部分烟草核心种质RAPD分析

本研究对24个不同类型烟草核心种质进行了RAPD标记。通过43个RAPD引物PCR扩增的214个分子量不同的DNA片段,标记出24个烟草核心种质的指纹图谱,表现了高度的遗传多样性。通过聚类分析,将24个种质分为6大聚类群,类群Ⅰ包含11种质,其中烤烟5个,晒烟3个,白肋烟2个,雪茄烟1个;类群Ⅱ包含9个种质,其中烤烟2个,晒烟2个,白肋烟2个,香料烟2个,马里兰烟1个;类群Ⅲ、Ⅴ,分别包含晒烟、黄花烟各1个;Ⅳ、Ⅵ为2个野生种。各类群遗传差异由大到小顺序为Ⅵ>Ⅴ>Ⅳ>Ⅲ>Ⅱ>Ⅰ。种质间的遗传差异并不完全取决于栽培类型间的差异,而与种质间演化关系有关,野生种与栽培种间存在较大的遗传差异。

烤烟品种资源的RAPD分析

从 15 6个随机引物中筛选出 30个引物 ,对来自国内外的 31个烤烟品种进行了遗传多样性和亲缘关系的RAPD分析。在检测的 2 46个位点中 ,12 7个位点为多态位点 (5 2 % )。聚类分析表明 ,不同烤烟品种之间存在明显差异 ,31个品种基本上可分为 4大类 ,品种最多的第一大类 (19个 )主要由来自美国的Orinoco烤烟选育而成 ,反映了我国现在推广的烤烟品种遗传基础比较狭窄。研究结果表明 ,RAPD技术可用于烤烟品种的鉴别和纯度测定。研究为烤烟杂种育种中亲本的选配提供了一定的理论依据。

烟草RAPD反应体系的建立与优化研究

以烤烟品种为材料,研究了烟草RAPD分析过程中的影响因素,包括模板浓度、Mg2+、dNTP、引物、Taq酶、循环次数、退火温度等,建立了适于烟草RAPD分析的PCR反应体系:即在25μl反应体系中,模板用量为40ng;引物浓度为0.4μM;Mg2+浓度为2.5mM;dNTP浓度为0.2mM;TaqDNA聚合酶用量为1U。扩增程序为94℃预变性5min;然后94℃变性1min,38℃复性1min,72℃延伸1.5min,39个循环;最后72℃延伸5min。

烟草RAPD分析影响因子初探和优化程序

以烤烟品种Hicks和SpeightG 2 8为材料 ,针对烟草RAPD分析中PCR过程的Taq酶浓度、Mg2 +浓度、退火温度、循环数、Primer浓度、dNTP浓度等因素进行了研究。结果表明 ,体系中含 0 .8UTaq酶 ,4 0mmol/LMgCl2 ,10 μmol/L引物 ,3.0mmol/LdNTP ,循环数为 4 0 ,退火温度 36℃效果较好。从而确立适合烤烟RAPD分析的PCR程序主要条件 。

烟草品种RAPD分子标记多态性与品种鉴定

用235个引物对来源于中国，美国等国的23个烤烟和地方晒晾烟品种基因组进行了RAPD分子标记分析。结果表明：235个不同的随机引物中有25个（占10．64％）可以扩增出至少在两个品种间表现多态性的产物，利用其中16个引物扩增出128条带，其中46条品种间具有多态性。建议将RAPD技术应用于烟草品种鉴定。

烟草RAPD反应体系优化及品种多态性标记研究

利用鲜烟叶材料对RAPD反应体系进行了优化,建立了一个适合烟草的比较稳定的RAPD反应体系,并对影响RAPD反应的主要因素进行了探讨。利用该稳定体系,对具有两对相对性状差异的两个烤烟品种进行了多态性标记研究熏从500个引物中筛选到4个有多态性的引物,这4个引物扩出的多态性片段可作为鉴定两个品种的分子标记。初步分析认为,两个品种的多态性标记可能与香气性状和抗病性状连锁。

基于RAPD分子标记的烟草青枯病菌特异引物筛选及效果评价

为建立烟田土壤和烟株烟草青枯病菌的快速诊断方法,本研究采用RAPD方法筛选获得了6对可用于烟草青枯病菌PCR检测的特异性引物。经对6种细菌(烟草青枯病菌、多粘芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、节杆菌、荧光假单胞菌、野火病菌)和2个烟草品种(中烟100和云烟87)的检测验证,6对引物均具有良好的灵敏度、特异性和可靠性。对青枯菌菌液DNA的检测灵敏度可达0.42 pg/μL,对土壤青枯菌的最低检出率为6×10^(2) cfu/g。应用特异引物A1T和S13T可对接种土壤和烟株样品的研磨悬浮液直接进行PCR快速检测,显著地缩短了检测时间,对烟叶产区烟草青枯病的预测预报及防控具有重要意义。

