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活体烟草BY-2悬浮细胞微丝骨架的标记
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作者 韩利波 陈志玲 《首都师范大学学报(自然科学版)》 2014年第5期56-59,83,共5页
微丝骨架是细胞骨架的重要成员,在细胞的多项生理活动中发挥着重要作用.本论文利用荧光标记鬼笔环肽技术和GFP融合蛋白技术,对活体烟草BY-2悬浮细胞中微丝骨架的标记方法进行了探索,结果表明,10nmol/L的Alexa488-Phalloidin为细胞微丝... 微丝骨架是细胞骨架的重要成员,在细胞的多项生理活动中发挥着重要作用.本论文利用荧光标记鬼笔环肽技术和GFP融合蛋白技术,对活体烟草BY-2悬浮细胞中微丝骨架的标记方法进行了探索,结果表明,10nmol/L的Alexa488-Phalloidin为细胞微丝骨架标记的最佳浓度,利用PCR等技术构建pPZP-NtFABD2-GFP植物表达载体后,转化烟草BY-2悬浮细胞,激光共聚焦扫描显微镜观察发现,NtFABD2-GFP融合蛋白能够清晰地显示活体烟草悬浮细胞内的微丝骨架.这些结果为进一步深入研究微丝骨架在活体植物细胞中的功能奠定了基础. 展开更多
关键词 微丝骨架 鬼笔环肽 NtFABD2-GFP融合蛋白 烟草悬浮细胞
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Dihydrosphingosine-lnduced Programmed Cell Death in Tobacco BY-2 Cells Is Independent of H2O2 Production 被引量:2
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作者 Christophe Lachaud 《Molecular Plant》 SCIE CAS CSCD 2011年第2期310-318,共9页
Sphinganine or dihydrosphingosine (d18:0, DHS), one of the most abundant free sphingoid Long Chain Base (LCB) in plants, has been recently shown to induce both cytosolic and nuclear calcium transient increases an... Sphinganine or dihydrosphingosine (d18:0, DHS), one of the most abundant free sphingoid Long Chain Base (LCB) in plants, has been recently shown to induce both cytosolic and nuclear calcium transient increases and a correlated Programmed Cell Death (PCD) in tobacco BY-2 cells. In this study, in order to get deeper insight into the LCB signaling pathway leading to cell death, the putative role of Reactive Oxygen Species (ROS) has been investigated. We show that DHS triggers a rapid dose-dependent production of H2O2 that is blocked by diphenyleniodonium (DPI), indicating the involvement of NADPH oxidase(s) in the process. In addition, while DPI does not block DHS-induced calcium increases, the ROS production is inhibited by the broad spectrum calcium channel blocker lanthanum (La^3+). Therefore, ROS production occurs downstream of DHS-induced Ca^2+ transients. Interestingly, DHS activates expression of defense-related genes that is inhibited by both La^3+ and DPI. Since DPI does not prevent DHS-induced cell death, these results strongly indicate that DHS-induced H2O2 production is not implicated in PCD mechanisms but rather would be associated to basal cell defense mechanisms. 展开更多
关键词 tobacco by-2 cells calcium signaling cytosolic calcium AEQUORIN sphingolipids LCBs dihydrosphingosine SPHINGANINE apoptosis Programmed cell Death (PCD) Reactive Oxygen Species (ROS) H2O2 oxidative burst.
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Live-Cell Imaging of Dual-Labeled Golgi Stacks in Tobacco BY-2 Cells Reveals Similar Behaviors for Different Cisternae during Movement and Brefeldin A Treatment 被引量:1
3
作者 Stephanie L. Madison Andreas Nebenfuhr 《Molecular Plant》 SCIE CAS CSCD 2011年第5期896-908,共13页
In plant cells, the Golgi apparatus consists of numerous stacks that, in turn, are composed of several flattened cisternae with a clear cis-to-trans polarity. During normal functioning within living cells, this unusua... In plant cells, the Golgi apparatus consists of numerous stacks that, in turn, are composed of several flattened cisternae with a clear cis-to-trans polarity. During normal functioning within living cells, this unusual organelle displays a wide range of dynamic behaviors such as whole stack motility, constant membrane flux through the cisternae, and Golgi enzyme recycling through the ER. In order to further investigate various aspects of Golgi stack dynamics and integrity, we co-expressed pairs of established Golgi markers in tobacco BY-2 cells to distinguish sub-compartments of the Golgi during monensin treatments, movement, and brefeldin A (BFA)-induced disassembly. A combination of cis and trans markers revealed that Golgi stacks remain intact as they move through the cytoplasm. The Golgi stack orientation during these movements showed a slight preference for the cis side moving ahead, but trans cisternae were also found at the leading edge. During BFA treatments, the different sub-compartments of about half of the observed stacks fused with the ER sequentially; however, no consistent order could be detected. In contrast, the ionophore monensin resulted in swelling of trans cisternae while medial and particularly cis cisternae were mostly unaffected. Our results thus demonstrate a re- markable equivalence of the different cisternae with respect to movement and BFA-induced fusion with the ER. In addi- tion, we propose that a combination of dual-label fluorescence microscopy and drug treatments can provide a simple alternative approach to the determination of protein localization to specific Golgi sub-compartments. 展开更多
关键词 Golgi apparatus Golgi stack integrity brefeldin A MONENSIN tobacco by-2 cells live-cell imaging.
