烟草辣椒脉斑驳病毒病的发生与防治技术研究进展

辣椒叶脉斑驳病毒(chilli veinal mottle virus,ChiVMV)为严重危害茄科植物的一种(+)ssRNA病毒,可侵染辣椒、番茄、茄子、烟草等。该病毒具有较强的致病性和破坏性,侵染烟草后会诱发系统性叶片枯斑坏死,导致烟草叶片自下而上干枯脱落甚至整株死亡。本文总结了烟草辣椒脉斑驳病毒病的传播方式和感染特征,并从农业防治、物理防治、化学防治和生物防治等方面综述了烟草辣椒脉斑驳病毒病的防治措施研究进展,以期为有效控制烟草辣椒脉斑驳病毒病提供参考。

云南烟草丛枝症病害研究 V传染途径

在隔离环境中，按植物病毒学的标准程序，测试云南烟草丛枝症病害的传染途径，结果表明：云南烟草丛枝症病害具有广泛的传染途径，可以通过机械传染（嫁接、摩擦）和介体传染（菟丝子、蚜虫、烟盲蝽、叶蝉）等方式传播．

云南烟草丛枝症病害研究 VI综合防治技术的研究与示范推广

１９９４至１９９８年，在云南烟草丛枝症病害的重病区进行药剂治疗和治虫防病等研究，并进行大面积综合防治技术示范（３１１５ｈｍ２）和推广工作（６４０３２ｈｍ２），结果表明：抗生素类药剂和抗病毒制剂无治疗效果，单纯治虫防病的效果也不理想，采用以网罩隔离育苗培育无毒苗、药剂控制传媒昆虫、淘汰和更换病苗、保健栽培为技术核心的综合防治措施，能够有效地控制病害的发生和流行，防治效果在９５％以上．

云南烟草丛枝症病害研究I田间发病规律

系统地调查云南烟草丛枝症病害的田间自然发病情况和介体发生情况，并实验测定烟草品种的抗病性，结果表明：烟草丛枝症病害在病区常年均有发生，最早发病时间在４月下旬，保山市１９９４，１９９５和１９９７年属一般年份，１９９３，１９９６和１９９８年属流行年份，导致病害流行的主要因素是苗期和移栽初期的两次蚜虫迁飞期高峰，以网罩隔离培育无毒烟苗、避开蚜虫迁飞高峰期移栽并同时施药是最有效的防治方法．目前生产上审定推广的品种全为高感品种，测定３１个烤烟和１４５个晒晾烟品种未发现抗病品种．

云南烟草丛枝症病害研究 II细胞的超微病变

超薄切片观察云南烟草丛枝症病害的病叶组织，并抽提试验材料的总核酸电泳检测，结果表明：病组织中检测到与烟草丛枝症病害相关的低分子量ＲＮＡ，切片中未观察到病毒粒子，薄壁细胞中发现细胞膜系统的畸变：质膜体（ｐｌａｍａｌｅｍｍａｓｏｍｅ）和双层膜泡囊（ｄｏｕｂｌｅｍｅｍｂｒａｎｏｕｓｖｅｓｉｃｌｅｓ）．质膜体由细胞质膜或液泡膜伸入空泡形成，直径约１０００～２０００ｎｍ，结构类似于类病毒侵染寄主形成的旁壁体．双层膜泡囊是含纤维状物内含物的泡囊，直径约１００～２００ｎｍ，结构类似于某些病毒侵染寄主形成的细胞质泡囊（ｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃｖｅｓｉｃｌｅｓ）和植原体（ｐｈｙｔｏｐｌａｓｍａｓ），但因其广泛分布于寄主细胞中，不能认为是植原体．文献显示这些病变是类病毒和某些病毒侵染的特征，初步认为云南烟草丛枝症病害可能是病毒病害，发病早期细胞内出现小分子核酸侵染的细胞病变特征，此与莫笑晗等发现病株体内含有大量低分子量ＲＮＡ可能有密切关系．