烤烟品种的RAPD分析

利用RAPD标记研究了 2 9个烤烟品种的分子指纹和遗传关系。 10 0个随机引物经 10个品种筛选 ,选出 18个随机引物对 2 9个品种基因组DNA进行扩增 ,得到了 2 9个烤烟品种的分子指纹图谱 ,参照这些图谱 ,可对不同烤烟品种进行真实性鉴定。以扩增到的 79条多态性DNA片段为基础计算 2 9个品种间遗传相似系数 ,利用UPGMA法作聚类图 ,可将参试品种分为 3个类群。云南省主栽品种K3 2 6与近年选育的品种V2、云烟 85、云烟 3 17等被归为一类 ,遗传基础过于狭窄 ,建议选用一些遗传关系较远的品种进行亲本选配、品种布局 ;北方烟区主栽品种NC89。

烟草RAPD双引物与单引物PCR扩增多态性效率的比较分析

以两个亲缘关系较远的烟草(Nicotiana tabacum)品种台烟7号和白肋21为材料(GS=0.58),研究了单引物扩增和双引物聚合扩增对RAPD-PCR分子标记多态性的影响。结果显示:双引物反应能够比单引物反应扩增出更多的多态性片段,双引物在白肋21和台烟7号中扩增出的多态性片段总数是单引物反应扩增出的多态性片段总数的6.6倍。因此,双引物RAPD的运用有助于提高烟草多态性分子标记的有效性。

烟草青枯病抗性基因的遗传分析及RAPD标记

选用高感青枯病品种“红花大金元”与高抗青枯病品种“Ti448A”配制杂交组合,采用温室苗期叶片人工注射法接种鉴定两亲本及其杂交后代F1、F2、BC1P1代的青枯病抗性表现,结果表明抗病亲本材料Ti448A的抗病性由一对显性基因控制。依据混合群体分组分析法(BSA)建立抗青枯病基因池和感青枯病基因池,通过RAPD试验,从近200个随机引物中筛选出一个在两池间具有多态性的引物S503,用双亲、F1、F2单株DNA进行RAPD试验证明了该引物扩增出的特异性片段S503-750是一个与抗青枯病基因连锁的RAPD标记,利用JOINMAP(version1.4)软件计算得此标记与抗青枯病基因间的重组率为5.984%,连锁距离为6.261cM。

云南烟草赤星病菌遗传多样性的RAPD分析

运用RAPD分子标记技术分析了来自云南各地24个烟草赤星病菌株的遗传多样性。结果表明,12个随机引物共扩增出了145条DNA条带,所扩增出的DNA条带均为多态带,表明云南烟草赤星病菌存在丰富的遗传多样性。不同地点赤星病菌的遗传结构之间都有一定的差异,生态环境相似性越大的地点,赤星病菌的遗传结构相似程度就越高。赤星病菌的遗传结构也随寄主品种(基因型)的不同而表现出一定的差异,寄主品种的遗传背景影响着赤星病菌的遗传结构。

晒烟RAPD反应体系的优化

以晒烟苗期幼叶为试材,通过设置不同的模版DNA、引物、dNTP、Mg2+及Taq DNA聚合酶的浓度梯度,优化RAPD的反应条件,建立1个适合晒烟的比较稳定的RAPD反应体系。结果表明,适合晒烟RAPD的反应体系是在25μL反应体系中,含模板40ng;引物UBC-388 1.5μL;Mg2+1.6mM;dNTP 0.2mM;Taq酶1U。

烟田杂草小蓟锈病菌遗传多态性的RAPD分析

从50条Random Amplified Polymorphic DNAs(RAPD)随机引物中选取多态扩增性强的15条引物,对蓟柄锈菌(Puccinia obtegens)的22个样品和3个大蓟上采集的锈病菌样品基因组DNA进行扩增,并构建指纹图谱。25个样品包括来自不同地区的9个夏孢子样品,不同孢子类型的6个样品,同一地点不同采集时间的7个夏孢子样品和3个大蓟上采集的样品。结果显示,扩增共产生DNA标记谱带204条,多态性谱带数为160条,多态检测率为78.4%。利用SAS统计分析软件对样品的PCR结果进行了UPGMA(非加权类平均法)聚类分析。结果显示,供试3组样品可分别划分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ3个聚类组。研究结果证明,供试样品具有丰富的遗传多态性,且样品间的亲缘关系与来源地、孢子类型和采集时间有一定的相关性。

