Tob1通过诱导自噬抑制肾上腺皮质癌细胞SW-13增殖促进细胞凋亡的机制研究

目的:探讨Tob1对肾上腺皮质癌细胞自噬的作用及其影响。方法:将体外培养的SW-13细胞分为对照组、空载质粒转染组以及pcDNA3.1-Tob1质粒转染组。实时荧光定量PCR检测各组细胞中Tob1的mRNA表达。Western blot检测Tob1以及自噬相关蛋白LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ、p62和Beclin 1的表达。LC3免疫荧光检测细胞自噬水平。随后在转染pcDNA3.1-Tob1质粒的SW-13细胞中加入自噬抑制剂3-MA处理,CCK-8检测细胞增殖,Tunel检测细胞凋亡。结果:pcDNA3.1-Tob1质粒转染显著上调SW-13细胞中Tob1的mRNA和蛋白表达,提升LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ和Beclin 1水平,降低p62蛋白表达,并显著提升细胞自噬水平(P<0.05)。与对照组相比,pcDNA3.1-Tob1组SW-13细胞增殖降低,细胞凋亡增加;与pcDNA3.1-Tob1组相比,pcDNA3.1-Tob1+3-MA组细胞增殖提升,细胞凋亡降低(P<0.05)。结论:Tob1能够通过激活细胞自噬降低人皮质癌细胞SW-13增殖并促进其凋亡。

肿瘤抑制因子Tob1对乳癌细胞的辐射增敏作用

目的证明肿瘤抑制因子Tob1是否增加人类乳癌细胞系MDA-MB-231对电离辐射的敏感性,并初步探讨Tob1发挥辐射增敏作用的机制。方法采用集落形成实验探讨重组腺病毒介导的Tob1对MDA-MB-231辐射敏感性的影响,并通过Western Blot法检测由Tob1诱导的受γ线照射后乳癌细胞中相关蛋白表达水平的改变。结果重组腺病毒介导的Tob1高水平表达可显著增加乳癌细胞MDA-MB-231对电离辐射的敏感性(P<0.05),并可引起受照射后乳癌细胞中与凋亡及DNA损伤修复相关蛋白的表达水平改变。结论肿瘤抑制因子Tob1可能通过对细胞凋亡及DNA损伤修复相关蛋白的表达调控,增加乳癌细胞对电离辐射的敏感性。

抗增殖蛋白Tob1对人类宫颈癌细胞系HeLa放射敏感性影响的实验研究

为探讨抗增殖蛋白家族成员Tob1(transducer of ErbB2,1)对宫颈癌细胞系HeLa放射敏感性的影响,构建可表达Tob1基因全长的重组质粒pcDNA3.0-Tob1(pc3/Tob1),采用脂质体介导转染入HeLa细胞,经G418筛选出阳性耐抗克隆。通过集落形成实验研究Tob1对HeLa细胞放射敏感性的影响,借助流式细胞术和WesternBlot法检测相关分子机制。结果显示,较之HeLa母细胞和转染"空"质粒pcDNA3.0的HeLa/pc3细胞,转染pc3/Tob1后HeLa细胞放射敏感性明显增加;Tob1蛋白高表达增加了HeLa细胞中由辐射诱导的细胞凋亡,提高了由辐射引起的Bax蛋白的表达,降低了Bcl2蛋白表达。上述结果提示Tob1提高了HeLa细胞对电离辐射的敏感性,其机制可能与其上调Bax蛋白的表达、下调Bcl2蛋白的表达,从而增加由辐射诱导的细胞凋亡有关。

miR-25在人胃癌组织中的表达分析及其靶基因TOB1的鉴定

目的:分析miR-25在胃癌组织中的表达水平并鉴定其新的靶基因。方法:选取10例胃癌患者的胃癌及癌旁正常组织样本,用qRT-PCR法检测miR-25的表达水平。利用miRNA靶基因预测数据库预测miR-25的靶基因。构建荧光素酶载体(pMIR-TOB1)及绿色荧光蛋白报告载体(pMIR-GFP-TOB1)(含有miR-25结合位点的TOB1的3'UTR片段),利用荧光素酶活性实验和GFP荧光强度报告实验鉴定miR-25的预测靶基因(TOB1)。qRT-PCR法和Western blot法分别检测TOB1的mRNA和蛋白质的表达水平。结果:miR-25在80%(8/10)的胃癌组织样本中表达上调。miR-25模拟物显著抑制了荧光素酶的活性(P<0.01)和GFP荧光强度。miR-25模拟物显著下调了AGS细胞中TOB1的mRNA(P<0.05)和蛋白质的表达。结论:miR-25在人胃癌组织中表达上调,miR-25能结合TOB1的3'UTR并下调TOB1的mRNA和蛋白质的表达。

