)。结论不同HBsAg检测方法只能检测出大部分乙肝病毒感染标本,血液筛查必须选取灵敏度高的多种方法联合检测以确保血液安全。对于结果不一致标本可进行随访,并增加乙肝血清学标志物检测辅助判断。

血清SCML2在胃肠胰神经内分泌肿瘤中的表达及临床意义

目的探讨血清SCML2蛋白在胃肠胰神经内分泌肿瘤(GEP-NENs)中的表达及临床意义。方法收集南通大学附属医院2009年1月至2014年1月GEP-NENs组织和血清标本64例,另外收集同时期胃、肠、胰腺癌(均为腺癌)和胃肠息肉手术患者各30例组织和血清标本。采用TRFIA法检测血清SCML2水平,采用免疫组化法检测组织中SCML2蛋白表达。分析血清SCML2表达与GEP-NENs临床病理特征及预后的关系。结果GEP-NENs患者血清SCML2蛋白表达量[(62.50±34.0)ng/ml]明显高于腺癌患者[(24.89±15.32)ng/ml]、胃肠息肉患者[(21.83±16.49)ng/ml],差异具有统计学意义(P<0.05);且血清SCML2蛋白表达与病理类型、病理分级、浸润深度、TNM分期有关(P<0.05)。GEP-NENs患者血清SCML2水平与血清CgA水平(r=0.649,P<0.05)、组织SCML2蛋白表达(r=0.814,P<0.05)呈正相关。ROC曲线分析,血清SCML2诊断GEP-NENs的效能高于血清CgA[0.871(95%CI:0.812~0.930)vs.0.714(95%CI:0.624~0.804)]。GEP-NENs患者随访时间为2~125个月,中位生存时间(OS)为48.0个月(37.6~58.4个月),其中血清SCML2低表达患者中位OS为89.0个月(29.2~148.8个月),高于血清SCML2高表达患者中位OS为42.0个月(28.2~55.9个月),差异有统计学差异(χ^2=9.442,P=0.002)。结论血清SCML2在GEP-NENs患者中的表达量明显升高,与病理类型、病理分级、浸润深度、TNM分期、预后不良有关。

时间分辨荧光免疫法测定土壤中Cry1Ac毒素

为了建立快速监测土壤中Cry1Ac毒素的方法,本试验利用Cry1Ac多克隆抗体和铕标记的羊抗兔IgG,采用时间分辨荧光免疫分析技术(Time-resolved fluorescence immunoassay,TRFIA)法快速检测5种典型土壤(黑土、黄壤、红壤、紫色土、潮土)中Cry1Ac毒素的回收率。结果表明,该方法最低检出限为0.3μg/L,线性检测范围为0.3～500.0μg/L,批内和批间变异系数均小于10.00%。5种土壤中Cry1Ac毒素的平均添加回收率为75.03%,其中有机质含量最高的黑土的添加回收率最低,且随着不同土壤中有机质含量的降低,添加回收率逐渐升高。间接时间分辨荧光免疫分析技术(TRFIA)法与酶联免疫吸附(ELISA)法的测定结果高度相关,相关系数为0.996 7。因此,本试验建立的TRFIA方法可为土壤中Cry1Ac残留检测提供一个新的平台。

脱氧雪腐镰刀菌烯醇时间分辨荧光免疫检测体系适用性评价

目的研究已建立的脱氧雪腐镰刀菌烯醇时间分辨荧先兊疫定量检测体系(包括脱氧雪腐镰刀菌烯醇时间分辨荧先兊疫层析检测卡和荧先定量检测仪)的适用性。方法检测20个阴性样本中脱氧雪腐镰刀菌烯醇含量,确定该检测体系的检出限和定量限;对6组含不同浓度脱氧雪腐镰刀菌烯醇的小麦阳性样本和6组含不同浓度脱氧雪腐镰刀菌烯醇的玉米阳性样本进行检测,确定方法的准确性和台间差;重复6次检测含中等浓度脱氧雪腐镰刀菌烯醇的阳性样本和连续12 h检测国家检测限浓度的阳性样本,确定系统的重复性和稳定性。结果该体系的检出限为154μg/kg,定量限为414μg/kg,幵且检测结果与液质联用方法定值结果无显著性差异,仪器台间差无显著差异;测值的精密度未超过国家标准规定要求。结论本研究验证的时间分辩荧先定量检测体系能准确检测玉米和小麦样本中脱氧雪腐镰刀菌烯醇含量。

时间分辨荧光免疫法检测环境中四溴双酚A衍生物(TBBPA DHEE)

本研究利用前期制备的四溴双酚A双(2-羟基乙基)醚(TBBPA DHEE)的多克隆抗体,构建了一种高灵敏的时间分辨荧光免疫分析法,用于检测环境中的四溴双酚A衍生物TBBPA DHEE.为提高分析方法的灵敏度,本研究对反应体系中有机溶剂(甲醇)、离子强度及缓冲体系p H等参数进行了优化.在最适条件下,本方法的最低检测限(LOD,基于F/F_0=90%)与IC_(50)分别为0.27 ng·m L^(-1)及4.3 ng·m L^(-1).该方法具有较高的准确度(水样加标回收率为96%—120%;土样及生物加标回收率为75%—90%).利用该方法对江苏省苏州某地区的环境样品进行了调查:在采集的56个样本中,13个样本检出了这种污染物.检出浓度为:水样0.5—2.7 ng·m L^(-1)、土样0.6—1.6 ng·g^(-1),干重、生物样2.9—4.6 ng·g^(-1),湿重.本研究为首次针对环境中TBBPA DHEE污染状况的系统性分析.

