四个品种烟草内生微生物的分布特征

对4个常规优质烟草品种(K326、G-80、红花大金元、净叶黄)的种子、根、茎、叶进行了内生菌的分离计数、初步分类与拮抗筛选研究。结果表明:烟草中有大量的内生菌分布,以细菌最多,放线菌次之,真菌最少,与土壤中的分布规律一致。烟草不同器官中内生菌的分布表现为根和种子中数量相当,茎次之,叶最少的规律。不同烟草品种间的分布为:种子中是K326和红花大金元内生菌分布较多,净叶黄次之,G-80最少;苗期植株中4个品种的内生菌数没有明显差别;大田期是净叶黄烟草的内生菌数量最少。烟草中内生细菌以革兰氏阴性菌为主,而种子中内生细菌的芽胞菌数量要明显多于植株中的。通过对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌实验,从红花大金元品种中筛选到有抑菌活性的菌株5株,从净叶黄和K326中分别筛选到1株,体现出了4个品种的抗病性与拮抗菌之间的一定相关性。

云南烟草内生细菌菌群密度及分布特征

采用研磨组织稀释分离法分离烟草植株中的内生细菌,对云南省不同品种、不同种植地区、不同组织器官、不同生长期的烟草内生细菌的菌群密度进行研究.结果表明,烟株的根、茎、叶中均存在大量的内生细菌,烟草内生细菌的分布存在品种差异、生长期差异、组织部位差异.有的内生细菌为常住菌群,有的为暂居菌群.在整个生育期中,以成熟期的内生细菌的数量最多.内生细菌的数量在云烟85、KRK26、K326、红花大金元植株不同器官中的分布规律依次为：根＞叶＞茎,叶＞根＞茎,叶＞根＞茎,根＞叶＞茎.4个品种烟草生长期总带菌量平均值波动幅度为2.6 ～4.96 log cfu/g.fw.种植在不同地区的同一烟草品种,内生细菌数量不尽相同.在分离到的所有内生细菌中以Baccillus属细菌分布最广,巳鉴定出8个种,包括Bacillm pumilm,B.amyloliquefaciens,B.licheniformis,B.subtilis,B.megaterium,B.flexus,B.simplx,B.cereus.对烟草这一重要经济作物内生细菌菌群密度动态变化进行研究,可为科学认知和利用这类微生物资源奠定基础.

云南不同地区烟草内生细菌多样性特征

为了研究云南不同地区烟草内生细菌的多样性及分布特征。在全省4个不同区域采集相同烟草品种33个样品,通过分离培养烟草内生细菌、16S r DNA序列分析获得不同烟区烟草内生细菌的多样性特征。从不同地区烟草叶片中共分离得到内生细菌372株,分别归属于11个属。以Bacillus属为优势菌群,已鉴定出7个种,包括B.pumilus,B.amyloliquefaciens,B.cereus,B.subtilis,B.flexus,B.simplex,B.megaterium;B.pumilus和Pantoea agglomerans类群细菌是4个地区共同的优势菌群;香农多样性指数由大到小依次为文山、大理、昭通、玉溪;其中玉溪和大理地区样品的相似性系数最高,为0.58,玉溪和昭通地区样品的相似性系统最低,为0.31。烟草地理分布对烟草内生细菌组成具有一定的影响,烟草内生细菌的种类多样性特征在不同地区间存在差异,部分内生细菌的分布存在地域专一性。研究结果为认识烟草内生细菌的特征及挖掘利用有益内生细菌奠定了基础,并为内生细菌在其它植物中的研究提供理论依据。

云南烟草叶片内生及叶际细菌、真菌多样性研究

为了解云南烟草微生物种类及其多样性,利用常用分离培养基从云南省保山、文山、弥勒、石林、楚雄、玉溪6个烟区健康烟草叶片中分离、筛选细菌及真菌。结果表明,此次分离共得到细菌129株,16S rDNA序列分析结果显示分属于19个属,假单胞菌属(Pseudomonas)、葡萄球菌(Staphylococcus)、芽孢杆菌属(Bacillus)为优势属分别占总数量的17.1%,29.4%,16.3%。真菌130株,结果显示分属于23个属,链格孢属(Alternaria)为优势属,占总株数的36.1%。结果显示,不同地区分离微生物在种群、数量上存在差异,且不同地区分离所得微生物都存在一些特有的种属,这表明微生物分布存在地区特异性。