JUNB基因和TOB1基因在肝细胞癌中的表达及意义

目的:探讨JUNB基因和TOB1基因的表达在原发性肝细胞癌(HCC)发生发展中的作用。方法:应用半定量逆转录聚合酶链(RT-PCR)技术检测55例肝癌患者、55例其它肿瘤患者和33例对照组患者外周血JUNB基因和TOB1基因的表达。结果:各组间外周血JUNB基因和TOB1基因阳性表达率无差异,JUNB基因和TOB1基因在肝癌患者外周血中的表达水平明显高于其他组(分别为P=0.003和P=0.000),其他组之间无差异。结论:JUNB基因和TOB1基因在外周血中的mRNA表达水平可能与肝癌发生密切相关,提示其表达水平可能与预测HCC发生、发展有明显相关性。

抗增殖家族成员TOB1基因与肿瘤

人类ErbB2转录因子1(TOB1)基因编码抗增殖蛋白Tob1,属于BTG/TOB蛋白家族,通过Ras/MAPK信号通路,以及与CCR4-Caf1结合形成复合体等多种途径参与调控细胞周期进程,抑制细胞增殖。TOB1作为抑癌基因与肿瘤发生、发展及转移密切相关,在大多数肿瘤中表达下调,其功能性失活与磷酸化积累及亚细胞分布相关,而且TOB1表达变化还与癌细胞电离辐射的敏感性相关。

lncRNA TOB1-AS1在上皮性卵巢癌组织中的表达及其临床意义

目的:探讨ERBB2.1转导蛋白反义RNA1(transducer of ERBB2.1 antisense RNA 1,TOB1-AS1)在上皮性卵巢癌(epithelial ovarian cancer,EOC)组织中的表达情况及其临床意义,初步探讨TOB1-AS1对EOC细胞体外增殖、迁移和侵袭的影响。方法:使用TCGA数据库对EOC组织中TOB1-AS1表达情况进行分析;收集2017年7月至2018年1月在河北医科大学第四医院妇科行肿瘤切除并经病理检查证实为EOC的67例患者的肿瘤组织,收集同期因其他妇科疾病接受手术的30例患者的非肿瘤卵巢组织作为对照。采用qPCR法检测EOC组织和非肿瘤卵巢组织中TOB1-AS1的表达水平,χ^(2)检验分析TOB1-AS1的表达与不同临床病理特征之间的相关性,Kaplan-Meier和Cox比例风险回归模型分析患者生存及预后的潜在影响因素。CCK-8实验、划痕实验和Transwell实验分别检测敲低TOB1-AS1表达对EOC细胞SKOV3和A2780增殖、迁移和侵袭的影响。结果:TCGA数据库中资料和qPCR检测结果均显示,在EOC组织中TOB1-AS1的表达水平显著高于非肿瘤卵巢组织(均P<0.01)。TOB1-AS1的高表达与EOC患者较晚的FIGO分期、较差的组织分级、淋巴结转移及腹膜转移有关(均P<0.05)。Kaplan-Meier生存分析结果显示,TOB1-AS1高表达组患者术后DFS和OS均短于TOB1-AS1低表达组(均P<0.05)。Cox比例风险回归模型分析结果显示,FIGO分期、淋巴结转移、腹膜转移及TOB1-AS1表达是EOC患者预后的独立影响因素(均P<0.05)。TOB1-AS1在EOC细胞系SKOV3、A2780中的表达水平也显著高于正常卵巢上皮细胞系IOSE80(均P<0.01)。细胞功能实验结果显示,敲低TOB1-AS1可抑制SKOV3和A2780细胞的增殖、迁移和侵袭(均P<0.05)。结论:TOB1-AS1在EOC组织中高表达,与患者的不良预后显著相关。TOB1-AS1可能通过促进EOC细胞SKOV3、A2780的增殖、迁移和侵袭来影响EOC的恶性进展。

肿瘤中TOB1功能相关的调控及其潜在的临床应用价值

TOB1基因编码蛋白是TOB/BTG抗增殖蛋白家族成员之一,目前已在多种肿瘤中发现TOB1表达下调、磷酸化积累和亚细胞分布异常。诸多研究表明TOB1基因的表达既受多种上游转录因子的调控,又能通过多种途径调控其下游靶基因的表达来影响肿瘤细胞的增殖、侵袭、转移和凋亡等,与肿瘤的发生发展密切相关。因此,深入探讨肿瘤中TOB1基因表达调控及相关功能改变在临床中的价值具有重要意义。本文旨在阐述TOB1基因及其相关功能的调控机制在临床肿瘤诊疗和预后评估中的潜在应用。

