碳化二亚胺交联的胶原-硫酸软骨素支架材料构建人工真皮的研究

目的 探讨以胶原 -硫酸软骨素支架材料构建人工真皮的可行性。 方法 以碳化二亚胺 (EDC)为交联剂构建胶原 -硫酸软骨素 (CS)支架体系。通过光电子能谱、扫描电镜、HE染色观察及力学性能测试等对材料的理化性能进行表征。同时分离培养人胚真皮成纤维细胞 ,将体外扩增的成纤维细胞接种在支架上 ,制备人工真皮。通过组织学、免疫组织化学 ,与传统的胶原海绵人工真皮的性质进行比较。 结果 胶原 - CS支架是三维多孔海绵状结构且空隙均匀 ,与胶原支架比较 ,断裂强度提高 ,并且材料表面极性基团增加。成纤维细胞在胶原 - CS支架材料上生长良好 ,形成人工真皮。 结论 胶原 - CS人工真皮具有优越的生物学和力学性能 ,成纤维细胞在胶原 - CS支架上黏附、增殖情况优于胶原真皮。

利用不同支架材料构建人工真皮的研究

目的 探讨脱细胞基质、胶原蛋白基质网架、胶原凝胶的不同支架材料上构建人工真皮的可行性。 方法 采用酶消化法分离幼儿包皮成纤维细胞 ,并进行传代培养 ;将第 3代成纤维细胞种植于三种不同支架上 ,14天后利用 HE染色、透射电镜和扫描电镜对构建的人工真皮结构进行鉴定。结果 1酶消化法得到皮肤成纤维细胞 ,可在含有 10 %小牛血清的 DMEM中传代培养 ;2成纤维细胞在三种不同支架上形成单层细胞 ,并可向胶原膜和胶原凝胶内部生长 ;3成纤维细胞在胶原膜和脱细胞基质内增殖不如胶原凝胶内活跃 ,但人工真皮收缩不明显 ,而胶原凝胶构建的人工真皮收缩明显。 结论 利用脱细胞基质、胶原蛋白基质网架、胶原凝胶支架材料构建的人工真皮具有较好的组织结构 ,是一种较理想的皮肤替代物 ,可作为移植物进行深入研究。

以牛胶原凝胶为支架构建人工真皮的研究

目的 :制备成纤维细胞胶原凝胶 (即真皮替代物 ) ,以研究细胞的生长、分化、增生及与真表皮间的相互作用 ,为研制大面积创面覆盖物———复合皮奠定基础。方法 :①酶消化法培养胎儿成纤维细胞 ;②制备细胞胶原凝胶 ,分为Ca_gel和Cf_gel组 ,接种后于不同时间观察两组细胞的形态变化和胶原凝胶的收缩情况 ;③细胞计数 ;④SEM观测胶原凝胶的表面是否有成纤维细胞附着 ;⑤HE染色。结果 :①成纤维细胞形态及增殖情况 :成纤维细胞胶原凝胶形成后呈半透明状 ,可出现较明显的细胞增殖 ,并可见凝胶收缩现象 ,但Ca_gel组较小 ;人工真皮质地与颜色近似真皮组织 ,有一定的弹性和抗拉性 ,不易脆。②细胞计数法所得两组生长曲线基本相似。Ca_gel和Cf_gel组细胞均具有典型的细胞增殖现象 ,Cf_gel组细胞在后期的增殖略快于Ca_gel组。③扫描显微镜下可见到凝胶表面有梭形的成纤维细胞出现 ,且成纤维细胞紧密贴附于凝胶上。④HE染色可见胶原呈较均一的淡红色网状分布 ,成纤维细胞分布于胶原凝胶内部和表面。结论 :①培养好的细胞凝胶称之为真皮替代物 ,是进行皮肤器官型培养和制作复合皮的关键与基础 ,并可与培养的人工表皮膜片混合移植 ,起到促进表皮细胞的生长黏附和加速创面愈合的作用。