广西水稻内生细菌的动态分布及其对水稻纹枯病菌的拮抗作用

从广西稻区74种水稻品种中采集了222个水稻标样,分离出1903株内生细菌。经形态和生理生化测定,确定这些菌株分属于芽孢杆菌属Bacillus、鞘胺醇单孢菌属Sphingomonas、土壤杆菌属Agrobacterium、伯克霍尔德氏菌属Burkholderia、肠杆菌属Enterobacter和成团泛菌属Pantoea。其中,Bacillus和Enterobacter为主要类群,Bacillus为优势类群。水稻内生细菌的类群随不同的水稻品种和栽培地区而变化。水稻内生细菌在植株器官中的分布以根部数量最多,其次是叶鞘和叶。内生细菌的总量在水稻生育期的变化趋势是从苗期到孕穗期上升,从灌浆期到乳熟期下降。分离到的1903株内生细菌中,有412个菌株对水稻纹枯病菌Rhizoctoniasolani有拮抗作用。

烟草内生细菌种群特征分析

为探明烟草内生细菌种群特征及其与烟草的关系,采用研磨组织稀释分离法分离不同品种、不同生长期、不同器官的烟草内生细菌,以各菌群出现与否为指标,用类平均法进行系统聚类分析,对内生细菌的种类组成,分布特征进行了研究。结果表明,烟草内生细菌种类组成存在品种差异、生长期差异和组织部位差异;优势菌群随分离部位和生长时期的不同而变化。Bacillus sp.和Rhizobium sp.是4个品种烟草叶片共有的优势类群,从苗期到团棵期,内生细菌的种类在增加,B.pumilus广泛存在于成熟期烟草的根、茎、叶中,且为主要菌群。部分内生细菌具有组织偏好性,Micrococcus sp.和Staphylococcus sp.对烟草的茎部具有偏好性,B.cereus对烟草叶片具有偏好性。研究结果为烟草有益内生细菌的筛选奠定了基础,并为内生细菌在其它植物中的开发利用提供理论依据。

广西烟草内生细菌的动态分布及其对烟草疫霉的拮抗作用

从广西百色市的9个烟草品种中分离出470株内生细菌菌株,经常规细菌鉴定方法和16S rDNA序列分析,获得的菌株分别属于肠杆菌属(Enterobacter)、沙雷氏菌属(Serratia)、芽孢杆菌属(Bacillus)、土壤杆菌属(Agrobacterium)、寡养单胞菌属(Stenotro-phomnas)和假单胞菌属(Pseudomonas),其中土壤杆菌属和肠杆菌属为烟草内生细菌中的优势种群。烟草内生细菌的类群和数量随烟草种植地点、品种、器官和生育期的不同而不同。烟草内生细菌在根部数量最多,其次是茎和叶。内生细菌的总量从缓苗期到旺长期增加,之后显著下降。从470株烟草内生细菌菌株中筛选出对烟草疫霉有拮抗作用的菌株56株,其中芽孢杆菌菌株Y10的抑制效果最好,抑制率达91.48%,室内盆栽防治效果为68.72%。