云南烟草丛枝症病害研究 Ⅺ 病原研究:类病毒问题

感染云南烟草丛枝症病害的病苗的细胞切片中观察到类似于旁壁体的质膜体，旁壁体是类病毒侵染植物形成的特征病变结构，但多次双向电泳实验均未检测到类病毒分子，质膜体的形成可能和莫笑晗等发现的与云南烟草丛枝症病害相关的稳定ＲＮＡ有密切关系，但线性开环结构和失活温度说明其不具有类病毒核酸特征．

白背飞虱传播云南烟草丛枝症研究

我们在烟草丛枝症病害 (Tobaccowitches’broomsymptomdiseases )的媒介昆虫研究中首次发现白背飞虱(SogatellafurciferaHorvath)成虫 (长翅型 )能传播该病 ,并对其传毒特性进行研究发现 :3头带毒白背飞虱成虫便可传毒 ,每烟株上超过 15头带毒白背飞虱传毒率达最大 ,最短获毒时间为 5min ,当获毒时间为 2 4h传毒率达最大 ,当接种时间达 48h传毒率达最大。由于云南省多数烟区烟田与稻田混杂 ,在烟田中存在相当数量的白背飞虱。因此 ,白背飞虱是烟草丛枝症病害的重要传毒介体之一。

云南烟草丛枝症病害研究 I病害的症状学及其病程

以云南烟草丛枝症病株为毒源，通过蚜虫传染接种大十字期、猫耳朵期、摆盘期、团棵期、旺长期和现蕾期的烟株，观察症状反应并检测与云南烟草丛枝症病害相关的低分子量ＲＮＡ．研究表明：云南烟草丛枝症病害的病程可分为４个阶段：潜育期、过敏反应期、缩顶期和丛枝期，烟株从感染到表现丛枝要经过约１个月；蚜虫接种后约１周，在蚜虫口针刺吸部位开始出现褪绿斑，继而产生强烈的过敏反应，即从褪绿斑中心开始坏死出现蚀点斑，叶片上布满坏死斑纹，有典型的环纹和蚀纹，严重的烟株叶片破裂，细脉坏死；随后进入缩顶期，烟株生长缓慢，叶间距明显缩短，顶部几乎成为一个平面，叶色稍黄，大十字期和猫耳朵期接种烟株缩顶后生长极其缓慢，萎缩成为僵苗，不表现丛枝症状，也不会开花结实；感染约４周后，摆盘期、团棵期、旺长期和现蕾期接种的烟株开始腋芽丛生，生长速度加快，几天后便表现为典型的黄化丛枝症状，叶黄化且变圆，能够开花结实．其症状和文献记载的所有烟草丛枝、丛顶和丛蔟类病害有明显区别，初步认为是１种未见记载的新病害，建议称之为“烟草簇矮病（Ｔｏｂａｃｏｂｕｓｈｙｄｗａｒｆ）”．文中附病程症状图２版．

云南烟草丛枝症病害研究 ⅩⅢ 大理州烤烟丛枝症病害的发生与防治

烟草丛枝症病害表现为黄化丛枝症， 导致烤烟经济性状和产量产值明显下降． 未筛选到治疗病害的有效药剂， “治虫防病”措施的平均防效为６１９ ％ ， “以治虫防病为主体， 综合防治烟草丛枝症病害技术体系” 的平均防效为８６９ ％ ， ２０ ｈｍ２ 中心示范样板田的防效为７７２ ％ ， 每ｈｍ２ 挽回产量８７３ ｋｇ 、挽回产值１１ ３１８８５ 元， 确认综合防治技术能有效而可靠地控制烟草丛枝症病害的危害．

