猪Tob1基因内含子的克隆和序列分析

为了获取Tob1基因完整的基因组信息,试验通过生物信息学检索比较分析,设计引物,克隆获得猪Tob1基因的内含子序列。结果表明:猪Tob1基因包含2个外显子和1个内含子,外显子和内含子的剪接符合GT-AG规则,其中两个外显子的碱基序列长度分别为260 bp、1 182 bp,内含子序列长度为1 912 bp,其中A、C、G、T四种碱基分别占23.9%、21.3%、26.7%、28.1%,A+T(52.0%)的含量高于G+C(48.0%)的含量。

青海湖裸鲤TOB1和TOB2基因的克隆与表达分析

【目的】对青海湖裸鲤TOB1和TOB2基因进行克隆及表达分析,为揭示其在青海湖裸鲤生长和生理过程中的作用奠定基础。【方法】采用PCR和RACE技术克隆青海湖裸鲤中TOB1和TOB2基因的cDNA全长序列,对其特性进行了生物信息学分析。以β-actin为内参基因,采用实时荧光定量PCR法(qRT-PCR)检测TOB1和TOB2基因在3龄成鱼肾脏、肠、鳃、脑、心脏、肌肉等组织及发育12,72,120,168,216 h胚胎中的表达水平。【结果】青海湖裸鲤TOB1 cDNA全长为1734 bp,5′非编码区为466 bp,3′非编码区为296 bp,开放阅读框长972 bp,编码323个氨基酸。TOB2 cDNA全长为2785 bp,5′非编码区为51 bp,3′非编码区为1582 bp,开放阅读框为1152 bp,编码383个氨基酸。TOB1和TOB2在N端均具有明显的BTG家族结构域,且系统进化分析显示2个TOB蛋白与鲤科鱼类同源性较高,亲缘较近。qRT-PCR结果表明,TOB1和TOB2在3龄成鱼的肾脏、肠、鳃、脑、心脏、肌肉等组织中均有表达;TOB1在3龄成鱼的心脏组织中表达量最高,其次为脑和肌肉组织,在鳃组织中的表达量最低;TOB2在3龄成鱼的脑组织中表达量最高,其次为肌肉。TOB1及TOB2在不同发育时期胚胎中均有表达,且都在12 h胚胎中表达量最高。【结论】TOB1及TOB2在3龄成鱼各个组织及胚胎中均有表达,但表达量有较大差异,表明2个基因均具有时空表达特异性。

结直肠癌组织中Tob mRNA的表达变化

用荧光定量RT-PCR技术检测76例结直肠癌组织及其相应癌旁正常组织中的Tob mRNA。结果显示,癌组织Tob mRNA的表达高于癌旁正常组织(P<0.05);Tob mRNA表达随着结直肠Duke分期的进展有增加趋势(P<0.05)。认为在结直肠癌的发病中,Tob基因可能发挥致癌基因的作用。

抗增殖蛋白Tob1对人类宫颈癌细胞系HeLa放射敏感性影响的实验研究

为探讨抗增殖蛋白家族成员Tob1(transducer of ErbB2,1)对宫颈癌细胞系HeLa放射敏感性的影响,构建可表达Tob1基因全长的重组质粒pcDNA3.0-Tob1(pc3/Tob1),采用脂质体介导转染入HeLa细胞,经G418筛选出阳性耐抗克隆。通过集落形成实验研究Tob1对HeLa细胞放射敏感性的影响,借助流式细胞术和WesternBlot法检测相关分子机制。结果显示,较之HeLa母细胞和转染"空"质粒pcDNA3.0的HeLa/pc3细胞,转染pc3/Tob1后HeLa细胞放射敏感性明显增加;Tob1蛋白高表达增加了HeLa细胞中由辐射诱导的细胞凋亡,提高了由辐射引起的Bax蛋白的表达,降低了Bcl2蛋白表达。上述结果提示Tob1提高了HeLa细胞对电离辐射的敏感性,其机制可能与其上调Bax蛋白的表达、下调Bcl2蛋白的表达,从而增加由辐射诱导的细胞凋亡有关。