生物炭不同施用量对烟草内生细菌多样性的影响

【目的】为了对施用生物炭后的烟叶细菌的种类变化进行全面而准确的调查。【方法】以烟叶为研究对象,设置4个处理:处1理为施用生物炭50 g/株(Y4.1);处理2为施用生物炭100 g/株(Y5.1);处理3为施生物炭150 g/株(Y6.1)和处理4不施用生物炭作为对照(Y1.1)。应用Illumina测序平台的Mi Seq高通量测序仪对施用生物炭后烟叶内生细菌的16S r DNA-V4区扩增子进行测序。并应用Qiime和Mothur等软件整理和统计样品序列数目和操作分类单元(OTUs)数量,分析物种的丰度和Alpha多样性。【结果】在97%的序列相似性水平上把所测得的序列划分为1177、1429、1228、1182操作分类单元(OTUs)。通过OTU丰度聚类分析表明:施用生物炭处理后样品的OTUs数低于不施用生物炭处理,说明施用生物炭能提高烟叶细菌群落丰度;施用生物炭50g/株处理后样品的OTUs数高于施用生物炭100 g/株处理,施用生物炭100 g/株处理后样品的OTUs数高于施用生物炭150 g/株处理,说明随着施炭量增加到100、150 g/株细菌群落丰度又开始减少。【结论】通过属的水平分析表明:鞘氨醇单胞菌属(Sphingomonas)在施用生物炭处理的样品中丰度比不施用生物炭处理的高,说明施用生物炭有利于增加该菌属的丰度。芽球菌属(Blastococcus)、Solirubrobacter属、Gaiella属、节细菌属(Arthrobacter)这4个属在施用生物炭50 g/株处理的样品中丰度大于不施用生物炭处理,在不施用生物炭处理的样品中丰度大于施用生物炭100、150 g/株处理,说明施用生物炭超过50 g会降低这4个菌属的丰度。

几种禾本科牧草内生细菌的分布特性

不同禾本科牧草植株内生细菌含量差异显著,杂交狼尾草闽牧六号内生细菌含量最高,达26.800×104CFU/g。具体到各个部位,禾本科牧草不同部位内生细菌含量差异也显著。通过微生物鉴定系统对内生菌进行鉴定的结果表明,64株内生细菌中与MIDI数据库比较相似性指数大于0.500,可确定其菌种名称的有50株,属于19个种,隶属于12个属。以分离到的19种内生菌为样本,以各菌株在各部位出现与否为指标,用类平均法对数据进行系统聚类分析,当λ=8.35时,可将19种内生细菌分为4个大类群。从聚类结果显示,内生菌与宿主植株和不同分离部位都存在相关性,与宿主植株的关系更密切。

烟草内生细菌多样性研究

为了揭示烟草内生细菌多样性,选择K326、云85和红花大金元3个烤烟品种进行内生细菌的分离和16S r DNA序列分析鉴定,获得不同品种烟草内生细菌的多样性特征。结果显示,27株内生细菌分别属于枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis(33%)、蕈状芽孢杆菌Bacillus mycoides(4%)、芽孢杆菌属Bacillus sp.(11%)、肠杆菌属Enterobacter sp.(4%)、寡养单胞菌Stenotrophomonas sp.(4%)、热带根瘤菌Rhizobium tropici(4%)、假单胞菌属Pseudomonas sp.(4%)、土地芽孢杆菌属Terribacillus sp.(4%),芽孢杆菌属Bacillus sp.为优势细菌类群。3个品种的Shannon index(H′)以K326最高、为2.02,其次是云85、为1.48,红花大金元最低、为1.3。

水稻内生固氮细菌的生化特性及其对烟草和玉米的侵染

对水稻内生固氮菌N1(短小芽孢杆菌,Bacillus pumilus)、N2(阴沟肠杆菌,Enterobacter cloacae)和N3(鹑鸡肠球菌,Enterococcus gallinarum)的一些生化特性及其对烟草和玉米的侵染进行了研究。采用三亲交配法将标记基因nifH-lacZ、nifHDK-lacZ和gfp分别导入到固氮菌中,用携带标记基因的固氮菌分别接种烟草云烟85和玉米吉甜6号,对感染固氮菌的烟草和玉米材料进行β-半乳糖苷酶组织化学染色和激光共聚焦扫描显微镜、透射电子显微镜和扫描电子显微镜观察。光学显微镜和电子显微镜观察结果表明在接菌的烟草和玉米部分根细胞中和细胞间隙都发现了固氮菌,在接菌的玉米茎的维管组织细胞中也发现了固氮菌,推测固氮菌从玉米根开始向上移动。接种固氮菌N3的玉米与对照相比,在鲜重上提高了18.53%。

