幽门螺杆菌Tipα蛋白的表达、纯化及对胃癌细胞增殖和迁移的影响

目的表达并纯化重组幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)肿瘤坏死因子-α诱导蛋白(tumor necrosis factor-α-inducing protein,Tipα),观察其对胃癌细胞增殖和迁移的影响以及IL-6/STAT3信号通路在其中的作用。方法采用IPTG诱导表达Tipα重组蛋白并通过Ni2+亲和层析纯化,纯化产物进行SDS-PAGE和Western blot鉴定;使用重组Tipα蛋白刺激胃癌SGC7901细胞,分别采用CCK8、流式细胞术、划痕伤口愈合试验和Transwell试验检测其对细胞增殖、凋亡和迁移的影响。结果可溶性25×103重组Tipα蛋白被成功诱导表达且能被抗His-tag单克隆抗体所识别。与空白对照组相比,Tipα蛋白能够抑制SGC7901细胞凋亡(t=9.53;P<0.05)。与PBS组相比,Tipα组细胞的增殖和迁移能力增加,而IL-6单克隆抗体或STAT3抑制剂SH-4-54预处理能够减弱Tipα诱导的细胞增殖和迁移(CCK8实验,F=103.194,P<0.01;划痕伤口愈合试验,F=15.568,P<0.01;Transwell试验,F=36.017,P<0.01)。结论Hp Tipα蛋白可促进胃癌细胞增殖和迁移,IL-6/STAT3信号通路在其中发挥重要作用。

幽门螺杆菌Tipα重组蛋白的表达、纯化及鉴定

目的:克隆幽门螺杆菌(H.polyri,HP)的Tipα基因,构建含有Tipα的重组载体,在大肠杆菌表达并纯化以获得Tipα蛋白。方法:从HP的26695菌株扩增位于HP0596的Tipα基因,将Tipα基因与pET28a载体(His标签)同时经BamHI和XhoI酶切、纯化及连接后,构建含有Tipα的重组载体pET28a-Tipα,重组载体转化至大肠杆菌并表达,表达产物以Ni-NTA亲和层析纯化,Western blot进一步鉴定。结果:克隆Tipα基因,经测序证实与Genbank对比,二者同源性为100%。大肠杆菌表达产物,纯化后SDS-PAGE显示相对分子量为23 ku。Western blot证实纯化产物与抗Tipα抗体特异性结合。结论:成功克隆并表达出HP的Tipα蛋白,为进一步研究Tipα的功能奠定基础。