小鼠骨髓基质干细胞与人耳脱细胞软骨复合培养的研究

目的 探讨以小鼠骨髓基质干细胞 (MSCs)作为组织工程软骨的种子细胞 ,在人耳脱细胞软骨支架上生长的可行性。 方法 将人耳软骨经脱细胞处理 ,得到脱细胞软骨支架。抽取鼠的骨髓 ,经离心得到单个核细胞 ,进行体外分离培养得到 MSCs。将鼠的第 2代 MSCs种植于脱细胞软骨支架上 ,体外立体培养 10天 ,在光镜及电镜下观察细胞生长及胶原纤维排列情况。 结果 MSCs在人耳脱细胞软骨支架上能立体培养成活 ,细胞分布不均 ,靠近培养液的一面细胞分布较多 ,其中大部分细胞进入已脱细胞的软骨陷窝内 ,每个陷窝内的细胞数为 1～ 2个。 结论 以鼠 MSCs为种子细胞 ,可在人耳脱细胞软骨支架上良好生长 ,构建组织工程软骨。

软骨脱细胞基质仿生支架的制备及其对骨髓基质干细胞成软骨分化的影响

目的探讨软骨脱细胞基质(ACM)仿生支架的制备及其对骨髓基质干细胞(BMSCs)成软骨分化的影响。方法将软骨组织粉碎后脱细胞处理,并以不同的比例与明胶(GT)溶液混合并交联,冷冻干燥制成多孔仿生支架。用扫描电镜(SEM)观察不同交联比例制成的ACM/GT支架,并对其孔径、孔隙率、生物力学、降解速率进行评估,从而选取最优组用于体外软骨构建。分离并培养山羊BMSCs,接种于单纯GT和ACM/GT支架上,SEM观察培养1、7、14 d后细胞在支架上的黏附、分布与基质分泌情况,并通过实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)评估成软骨分化能力。结果制备的ACM无细胞残留。随着ACM占比增加,孔径逐渐增大,降解速率逐渐增快,力学强度逐渐降低。其中G2A2组在孔径、孔隙率、生物力学和降解速率方面均适宜体外构建软骨组织。SEM显示细胞在单纯GT和G2A2支架上均匀分布,增殖显著,基质分泌明显。qRT-PCR显示G2A2显著促进了BMSCs的成软骨分化。结论ACM可以制备成适宜软骨再生的支架材料,并可促进BMSCs的成软骨分化。