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烟草悬浮细胞在凋亡过程中Ca^(2+)分布的共聚焦显微成像研究 被引量:1
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作者 王蒴 于维军 +1 位作者 林英 孙忠思 《激光生物学报》 CAS CSCD 2011年第1期9-14,共6页
以Fluo-3AM为游离Ca^(2+)荧光探针,利用激光扫描共聚焦显微镜(Laser Scanning Confocal Microscope,LSCM)对烟草悬浮细胞在热激诱导的凋亡过程中Ca^(2+)时空分布进行了研究。结果显示,在正常细胞中,Ca^(2+)集中分布在细胞壁和细胞核中,... 以Fluo-3AM为游离Ca^(2+)荧光探针,利用激光扫描共聚焦显微镜(Laser Scanning Confocal Microscope,LSCM)对烟草悬浮细胞在热激诱导的凋亡过程中Ca^(2+)时空分布进行了研究。结果显示,在正常细胞中,Ca^(2+)集中分布在细胞壁和细胞核中,细胞质中分布较少;在凋亡早期细胞中,细胞质中Ca^(2+)的浓度增加;在凋亡晚期的细胞中,细胞核中的Ca^(2+)浓度增加较为明显。结果提示,在凋亡过程中,Ca^(2+)的定位分布存在一定的规律。 展开更多
关键词 烟草悬浮细胞 凋亡 CA^2+ Fluo-3 激光扫描共聚焦显微镜
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烟草丝束蛋白ABD2与微丝的体内体外相互作用
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作者 梁蒙 韩利波 +2 位作者 孙海涛 黄璐 陈志玲 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期894-898,共5页
微丝骨架在细胞的生命活动中具有重要的功能,而其动态的解聚聚合特性是其实现功能的前提.丝束蛋白(fimbrin/plastin)做为微丝结合蛋白质,是微丝骨架的重要调控因子之一,含有2个肌动蛋白结合结构域,目前对其结合微丝的机制并不清楚.本文... 微丝骨架在细胞的生命活动中具有重要的功能,而其动态的解聚聚合特性是其实现功能的前提.丝束蛋白(fimbrin/plastin)做为微丝结合蛋白质,是微丝骨架的重要调控因子之一,含有2个肌动蛋白结合结构域,目前对其结合微丝的机制并不清楚.本文以烟草丝束蛋白的肌动蛋白结合结构域2(NtFAbd2)为研究对象,通过原核细胞表达纯化NtFAbd2,利用体外沉淀法分析发现,NtFAbd2能够与微丝结合;利用激光共聚焦扫描显微镜分析发现,在烟草BY-2悬浮细胞内,NtAbd2-GFP与微丝共分布,这些结果为深入分析植物丝束蛋白的作用机制提供了新的数据. 展开更多
关键词 丝束蛋白 肌动蛋白结合结构域2 微丝 烟草by-2悬浮细胞
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外源DMSO和ASA对微囊藻毒素胁迫下烟草细胞ROS生成和抗氧化系统的影响 被引量:10
6
作者 黄文敏 邢伟 +1 位作者 李敦海 刘永定 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期869-873,共5页
采用2μg/mL微囊藻毒素-RR(MC-RR)、2μg/mL MC-RR+0.5%二甲基亚砜(DMSO)和2μg/mL MC-RR+2 mmol/L抗坏血酸(ASA)分别处理烟草悬浮细胞,研究上述各处理对烟草悬浮细胞活性氧(ROS)产生和抗氧化系统的影响。结果表明,与对照相比,MC-RR单... 采用2μg/mL微囊藻毒素-RR(MC-RR)、2μg/mL MC-RR+0.5%二甲基亚砜(DMSO)和2μg/mL MC-RR+2 mmol/L抗坏血酸(ASA)分别处理烟草悬浮细胞,研究上述各处理对烟草悬浮细胞活性氧(ROS)产生和抗氧化系统的影响。结果表明,与对照相比,MC-RR单独处理后烟草悬浮细胞中ROS、膜脂过氧化产物丙二醛(MDA)和细胞内源ASA的含量及超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化物酶(POD)的活性明显升高,还原型谷胱甘肽(GSH)的含量有一个先降后升的变化过程。在分别加入外源抗氧化剂DMSO或ASA后,细胞内ROS和MDA含量下降,ASA、GSH含量和SOD、POD酶活性基本可恢复到对照水平。以上结果说明,微囊藻毒素单独处理细胞可造成氧化胁迫,其所诱导的ROS的大量积累很有可能是其产生细胞毒害的关键因子,外源抗氧化剂ASA和DMSO可缓解MC-RR对细胞的毒害作用,对细胞起一定保护作用。 展开更多
关键词 微囊藻毒素-RR 烟草悬浮细胞 活性氧 抗氧化系统 ASA DMSO
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微囊藻毒素-RR对烟草细胞活力及营养生理的影响 被引量:3