烟草内生真菌分布特征研究

从烟草的根、茎、叶中共分离得到619株内生真菌,根据形态特征鉴定出12个属。其中链格孢属(Alternaria)和毛壳属(ChaetomiumKunze)为优势种群,分别占已分离菌株数的24.56%、18.74%。不同组织部位所分离得到的内生真菌在种群及数量上都存在差异:根中的优势属为镰孢属,占到了根中分离菌种数的28.32%;叶和茎中的优势属是链格孢属,分别占到叶和茎中分离菌种数的31.02%和28.88%;表明烟草内生真菌的分布具有一定的组织专一性。

紫苏不同组织中内生芽胞杆菌的多样性与分布特性研究

为了解紫苏Perillafrutescens内生芽胞杆菌的多样性和分布特性,采用可培养法对紫苏内生芽胞杆菌进行分离,运用16S rRNA基因序列同源性进行鉴定,采用多样性指数与系统聚类进行分析。结果表明,从紫苏的根、茎、叶中共分离到内生芽胞杆菌19株,分属于芽胞杆菌科的4个属、11个种。运用多样性分析表明,紫苏根部内生芽胞杆菌的多样性指数(1.7987)与丰富度(2.5022)均高于茎、叶部。进一步研究芽胞杆菌在植株中分布特性表明,4种内生芽胞杆菌在紫苏不同组织中同时存在,其中奇异虚构芽胞杆菌Fictibacillus barbaricus同时存在于根部和茎部,阿氏普利斯特菌Priestia aryabhattai同时存在于根部和叶部,沙福芽胞杆菌Bacillus safensis和蜡样芽胞杆菌Bacillus cereus则同时存在于叶部和茎部,而剩余的7种芽胞杆菌只存在于紫苏植物的单一组织中。

吉烟9号内生细菌的分离及多样性分析

为了解烤烟内生细菌的多样性,以吉烟9号为供试材料,分别从汪清、和龙、延吉烤烟的根、茎、叶分离得到内生细菌24株、18株、16株,依据菌落表型特征及16S rRNA序列同源性对分离的内生菌进行初步鉴定和多样性分析,结果表明,主要为变形菌门(Proteobacteria)、放线菌门(Actinobacteria)、厚壁菌门(Firmicutes),其中的芽孢杆菌属(Bacillus)是3地共同的优势菌属。Neighbor-joining聚类分析表明,3个取样地烤烟内生细菌分别划分为13、9、11个类群。通过数值分类比较9个表型特征,结果表明,汪清、和龙在7.2水平聚为5个表观群,延吉在6.3水平聚为3个表观群。为吉烟9号内生菌的进一步应用提供了一定的理论基础。

宁南霉素对烟草叶片内生细菌多样性的影响

为了明确施用宁南霉素和生防菌对烟草内生菌群落的影响,采用宁南霉素和烟草内生解淀粉芽孢杆菌YN201732(Y32)不同先后喷施组合,提取处理后不同时间段烟草叶片,运用高通量测序技术测定内生细菌16S rDNA序列,分析菌群多样性。结果表明,仅喷施Y32发酵液(10^(7) cfu/mL)的叶片内细菌物种多样性高于其他处理。先喷施Y32发酵液,24 h后再喷施宁南霉素的叶片内细菌物种丰富度高于先喷施宁南霉素,24 h后再喷施Y32发酵液的处理。所有样品中优势细菌属均为泛菌属、沙雷氏菌属、芽孢杆菌属和假单孢菌属,它们的相对丰度之和大于80%。Y32发酵液能有效提高烟草叶片新陈代谢等生命活动,加快生命进程。宁南霉素能降低烟草内生细菌物种多样性,而烟草内生细菌Y32能够提高烟草叶片内生细菌物种多样性,这一结果对利用内生菌开展生物防治具有重要指导意义。