基因TOB1通过BCL-2和BCL-xl抑制胶质瘤细胞的生长

目的 :探讨基因TOB1在胶质瘤中的作用及其调控机制。方法 :通过免疫组织化学法对胶质瘤组织及正常组织中TOB1、BCL-2(BCL2 apoptosis regulator)、BCL-xl(BCL2 like 1)的表达进行检测。采用Western Blot和荧光素酶检测系统对靶向基因TOB1的microRNA进行筛选分析。用含TOB1过表达、干扰或对照的慢病毒感染胶质瘤细胞株U251。采用噻唑蓝比色法(methyl thiazolyl tetrazolium, MTT)或流式细胞术检测TOB1对U251细胞活力、细胞周期及凋亡的影响。实时聚合酶链式反应(real time polymerase chain reaction, Real-time PCR)和Western Blot分别检测TOB1对凋亡相关因子表达的影响。结果:胶质瘤组织中TOB1基因表达被抑制,miR-92a-3p可以通过结合TOB1基因的3′-非翻译区来调控基因TOB1的表达。并且,过表达TOB1可降低细胞活力,抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,而抑制TOB1表达则具有相反作用。此外,TOB1过表达组的抗凋亡因子BCL-2和BCL-xl表达显著下调;相反,TOB1被干扰后,抗凋亡因子BCL-2和BCL-xl表达则上调。免疫组织化学法显示,胶质瘤组织中BCL-2和BCL-xl的表达增加。结论:TOB1在胶质瘤中表达受到抑制,并通过调控BCL-2和BCL-xl基因的表达影响胶质瘤的增殖和凋亡。

猪Tob1基因内含子的克隆和序列分析

为了获取Tob1基因完整的基因组信息,试验通过生物信息学检索比较分析,设计引物,克隆获得猪Tob1基因的内含子序列。结果表明:猪Tob1基因包含2个外显子和1个内含子,外显子和内含子的剪接符合GT-AG规则,其中两个外显子的碱基序列长度分别为260 bp、1 182 bp,内含子序列长度为1 912 bp,其中A、C、G、T四种碱基分别占23.9%、21.3%、26.7%、28.1%,A+T(52.0%)的含量高于G+C(48.0%)的含量。

TOB1高表达抑制肺癌A549细胞体外迁移和侵袭

目的:探讨TOB1(transducer of ErbB 2,1)高表达对人肺癌A549细胞体外迁移和侵袭的影响。方法:应用RT-PCR法检测人支气管上皮细胞HBE和10种肺癌细胞中TOB1、PTEN(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten)、乳腺癌转移抑制基因1(breast cancer metastasis suppressor 1,BRMS1)、RHOC(ras homolog gene family,member C)和NME1(non-metastatic cells 1)mRNA的表达水平;将重组表达载体质粒pcDNA3.0-TOB1和"空载体"质粒pcDNA3.0转染到A549细胞中,建立TOB1高表达的A549/TOB1细胞和对照组A549/PC3细胞,应用体外划痕和Transwell实验检测细胞的体外迁移和侵袭能力,RT-PCR法检测细胞中PTEN、BRMS1、RHOC和NME1 mRNA的表达,蛋白质印迹法检测细胞中α-N-catenin、β-catenin、γ-catenin、基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase2,MMP2)和MMP9蛋白的表达。结果:10种肺癌细胞中TOB1 mRNA的表达水平明显低于HBE细胞(P<0.05),不同细胞株中TOB1 mRNA与PTEN、BRMS1和NME1 mRNA的表达水平间呈正相关(P<0.05)。A549/TOB1细胞的体外迁移和侵袭能力明显低于A549细胞(P<0.05)。A549/TOB1细胞中PTEN、BRMS1和NME1 mRNA的表达水平明显高于A549细胞(P<0.05),而RHOCmRNA的表达水平明显低于A549细胞(P<0.05);A549/TOB1细胞中α-N-catenin、β-catenin、γ-catenin、MMP2和MMP9蛋白的表达水平明显低于A549细胞(P<0.05)。结论:外源性TOB1高表达可以明显抑制肺癌A549细胞的体外转移和侵袭,其机制可能与TOB1调控PTEN、BRMS1、RHOC和NME1的表达,进一步下调α-N-catenin、β-catenin、γ-catenin、MMP2和MMP9蛋白的表达水平有关。

γ射线对人淋巴细胞Tob1基因转录表达的影响

目的研究γ射线对人周围血淋巴细胞Tob1基因转录表达的影响。方法对数生长期的淋巴细胞,分别给予1、2、3、4、5、6Gy的60Coγ射线照射,照射后12、24h,以及2Gy照射后4、8、12、24、36、48、72h分别提取总RNA,反转录成cDNA。利用实时荧光定量聚合酶链反应技术,检测各组Tob1基因表达改变。结果2Gy照射后4、24、36h,Tob1 mRNA表达水平升高,均是对照组(未照射组)的1.99倍以上(P<0.05)。1～5Gy范围内照射后24h,Tob1 mRNA表达水平随着剂量的增加而增加差异有统计学意义(P<0.05)。在1～5Gy范围内照射后12h,Tob1 mRNA表达水平和对照组比较差异无显著性(P>0.05);6Gy时其表达水平达最高,为对照组的16.37倍(P<0.05)。结论γ射线照射后人淋巴细胞Tob1基因的表达,在一定剂量范围内的特定时间内呈剂量依赖性上调,Tob1可能会发展为核事故受照射人员的分子生物学剂量标记物。