7
作者 黄文敏 邢伟 +1 位作者 李敦海 刘永定 《中国环境科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2007年第3期382-386,共5页
采用0.1,1.0,10.0μg/mL的微囊藻毒素-RR(MC-RR)处理烟草BY-2悬浮细胞,测定了细胞活力、细胞内蛋白质含量、可溶性糖含量、硝态氮含量及总磷含量,并且检测了酸性磷酸酶(ACP)的活力变化情况.结果表明,中、高浓度毒素处理细胞2d后,细胞活... 采用0.1,1.0,10.0μg/mL的微囊藻毒素-RR(MC-RR)处理烟草BY-2悬浮细胞,测定了细胞活力、细胞内蛋白质含量、可溶性糖含量、硝态氮含量及总磷含量,并且检测了酸性磷酸酶(ACP)的活力变化情况.结果表明,中、高浓度毒素处理细胞2d后,细胞活力及蛋白质含量与对照相比均显著下降.高浓度MC-RR处理降低了胞内可溶性糖的含量,暴露2d后仅为对照的45.57%;低浓度MC-RR处理在后期增加了胞内可溶性糖含量.高浓度毒素处理细胞4d后,细胞内硝态氮含量显著低于对照;中、低浓度毒素处理细胞7d后降低了胞内硝态氮含量.3组毒素处理均降低了胞内总磷含量,到实验结束时,低、中、高浓度处理组的胞内磷含量分别为对照的74.98%、76.47%和84.00%.3组处理组ACP活力与对照相比呈现先降低后升高的趋势. 展开更多
关键词 微囊藻毒素-RR 烟草by-2悬浮细胞 细胞活力 营养生理
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逆境诱导烟草悬浮细胞内处理小体的形成 被引量:4
8
作者 莫蓓莘 叶浩 +3 位作者 欧忠华 刘丽 黄彪 朱双琳 《深圳大学学报(理工版)》 EI CAS 北大核心 2012年第1期80-84,共5页
指出处理小体(processing body,P-body)在真核细胞基因表达调节过程中,特别是在逆境条件下,能为mRNA在细胞质内转运提供储存和降解场所.研究通过农杆菌转化法成功将含有处理小体荧光标记物-脱帽酶1(decapping enzyme,DCP1)与青色荧光蛋... 指出处理小体(processing body,P-body)在真核细胞基因表达调节过程中,特别是在逆境条件下,能为mRNA在细胞质内转运提供储存和降解场所.研究通过农杆菌转化法成功将含有处理小体荧光标记物-脱帽酶1(decapping enzyme,DCP1)与青色荧光蛋白(cyan fluorescent protein,CFP)融合蛋白基因的植物表达载体转入烟草悬浮细胞.利用激光共聚焦显微镜观察到在高温和盐胁迫下,处理小体的数量和体积都有增加.通过蔗糖密度梯度离心分析逆境条件下多核糖体的变化,发现在高温和盐胁迫下,多核糖体解体,呈现翻译抑制特征. 展开更多
关键词 植物细胞学 处理小体 多核糖体 脱帽酶1 逆境胁迫 信使核糖核酸 烟草悬浮细胞-by-2 青色荧光蛋白
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烟草悬浮系培养与细胞器的分离 被引量:2
9
作者 费一楠 张钊 +2 位作者 曹聪 陈宇亮 张飞雄 《首都师范大学学报(自然科学版)》 2007年第2期68-74,共7页
通过诱导BY-2型烟草叶片愈伤组织,进一步建立烟草细胞悬浮系.酶解去壁从细胞悬浮系中获得原生质体,用含有0.5%Triton X-100的CSK缓冲液破裂细胞膜,释放出细胞器.再通过不连续的蔗糖-Percoll梯度进行速率区带离心,分离纯化出细胞核和叶绿... 通过诱导BY-2型烟草叶片愈伤组织,进一步建立烟草细胞悬浮系.酶解去壁从细胞悬浮系中获得原生质体,用含有0.5%Triton X-100的CSK缓冲液破裂细胞膜,释放出细胞器.再通过不连续的蔗糖-Percoll梯度进行速率区带离心,分离纯化出细胞核和叶绿体.通过分离、纯化细胞核的对照实验证明不同培养条件对烟草细胞悬浮系的生长和周期具有显著影响. 展开更多
关键词 by-2型烟草 愈伤组织 悬浮系 原生质体 纯化 细胞核 叶绿体 流式细胞术
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棉花纤维发育相关基因GhPRP10的克隆及其功能分析 被引量:1
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作者 石淼 李艳军 +3 位作者 刘永昌 张新宇 薛飞 孙杰 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期639-645,共7页