烟草胞质雄性不育系与保持系线粒体DNA的RAPD分析

用124个10碱基随机引物对烟草2对雄性不育系及其保持系线粒体DNA的RAPD分析表明,不育系与保持系间有112个引物未扩增出多态性片段,占引物总数的92.56%,这反映了不育系和保持系线粒体的同源性。同时,在不育系与保持系的线粒体基因组间也发现了明显的差异,这些差异片段与雄性不育的关系还需进一步研究。

RAPD标记在烟草研究中的应用

随机扩增多态 ＤＮＡ(Ｒａｎｄｏｍｌｙ Ａｍｐｌｉｆｉｅｄ Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ ＤＮＡｓ,ＲＡＰＤ)分子标记技术的诞生,为分子生物学技术在农业研究中的应用注入了新的活力,并为传统农业研究向分子水平发展提供了捷径。本文重点综述了ＲＡＰＤ分子标记技术在烟草群体分离分析和鉴定、标记辅助选择、遗传变异的识别、烤烟品种分子指纹分析、黑胚病菌全基因组ＤＮＡ多态性标记、根结线虫种类鉴定、赤星病菌的分类地位等方面的研究进展,以及这些领域的研究发展和应用前景。

复烤烟叶RAPD反应体系优化研究

以复烤烟叶为实验材料,对烟草RAPD分析过程中的主要影响因素进行研究,获得了清晰的DNA条带.确立了最适RAPD反应体系,即20μL反应体系中,模板40 ng,Mg^(2+) 1.5 mM,dNTP0.13 mM,引物0.30μM,Taq DNA聚合酶1.25 U;37℃退火30 s.该反应体系为烟叶品种的合理利用及分子标记研究提供了可靠的理论依据和技术支持.

利用RAPD和ISSR标记分析烤烟品种间遗传关系

利用RAPD和ISSR标记对22份烤烟（Nicotiana tabacum L．）品种进行了遗传关系研究。在RAPD分析中筛选到13个引物，共扩增出167条带，其中多态性带50条，多态性比率为29．9％；在ISSR分析中筛选出7个引物，共扩增出96条带，其中多态性带44条，多态性比率为45．8％。两种标记相结合估算出的品种间遗传相似系数在0．881-0．979之间，平均为0．933。单独基于RAPD标记和ISSR标记的聚类结果有一定差异；两种标记结合起来的聚类分析结果与系谱信息吻合程度更高。定向选择可能对烤烟品种间遗传关系有较大影响；国外引进品种与国内育成品种并未完全分开，表明分子水平的遗传关系和地理来源间缺乏必然联系。

48个烟草品种遗传多样性的RAPD分析

利用RAPD分子标记技术对48个烟草品种进行遗传多样性研究。从200个10bp的随机引物用RAPD方法筛选获得28个多态性引物,然后对48份烟草种质资源的基因组DNA进行扩增,共获得184条DNA扩增片断带。其中多态性带86条,平均多态检出率为46.7%。48份材料的遗传距离为0～7.81,采用UPGMA法聚类分析,可将其分为两大类群,即黄花烟草群与普通烟草群,后者又可分为4组。

用RAPD技术鉴定烤烟抗赤星病基因连锁标记

用49个RAPD引物对烤烟13个抗赤星病品种和15个感赤星病品种基因组DNA进行RAPD分析,找到了一个和烤烟抗赤星病表型密切相关的DNA片段,此片段长760bp,命名为S220-760。通过对长勃黄和净叶黄的RAPD分析表明,S220-760为13个抗病品种所共有和15个感病品种没有。因此,S220-760可作为烤烟抗赤星病基因紧密连锁的RAPD标记。这为下一步钓取烤烟赤星病基因的工作打下了基础。

部分烤烟种质遗传多样性与亲缘关系的RAPD分析

以22份烤烟材料为供试材料,应用RAPD(随即扩增多态性DNA)分子标记技术研究22份烤烟材料之间遗传多样性和亲缘关系。结果表明,第一等级划分(D=0.30)可以将22份材料划分为三大类群。第二等级划分(D=0.23)可以将22份材料划分为六个小类群,其中,一个是由云烟系列与亲本是特字401系选的品种及其杂交后代组成的类群;一个是由多数美国来源品种组成的类群;一个由9804、岩烟97和Coker176三个品种组成的类群;一个由CF965和K07两个品种组成的类群;红花大金元和C2分别独立成类。说明分子标记多态性基本上反映了品种间的遗传变异。本结果为烟草品种改良和杂交种选配,提高育种效率提供了理论依据。