抗增殖蛋白TOB1影响乳腺癌细胞MDA-MB-231体外转移的作用研究

目的研究抗增殖蛋白家族成员TOB1对乳腺癌细胞MDA-MB-231体外侵袭与转移的生物学作用与机制。方法采用脂质体介导的质粒转染和G418筛选培养法获得稳定高表达TOB1的高转移性乳腺癌细胞系MDA-MB-231。通过人工基底膜侵袭实验和划痕实验检测TOB1过表达对MDA-MB-231细胞体外侵袭能力和转移能力的影响。采用super array基因芯片法检测TOB1引起的肿瘤转移相关基因表达的变化。结果与对照组相比,外源性TOB1高水平表达使MDA-MB-231的体外侵袭能力显著降低(P<0.05),同时抑制MDA-MB-231的体外迁移能力;TOB1表达水平的增加引起MDA-MB-231细胞中肿瘤转移抑制基因BRMS1表达的明显增加,同时显著抑制肿瘤转移相关基因HSP90、FXYD5、RHOC、S100A4等的表达(均P<0.05)。结论 TOB1过表达抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231的体外侵袭、转移,涉及的机制可能与TOB1对多种重要的肿瘤转移相关基因的表达调控有关。

TOB1基因功能及其与肿瘤关系的研究进展

人类ErbB2转录因子1（TOB1）基因编码抗增殖蛋白Tob1,是一种多功能蛋白质。TOB1基因不仅涉及抑制细胞增殖和维持T细胞静止,还在诱导细胞凋亡、骨形成、学习记忆、精子发生和胚胎发育等过程中发挥重要作用。TOB1基因的表达失调或磷酸化累积可使其抗增殖功能明显下降或缺失,促进肿瘤形成和发展。全文对TOB1基因功能及其与肿瘤关联的研究进展进行综述。

miR-32-5p靶向TOB1基因调控结直肠癌细胞放射增敏性及迁移侵袭能力机制研究

目的探讨miR-32-5p对结直肠癌细胞放射敏感性及迁移侵袭能力的影响及其潜在作用机制。方法培养人结直肠癌SW480细胞和正常结肠上皮NCM460细胞,将结直肠癌细胞分为未转染组和转染组(分别转染anti-miR-NC、anti-miR-32-5p、pcDNA、pcDNA-TOB1、anti-miR-32-5p+si-NC、nti-miR-32-5p+si-TOB1)。RT-qPCR和Western blot分别检测细胞中miR-32-5p、TOB1 mRNA和蛋白表达,克隆形成实验检测转染各组细胞放射敏感性,Transwell实验检测转染各组细胞迁移、侵袭能力,双荧光素酶报告基因实验和Western blot验证miR-32-5p是否靶向TOB1。结果与人正常结肠上皮细胞相比,结肠癌细胞中miR-32-5p表达明显上调(P<0.05),TOB1 mRNA和蛋白表达明显下调(P<0.05)。与anti-miR-NC比较,anti-miR-32-5p组细胞放射增敏比1.801,细胞迁移和侵袭数目均明显减少(P<0.05);与pcDNA组比较pcDNA-TOB1组细胞放射增敏比1.764,细胞迁移数目和侵袭数目均明显减少(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验和Western blot结果证实miR-32-5p靶向负调控TOB1蛋白表达。与anti-miR-32-5p+si-NC组比较,anti-miR-32-5p+si-TOB1组细胞放射增敏比为0.591,细胞迁移数目和侵袭数目均明显增多(P<0.05)。结论抑制miR-32-5p表达能够明显增强结直肠癌细胞放射敏感性,抑制细胞迁移和侵袭,其作用机制可能与靶向促进TOB1表达有关。

人类ErbB-2转录因子1基因相关信号通路的研究进展

人类ErbB-2转录因子1（TOB1）作为TOB／BTG抗增殖蛋白家族中的一员，具有抑制细胞增殖的能力，并且通过参与调节多种信号通路对细胞的增殖、周期、生长、凋亡、代谢及发育等过程产生重要的影响。研究表明TOB1还与肿瘤的发展密切相关，通过参与调节多种信号通路抑制肿瘤的发生和发展。文章对TOB1相关信号通路的研究进展进行综述。