云南烟草丛枝症病害研究：Ⅻ病原研究：病毒问题

云南烟草丛枝症病害病程表现为潜伏、过敏反应、缩顶、丛枝等４个阶段，以过敏反应导致叶片严重坏死和枯死为前期特征，以腋芽丛生而表现为黄化丛枝症为后期特征，苗期感染形成僵苗症，大田期感染表现丛枝症；汁液摩擦接种１１科３２种植物发现其只侵染烟属植物，通过机械传染（嫁接、汁液）和介体传染（菟丝子、蚜虫、烟盲蝽、叶蝉）等方式传播，该病害与文献记载的烟草丛枝、丛顶和丛蔟类病害有明显区别，可能是未见记载的病害．在云南烟草丛枝症病株的老叶和带毒蚜虫中抽提到直径约２２～２４ｎｍ的球状病毒，回接烟草发病，病株检测到和云南烟草丛枝症病害相关的低分子量ＲＮＡ，说明该病毒和云南烟草丛枝症病害有密切的关系，且与ＳＢＭＶ，ＶＴＭＶ，ＴＲＳＶ，ＡｒＭＶ，ＣａｒＭＶ，ＣＭＶ，ＢＣＭＶ，ＴＮＶ等８种病毒无血清学关系，综合各项研究和文献检索结果，作者推测该病毒可能是未见记载的病毒，建议称为“烟草簇矮病毒（Ｔｏｂａｃｏｂｕｓｈｙｄｗａｒｆｖｉｒｕｓ）”．

云南烟草丛枝症病害研究 Ⅶ 激素的变化

采用植物激素ＥＬＩＳＡ测定试剂盒，对比测定了烟草感染丛枝症的病株与健株体内细胞分裂素（ｉＰＡ和ＺＲ）与生长素（ＩＡＡ）含量的变化．结果表明：生长素含量在整个发病期间健株都较高于病株，细胞分裂素含量在发病初期明显高于健株，随后呈下降趋势并趋于稳定，Ｃ／Ａ值在病程中相对处于较高水平．

云南烟草丛枝症病害研究：Ⅹ病原研究：植原体问题

云南烟草丛枝症病害四环素治疗无效，可经汁液摩擦和蚜虫传染，病程表现为潜伏期、过敏反应期、缩顶期和丛枝期等４个阶段，细胞内产生质膜体和细胞质泡囊等膜系统畸形病变，病株总核酸中存在特殊的超稳定低分子量ＲＮＡ，ＮｅｓｔｅｄＰＣＲ在病株总核酸中（引物：Ｒ１６ｍＲ１／Ｒ１６ｍＦ２，Ｒ１６Ｒ２／Ｒ１６Ｆ２）未检测到植原体１６ｓＲＮＡ基因．说明云南烟草丛枝症病害和烟草丛枝病是不同的病害，病原不是植原体，该病表现出病毒侵染的特征，可能由病毒或类似于病毒的病原引起．依据病害的症状和侵染特征，建议将“云南烟草丛枝症病害”称呼为“烟草簇矮病（Ｔｏｂａｃｃｏｂｕｓｈｙｄｗａｒｆ）”．

云南烟草丛枝症病害研究 IV建立标准毒株

以蚜虫传染发生云南烟草丛枝症病害的烟株为材料进行组织培养，连续培育３代，以第３代组培烟苗为毒源经蚜虫传染健康烟株，提取毒源和各实验烟株的总核酸进行琼脂糖凝胶电泳．结果表明：第３代组培烟苗为毒源经蚜虫传染的烟株发病表现丛枝症，并检测到与云南烟草丛枝症病害相关的低分子量ＲＮＡ．说明与云南烟草丛枝症病害相关的病原能在寄主离体培养组织中长期保存，成功建立云南烟草丛枝症病害的标准毒株．

云南烟草丛枝症病害研究 Ⅷ 验证与烟草丛枝症病害相关的稳定RNA

来自云南省２２个县市的烟草丛枝症标本均检测到与云南烟草丛枝症病害相关的稳定ＲＮＡ，大小相当于８００ｂｐ左右的ＤＮＡ；病株的根、茎、叶、花和枯叶中含有此ＲＮＡ，种子中未检测到此ＲＮＡ；此ＲＮＡ的最大吸收峰为２６９ｎｍ；能被蛇毒磷酸二酯酶Ｉ消化，不具有类病毒结构特征，推测可能是病毒的基因组分；支持莫笑晗等对此ＲＮＡ的结构推测，即可能是有广泛内部配对、具有类似发叉结构的线性长度为１６１ｋｂ的单链ＲＮＡ．与云南烟草丛枝症病害相关的低分子量ＲＮＡ目前发现的超稳定ＲＮＡ．