利用电子序列拼接结合RT-PCR技术,从12DPA(开花后天数)棉纤维中克隆到1个编码富含脯氨酸蛋白(PRPs)基因,命名为GhPRP10(登录号KP036633)。GhPRP10基因开放阅读框为684bp,编码228个氨基酸,其中脯氨酸(Pro)含量为34.6%。序列分析发现GhPR... 利用电子序列拼接结合RT-PCR技术,从12DPA(开花后天数)棉纤维中克隆到1个编码富含脯氨酸蛋白(PRPs)基因,命名为GhPRP10(登录号KP036633)。GhPRP10基因开放阅读框为684bp,编码228个氨基酸,其中脯氨酸(Pro)含量为34.6%。序列分析发现GhPRP10蛋白具有N端信号肽和富含脯氨酸区域,属于第一类PRPs。实时荧光定量PCR(RT-PCR)结果显示,GhPRP10在棉纤维组织中优势表达,在纤维发育过程中的表达量呈现先升高后降低的趋势,在18DPA纤维中表达量最高。利用Gateway技术构建植物过量表达载体,转入烟草BY-2悬浮细胞,表型观察和细胞长度测量结果显示,转GhPRP10基因细胞比野生型细胞显著增长。根据该基因的组织表达特征和转基因细胞表型分析,推测GhPRP10基因在纤维伸长和次生壁合成过程中发挥作用。 展开更多
关键词 棉花 纤维 富含脯氨酸蛋白 by-2烟草悬浮细胞
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嘧肽霉素诱导烟草BY-2悬浮细胞防卫反应的研究 被引量:2
11
作者 郭依 安梦楠 吴元华 《农药》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期266-268,289,共4页
[目的]利用烟草BY-2悬浮细胞研究抗病毒新农药2%嘧肽霉素水剂诱导植物防卫反应的机制。[方法]用不同质量浓度的嘧肽霉素处理悬浮细胞,分光光度法测定胞外H2O2产生的动态过程及RT-q PCR方法测定防卫反应基因表达。[结果]烟草BY-2悬浮细... [目的]利用烟草BY-2悬浮细胞研究抗病毒新农药2%嘧肽霉素水剂诱导植物防卫反应的机制。[方法]用不同质量浓度的嘧肽霉素处理悬浮细胞,分光光度法测定胞外H2O2产生的动态过程及RT-q PCR方法测定防卫反应基因表达。[结果]烟草BY-2悬浮细胞经嘧肽霉素处理,产生活性氧迸发,并在处理1 h后达到高峰;嘧肽霉素能诱导细胞的FLS2、MAPKKK、PR1、NPR1和HSP70的上调表达,其中HSP70的上调效果最为显著。[结论]嘧肽霉素可通过诱导植物防卫反应相关基因的表达,达到诱导植物抗病毒病的作用。 展开更多
关键词 嘧肽霉素 烟草by-2悬浮细胞 活性氧 防卫反应
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人工纳米材料增强植物耐盐性的机理研究 被引量:3
12
作者 朱立祺 陈菲然 +3 位作者 陶梦娜 刘璎琳 赵晓丽 王震宇 《环境科学研究》 CAS CSCD 北大核心 2022年第8期1759-1768,共10页
土地盐渍化问题导致土壤环境恶化和农作物减产,基于纳米材料(NMs)的纳米农业技术在增强植物耐盐性方面的潜力正备受关注.目前,关于NMs提高植物耐盐性的分子机制仍不明确,因此以烟草(Nicotiana tabacum L.)BY-2悬浮细胞为供试材料,研究... 土地盐渍化问题导致土壤环境恶化和农作物减产,基于纳米材料(NMs)的纳米农业技术在增强植物耐盐性方面的潜力正备受关注.目前,关于NMs提高植物耐盐性的分子机制仍不明确,因此以烟草(Nicotiana tabacum L.)BY-2悬浮细胞为供试材料,研究对照组(CK)、盐胁迫处理组(S)以及盐胁迫下分别暴露于纳米二氧化钛(nTiO_(2))和纳米硒(nSe)的细胞活性变化,并通过非损伤微测系统(NMT)原位实时检测Na+流速,采用液相色谱质谱联用(LC-MS/MS)技术分析NMs对盐胁迫下烟草BY-2悬浮细胞代谢组的影响.结果表明:①0.1 mg/L nTiO_(2)(处理6 h)与0.5 mg/L nSe(处理12 h)使盐胁迫下的烟草BY-2悬浮细胞的活性分别显著提高8.1%和13.6%.②0.1 mg/L nTiO_(2)(处理6 h)与0.5 mg/L nSe(处理12 h)使盐胁迫下的烟草BY-2悬浮细胞的Na+外排也分别显著增加了171.5%和99.0%.③两种NMs通过调控不同的代谢通路增强烟草BY-2悬浮细胞的耐盐能力.烟草BY-2悬浮细胞暴露于0.1 mg/L nTiO_(2)(处理6 h)和0.5 mg/L nSe(处理12 h)后分别识别出53种和73种差异代谢物,nTiO_(2)可增强多种类别代谢物〔部分氨基酸和肽、脂肪酸和共轭物、三羧酸循环(TCA cycle)有机酸、糖类和嘧啶等物质〕的合成,而nSe则主要增强氨基酸和肽、吲哚和水杨酸等物质的合成.④暴露于nTiO_(2)后,烟草BY-2悬浮细胞产生的差异代谢物中尿苷、吡哆醛、甘露糖、大麦芽碱和葫芦巴碱等代谢物含量均与Na+外排呈显著正相关;暴露于nSe后,烟草BY-2悬浮细胞产生的差异代谢物中吲哚丙烯酸、色氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸等代谢物含量均与Na+外排呈显著正相关,这些物质多参与莽草酸代谢通路,因此nSe可能通过调控莽草酸途径增强Na+外排.研究显示,0.1 mg/L nTiO_(2)与0.5 mg/L nSe分别通过不同的代谢途径增强烟草BY-2细胞的耐盐性. 展开更多
关键词 烟草by-2悬浮细胞 盐胁迫 纳米材料(NMs) 非损伤微测系统 代谢组