内蒙古地区传统制作奶豆腐和乌日莫中乳酸菌多样性及分布特征

【背景】传统制作奶豆腐和酸性奶油(乌日莫)是内蒙古农牧地区最喜爱的食品,蕴含着十分丰富的乳酸菌资源,亟待开发利用。【目的】通过解析内蒙古农牧地区传统自制奶豆腐和乌日莫样品中乳酸菌多样性及分布特征,为优良菌株选育与利用提供资源和理论基础。【方法】采用稀释涂布法分离纯化乳酸菌,测定菌株16S rRNA基因序列鉴定种属关系,阐明乳酸菌系统发育、遗传分化及菌群结构。【结果】传统自制样品中共分离得到乳酸菌81株,主要归属于乳酸片球菌(Pediococcus acidilactici)、戊糖片球菌(Pediococcus pentosaceus)、短乳杆菌(Lactobacillus brevis)、瑞士乳杆菌(Lactobacillus helveticus)、副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)、食二酸乳杆菌(Lactobacillus diolivorans)、奥塔基乳杆菌(Lactobacillus otakiensis)、植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)、开菲尔乳杆菌(Lactobacillus kefir)、乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)、粪肠球菌(Enterococcus faecalis)、屎肠球菌(Enterococcus faecium)和坚忍肠球菌(Enterococcus durans)这13个种,其中屎肠球菌和乳酸乳球菌分别为奶豆腐和乌日莫的优势种。乳酸菌的菌群结构单一,核苷酸多态性(π)较低,遗传距离(Dxy)较远,基因交流指数(Nm)较低。【结论】奶豆腐和乌日莫中乳酸菌生物多样性较高,菌种之间的亲缘关系与地理分布呈非相关性,在进化历史上发生基因重组和基因交流的频率较低,表现出较强的遗传稳定性。

烟草可培养内生细菌的分离及多样性分析

采用稀释平板法,从健康烟草的根、茎、叶组织中分离到267株内生细菌。利用细菌菌落表征性状和16S rRNA序列对这些分离物进行了多样性分析。通过数值分析比较了8个菌落形态表征性状,以类平均连锁聚类法的方式进行聚类分析,在2.15的水平上可分成5个聚类群和56个亚群。16S rDNA序列系统发育分析表明267株分离物可分为21个类群。研究表明同一菌落形态类型的菌株在系统发育树中不一定聚为一类,菌落形态分类与分子生物学方法分类结果不完全一致。经克隆测序分析表明,这267株分离物分别与GenBank中6类细菌中的21个已知种相似性达到98%99%。其中芽孢杆菌属(Bacillus)细菌是烟草可培养内生细菌的优势种群。

中华补血草内生与根际具ACC脱氨酶活性细菌的筛选及其生物多样性

【目的】获得江苏沿海滩涂盐生药用植物中华补血草内生及根际具有1-氨基环丙烷-1-羧酸(ACC)脱氨酶活性的细菌,研究其遗传多样性和潜在促生活性。【方法】从中华补血草和根际土壤分离筛选具有ACC脱氨酶活性的菌株,对其ACC脱氨酶活性定量检测,通过16S r RNA基因序列分析确定菌株系统发育地位。同时研究其固氮、溶磷、产植物生长素吲哚乙酸(IAA)及耐盐能力。【结果】分离筛选获得18株具有ACC脱氨酶活性的内生与根际细菌,定量检测发现其中有13株菌的ACC脱氨酶含量在20 nmolα-KA/(mg Pr·h)以上,有11株菌可以固氮,7株菌能够解磷,9株菌产生IAA。菌株的Na Cl盐耐受范围多数在0–13%之间。16S r RNA基因测序表明,活性菌株分属于7个属,多样性丰富,节杆菌属(Arthrobacter)为优势类群。其中菌株KLBMP 5180为节杆菌属的潜在新种。【结论】江苏沿海滩涂盐生药用植物中华补血草共生环境中具有丰富多样的具ACC脱氨酶活性的菌株,并存在潜在新物种资源,具有进一步研究价值。