胶质瘤相关基因Tob的功能研究

目的研究Tob基因在胶质瘤细胞系SHG-44中的功能,为下一步进行试验性治疗提供依据。方法按照Tob基因的GenBank登录号D38305,构建带有绿色荧光蛋白(GFP)和新型抗生素Zeocin抗性基因的pTracer-EF/V5-HisA表达载体。利用脂质体将上述表达质粒转入SHG44胶质瘤细胞。在各个不同的培养时段选择2、4、8、16、24、36、48h分别在倒置显微镜下观察,最后在48h时取未转染和转染的细胞大约105个作细胞涂片,进行荧光显微镜摄影和GFAP免疫组化染色分析。同时作体外生长曲线和细胞周期的流式细胞术分析。结果酶切鉴定和序列分析均证实Tob基因被成功克隆,将此基因成功转染到SHG-44细胞后,荧光显微镜观察可见用4μg脂质体和2μgDNA,最后用10μg/mLZeocin筛选可以达到90%的阳性细胞数。在转染Tob基因成功的细胞中GFAP染色的阳性率也同样升高。细胞在转染了Tob基因以后生长速度明显变慢,几乎处于停滞状态。流式细胞术分析显示在体外培养24h后转染阳性细胞G2/M期比例明显减少,而凋亡细胞比例也出现明显的升高。结论Tob基因转染后的胶质瘤细胞生长受到明显抑制,出现向正常胶质细胞的分化和凋亡现象,提示Tob基因确实是一胶质瘤细胞增殖抑制基因,值得进一步做功能研究和实验性基因治疗研究。

γ射线对人淋巴细胞Tob1基因转录表达的影响

目的研究γ射线对人周围血淋巴细胞Tob1基因转录表达的影响。方法对数生长期的淋巴细胞,分别给予1、2、3、4、5、6Gy的60Coγ射线照射,照射后12、24h,以及2Gy照射后4、8、12、24、36、48、72h分别提取总RNA,反转录成cDNA。利用实时荧光定量聚合酶链反应技术,检测各组Tob1基因表达改变。结果2Gy照射后4、24、36h,Tob1 mRNA表达水平升高,均是对照组(未照射组)的1.99倍以上(P<0.05)。1～5Gy范围内照射后24h,Tob1 mRNA表达水平随着剂量的增加而增加差异有统计学意义(P<0.05)。在1～5Gy范围内照射后12h,Tob1 mRNA表达水平和对照组比较差异无显著性(P>0.05);6Gy时其表达水平达最高,为对照组的16.37倍(P<0.05)。结论γ射线照射后人淋巴细胞Tob1基因的表达,在一定剂量范围内的特定时间内呈剂量依赖性上调,Tob1可能会发展为核事故受照射人员的分子生物学剂量标记物。

TOB1高表达抑制肺癌A549细胞体外迁移和侵袭

目的:探讨TOB1(transducer of ErbB 2,1)高表达对人肺癌A549细胞体外迁移和侵袭的影响。方法:应用RT-PCR法检测人支气管上皮细胞HBE和10种肺癌细胞中TOB1、PTEN(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten)、乳腺癌转移抑制基因1(breast cancer metastasis suppressor 1,BRMS1)、RHOC(ras homolog gene family,member C)和NME1(non-metastatic cells 1)mRNA的表达水平;将重组表达载体质粒pcDNA3.0-TOB1和"空载体"质粒pcDNA3.0转染到A549细胞中,建立TOB1高表达的A549/TOB1细胞和对照组A549/PC3细胞,应用体外划痕和Transwell实验检测细胞的体外迁移和侵袭能力,RT-PCR法检测细胞中PTEN、BRMS1、RHOC和NME1 mRNA的表达,蛋白质印迹法检测细胞中α-N-catenin、β-catenin、γ-catenin、基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase2,MMP2)和MMP9蛋白的表达。结果:10种肺癌细胞中TOB1 mRNA的表达水平明显低于HBE细胞(P<0.05),不同细胞株中TOB1 mRNA与PTEN、BRMS1和NME1 mRNA的表达水平间呈正相关(P<0.05)。A549/TOB1细胞的体外迁移和侵袭能力明显低于A549细胞(P<0.05)。A549/TOB1细胞中PTEN、BRMS1和NME1 mRNA的表达水平明显高于A549细胞(P<0.05),而RHOCmRNA的表达水平明显低于A549细胞(P<0.05);A549/TOB1细胞中α-N-catenin、β-catenin、γ-catenin、MMP2和MMP9蛋白的表达水平明显低于A549细胞(P<0.05)。结论:外源性TOB1高表达可以明显抑制肺癌A549细胞的体外转移和侵袭,其机制可能与TOB1调控PTEN、BRMS1、RHOC和NME1的表达,进一步下调α-N-catenin、β-catenin、γ-catenin、MMP2和MMP9蛋白的表达水平有关。

人类ErbB-2转录因子1基因相关信号通路的研究进展

人类ErbB-2转录因子1（TOB1）作为TOB／BTG抗增殖蛋白家族中的一员，具有抑制细胞增殖的能力，并且通过参与调节多种信号通路对细胞的增殖、周期、生长、凋亡、代谢及发育等过程产生重要的影响。研究表明TOB1还与肿瘤的发展密切相关，通过参与调节多种信号通路抑制肿瘤的发生和发展。文章对TOB1相关信号通路的研究进展进行综述。