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Cd^(2+)胁迫诱导烟草悬浮细胞脯氨酸积累的生化途径及外源脯氨酸对Cd^(2+)胁迫下H_2O_2产生的抑制作用 被引量:8
13
作者 文锦芬 杨双龙 龚明 《植物生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期392-398,共7页
Cd^(2+)可提高烟草悬浮细胞脯氨酸的含量,顺序上调脯氨酸合成关键酶鸟氨酸转氨酶(OAT)、精氨酸酶、△~1-吡咯啉-5-羧酸合成酶(P5CS)和谷氨酸脱氢酶(GDH)的活性,降低脯氨酸降解关键酶脯氨酸脱氢酶(ProDH)的活性,表明Cd^(2+)胁迫诱导烟草... Cd^(2+)可提高烟草悬浮细胞脯氨酸的含量,顺序上调脯氨酸合成关键酶鸟氨酸转氨酶(OAT)、精氨酸酶、△~1-吡咯啉-5-羧酸合成酶(P5CS)和谷氨酸脱氢酶(GDH)的活性,降低脯氨酸降解关键酶脯氨酸脱氢酶(ProDH)的活性,表明Cd^(2+)胁迫诱导烟草细胞脯氨酸的积累是脯氨酸合成的鸟氨酸途径和谷氨酸途径顺序激活、而脯氨酸降解途径显著抑制的综合结果。此外,Cd^(2+)能导致烟草细胞H_2O_2的快速产生及H_2O_2产生相关酶(质膜NADPH氧化酶、细胞壁多胺氧化酶及共价结合与离子结合细胞壁过氧化物酶)活性升高和脂质过氧化产物丙二醛(MDA)增加,导致烟草细胞的氧化胁迫。外源脯氨酸预处理显著抑制了Cd^(2+)诱导的烟草细胞H_2O_2的产生与MDA的增加,减轻了Cd^(2+)诱导的氧化胁迫。而脯氨酸抑制Cd^(2+)诱导的H_2O_2产生可能是由于脯氨酸抑制了H_2O_2产生相关酶的活性所致。 展开更多
关键词 Cd^(2+) 烟草悬浮细胞 脯氨酸 代谢途径 过氧化氢
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Simplification of vacuole structure during plant cell death triggered by culture filtrates of Erwinia carotovora 被引量:1
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作者 Yumi Hirakawa Toshihisa Nomura +1 位作者 Seiichiro Hasezawa Takumi Higaki 《Journal of Integrative Plant Biology》 SCIE CAS CSCD 2015年第1期127-135,共9页
Vacuoles are suggested to play crucial roles in plant defense-related cell death. During programmed cell death, previous live cell imaging studies have observed vacuoles to become simpler in structure and have implica... Vacuoles are suggested to play crucial roles in plant defense-related cell death. During programmed cell death, previous live cell imaging studies have observed vacuoles to become simpler in structure and have implicated this simplification as a prelude to the vacuole's rupture and consequent lysis of the plasma membrane. Here, we examined dynamics of the vacuole in cell cycle-synchronized tobacco BY-2 (Nicotiana tabacum L. cv. Bright Yellow 2) cells during ceil death induced by application of culture filtrates of Erwinia carotovora. The filtrate induced death in about 90% of the cells by 24 h. Prior to cell death, vacuole shape simplified and endoplasmic actin filaments disassembled; however, the vacuoles did not rupture until after plasma membrane integrity was lost. Instead of facilitating rupture, the simplification of vacuole structure might play a role in the retrieval of membrane components needed for defense-related cell death. 展开更多