HER2在乙肝肝硬化患者血清中的表达及临床意义

目的:检测乙肝后肝硬化患者血清人类表皮生长因子受体2(HER2)浓度,并探讨其临床意义。方法:采集江阴市人民医院60例慢性乙肝、149例乙肝后肝硬化患者及60例健康体检人群血清标本,采用时间分辨荧光免疫分析法检测血清HER2水平,比较不同组间、不同肝硬化严重程度患者间血清HER2水平,分析乙肝肝硬化患者血清HER2水平与临床参数及终末期肝病模型(MELD)评分的相关性。结果:血清HER2浓度在健康对照组、慢性乙肝组、乙肝后肝硬化组分别为9.21±2.59 ng/mL、11.59±4.43 ng/mL和17.60±6.03 ng/mL,与健康对照组相比,慢性乙肝、乙肝后肝硬化患者血清HER2水平均显著升高(P<0.01),乙肝肝硬化组表达水平显著高于慢性乙型肝炎组(P<0.001),差异均有统计学意义。肝硬化Child C级患者血清HER2(16.57±4.67 ng/mL)高于Child A级(12.11±3.65 ng/mL,P=0.000)及B级(14.48±4.53 ng/mL,P=0.02)患者,差异均有统计学意义。失代偿期肝硬化患者HER2水平与BIL、AST、ALT、PT呈正相关(P均<0.05),与Alb水平呈负相关(P<0.05),但与MELD评分无相关性。结论:乙肝肝硬化患者血清HER2水平高表达,且与其严重程度呈正相关,提示HER2可能参与乙肝后肝硬化的进程。

时间分辨免疫荧光法检测HBV血清标志物的对比分析

目的探讨时间分辨免疲荧光法（TRnA）和酶联免疫吸附试验法（EusA）时HBV血清标志物的捡测结果，并进行对比分析。方法分别采用TRF1A定量和ELISA定性两种方法时90例1临床样本的乙型肝炎痛毒表面抗原（HBsAg）、乙型肝炎病毒表面抗体（HBsab）、乙型肝炎病毒e抗原（HBeAg）、乙型肝炎病毒e抗体（HBeAb）和乙型肝炎病毒核心抗体（HBcAb）5个指标进行检测．通过κ检验评价两种方法之间的一致程度。结果采用TRF1A方法捡测时，5个指标的阳性车分别为47．1％、41．1％、44．4％、58．9％和48．9％；两种方法对各指标的检测效率均表现出很高的一致度，其中HBsAb指标为极强的一致性，其它指标均为高度一致。结论传统的ELIS具有较高的可靠性，与TRFIA方法的一致性较高。

深圳市15岁以下儿童HBV感染及抗体水平调查

目的了解深圳市儿童乙型肝炎(以下简称乙肝)流行和乙肝疫苗接种状况,为制定和调整乙肝疫苗接种策略提供依据。方法采用时间分辨免疫荧光技术(TRFIA)对4 446名15岁以下儿童进行乙肝两对半定量检测,并对结果进行分析。结果 15岁以下儿童乙肝表面抗原(HbsAg)阳性率为1.21%,其中男孩HBsAg阳性率为1.45%,女孩HBsAg阳性率为0.85%,差异没有统计学意义。HBsAg阳性率0～6岁组为0.85%,13～15岁组为4.80%,差异有统计学意义;乙肝表面抗体(HbsAb)阳性率(≥10 U/L)为85.43%,男孩HBsAb阳性率83.94%,女孩HBsAb阳性率88.42%,性别分布差异有统计学意义。HBsAb水平有随着年龄增加而下降的趋势,TRFIA定量分析抗HBsAb结果 <10 U/L占14.28%,10～100 U/L占33.11%,>100 U/L占52.61%。结论年龄越小HBsAg阳性率越低,说明近年该市的乙肝防治效果非常显著,定量测定HBsAb的浓度对于了解儿童对乙肝病毒(HBV)的免疫能力,评价全面免疫的接种效果,及时补种疫苗有重要意义,有47.39%的儿童HBsAb定量值低于100 U/L,需要补种或加强乙肝疫苗,推行乙肝疫苗加强免疫策略应该是今后乙肝防治工作的重点。

抗-Cry2Aa单链抗体分子互作及荧光免疫检测研究

Cry2Aa毒素是一种新型生物农药,分析该毒素与特异性单链抗体分子互作,并建立快速检测毒素残留的方法对保障食品和生态安全有重要意义。本研究以同源蛋白为模板对单链抗体进行建模,并进行了Cry2Aa毒素与单链抗体的分子对接模拟,确定关键结合位点,以此为基础将单链抗体作为检测抗体,建立了间接竞争时间分辨荧光免疫分析方法,对大米样品中Cry2Aa毒素进行了检测。利用生物信息学工具模拟获得单链抗体三维结构模型,分子对接结果显示重链可变区81NY82和121SGNY124区域及轻链可变区的245YSSN248氨基酸残基在与毒素结构Ⅱ区识别过程中起关键作用,为建立高效检测方法奠定基础,进一步基于该单链抗体建立的时间分辨检测方法灵敏度(IC10)为0.08 ng/m L,中抑制浓度(IC50)为7.99 ng/m L,线性检测范围(IC20~IC80)为0.24~263.77 ng/m L,且与常规双抗夹心ELISA法检测呈良好线性关系。