不同去细胞神经支架制备方法的对比研究

目的比较不同化学方法制备去细胞神经支架的效果,提供有效的组织工程神经支架。方法2月龄雄性SD大鼠15只,体重200～250g,取双侧坐骨神经,随机分为3组,每组10条。根据处理方法不同,A组为正常未处理组;B组为传统Sondell法化学处理组;C组为采用Triton X-200、SB-10、SB-16处理的改良法组。制备后行HE染色、免疫组织化学染色及扫描电镜观察,并对去细胞程度、脱髓鞘程度及神经纤维管道完整性进行量化评价。结果HE染色:A组神经纤维横断面呈圆形,胞核呈深蓝色,髓鞘呈网格状结构;B组轴突及细胞核均消失,神经内膜结构破坏明显;C组轴突及细胞核均消失,神经内膜形成不规则圆形空腔。层粘连蛋白免疫组织化学染色:A组基底膜围绕在髓鞘外周,中间有蓝染SC核;B组SC核及髓鞘结构消失,神经基底膜结构不完整;C组SC核及髓鞘结构消失,神经基底膜形成不规则圆形空腔。S-100蛋白免疫组织化学染色:A组SC及髓鞘呈棕褐色;B组及C组未见明显髓鞘染色。扫描电镜观察:A组髓鞘、轴突等内容物形态清晰;B组髓鞘、轴突等结构均消失,基膜管壁排列欠规则;C组基膜管壁胶原纤维排列有序。去细胞程度及髓鞘染色深度评分:B、C组均优于A组(P<0.05),其中髓鞘染色深度评分C组均优于B组(P<0.05);神经纤维管道完整性评分:C组优于B组(P<0.05),与A组相似(P>0.05);综合评价去细胞处理方法以C组方法为佳。结论改良法所获得的去细胞神经的去细胞效果与传统Sondell法相似,而脱髓鞘及组织结构保留的效果优于后者,可作为一种新的神经支架材料。