关键词 Actin filaments defense-related cell death Erwiniacarotovora tobacco by-2 cells VACUOLES
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Ectopic Expression of a Bacterium NhaD-type Na^+/H^+ Antiporter Leads to Increased Tolerance to Combined Salt/Alkali Stresses 被引量:6
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作者 Nai-Qin Zhong Li-Bo Han +4 位作者 Xiao-Min Wu Li-Li Wang Fang Wang Yan-He Ma Gui-Xian Xia 《Journal of Integrative Plant Biology》 SCIE CAS CSCD 2012年第6期412-421,共10页
AaNhaD, a gene isolated from the soda lake alkaliphile Alkalimonas amylolytica, encodes a Na+/H+ antiporter crucial for the bacterium's resistance to salt/alkali stresses. However, it remains unknown whether this t... AaNhaD, a gene isolated from the soda lake alkaliphile Alkalimonas amylolytica, encodes a Na+/H+ antiporter crucial for the bacterium's resistance to salt/alkali stresses. However, it remains unknown whether this type of bacterial gene may be able to increase the tolerance of flowering plants to salt/alkali stresses. To investigate the use of extremophile genetic resources in higher plants, transgenic tobacco BY-2 cells and plants harboring AaNhaDwere generated and their stress tolerance was evaluated. Ectopic expression of AaNhaD enhanced the salt tolerance of the transgenic BY-2 cells in a pH-dependent manner. Compared to wild-type controls, the transgenic cells exhibited increased Na+ concentrations and pH levels in the vacuoles. Subcellular localization analysis indicated that AaNhaD-GFP fusion proteins were primarily localized in the tonoplasts. Similar to the transgenic BY-2 cells, AaNhaD.overexpressing tobacco plants displayed enhanced stress tolerance when grown in saline-alkali soil. These results indicate that AaNhaD functions as a pH-dependent tonoplast Na+/H+ antiporter in plant cells, thus presenting a new avenue for the genetic improvement of salinity/alkalinity tolerance. 展开更多
关键词 Alkaliphiles Alkalimonas amylolytica Na+/H+ antiporter tobacco by-2 cells high salinity stress alkaline.
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