云南烟草丛枝症病害研究 Ⅸ 追踪致病因子

云南烟草丛枝症病害病株的粗汁液、ＰＥＧ沉淀物、粗提纯物、酚处理物、总核酸均具有致病性．

安徽省烟草主要病害的发生及防治对策

介绍了安徽省烟草种植区发生较重的烟草黑胫病、烟草青枯病、烟草赤星病、烟草病毒病、烟草白粉病等的危害症状、发生规律,并从农业防治、物理防治和化学防治等方面总结了几种病害的综合防治方法。

云南烟草丛枝症病害的超微细胞病变研究

超薄切片观察云南烟草丛枝症病害的病叶组织 ,并抽提试验材料的总核酸电泳检测。病组织中检测到与烟草丛枝症病害相关的低分子量RNA ,切片中未观察到病毒粒子和植原体等病原 ,薄壁细胞中发现细胞膜系统的畸变 :质膜体和细胞质泡囊 ,质膜体 (1 0 0 0～ 2 0 0 0nm)结构类似于病毒形成的旁壁体 ,细胞质泡囊(1 0 0～ 2 0 0nm)是含纤维状物的双膜的囊。运用不同盐浓度介质的RNase处理病变细胞组织 ,发现高盐介质的Rnase (2XSSX)不能消解小囊泡中的纤维状物 ,而低盐介质的Rnase (0 0 1XSSC)可以消解小囊泡中的纤维状物。文献显示这些病变是类病毒和某些病毒侵染的特征 ,初步认为这是云南烟草丛枝症病害发病早期细胞内出现小分子核酸侵染的细胞病变特征。

云南烟草丛枝症病害研究 ⅩⅤ 白肋烟品种的抗性测定

采用人工接虫方法， 对２１５ 个白肋烟品种进行了抗烟草丛枝症病害的抗性测定， 有７个品种表现较好的抗性， １１ 个品种表现出中抗， ３８ 个品种表现出中感， １５９ 个表现出感高感．

云南烟草丛枝症病害研究 ⅩⅥ 网罩隔离培育无毒烟苗防治病害

云南烟草丛枝症病害是经烟蚜和烟盲蝽传染的病毒病， 在 “治虫防病”为主的防治技术的基础上， 本文研究网罩隔离技术培养无毒烟苗应用于大田控制病害的方法， 并进行一定面积的技术示范工作， 结果表明： 网罩隔离育苗在田间成功地培育出无毒烟苗， 病苗率为０２３ ％ ～３６ ％ ， 较对照下降约７５ ％ ～９５ ％ ， 移栽后结合优质烟栽培技术， 封顶时烤烟的田间发病率为２ ～５ ％ ， 说明以无毒苗应用技术为核心、辅之介体控制和病苗拔除等技术的综合防治体系能够有效和稳定地控制烟草丛枝症病害的危害．

烟盲蝽田间种群动态及不同龄期与病毒病传播的关系

本实验研究田间烟盲蝽的种群数量动态.表明:田间烟盲蝽数量存在年度间差异,单株虫口密度与烟草丛枝症病发生率呈正相关.不同龄期烟盲蝽传毒测定结果表明,在1～12h内,烟盲蝽取食时间增加其传毒率增强,在相同时间内若虫的传毒率高于成虫,4龄若虫传毒能力最强,获毒6h就可使80%的烟株发病;3龄若虫传毒能力强于2龄和5龄,1龄若虫传毒能力最弱.烟盲蝽为非持久性传毒,其带毒时间为5～8d,3龄若虫带毒持续时间最长.以上结果说明,虽然烟盲蝽在田间发生的数量比较低,但它的传毒能力强,因此对于烟盲蝽的防治应引起重视.