飞龙掌血水提物对正常猫心功、血液动力学的影响

观察飞龙掌血（ Ｔａｄｄａｌｉａ ａｓｉａｔｉｃａ Ｌａｍ）水提物（飞龙一号， Ｆ０１）对正常动物心脏功能和血液动力学的影响。方法：正常家猫麻醉后开胸，在人工呼吸下观测用药前后动物左心室内压、左室舒张末期压、心室内压变化速率、动脉血压、心输出量和心率等各项参数的变化。结果：两种剂量（７３．５、 １２７ｍｇ／ｋｇ）的 Ｆ０１静脉注射后，显著降低 ＬＶＰ、ＴＰＶＲ、ＳＢＰ、ＤＢＰ、ＭＢＰ、ＬＶＷＩ、ＴＴＩ和 ｄｐ／ｄｔ_(ｍａｘ)（Ｐ＜０．０５或 Ｐ＜０．０１）；ＴＦＩ×ＨＲ、－ｄｐ／ｄｔ_(ｍａｘ)、ＣＯ、ＣＩ和 ＳＩ在使用 Ｆ０１ １２７ ｍｇ／ｋｇ后有显著性降低（Ｐ＜０．０５或Ｐ＜０．０１），但在使用小剂量Ｆ０１（７３．５ｍｇ／ｋｇ）后变化不显著（Ｐ＞０．０５）；ｔ－ｄｐ／ｄｔ_(ｍａｘ)和Ｖｃｅ－ＣＰＩＰ在用药后稍有下降（Ｐ＞０．０５）；ＬＶＥＤＰ和ＨＲ几乎无变化。结论：Ｆ０１除扩张外周血管降低心脏的后负荷外，对心脏有明显抑制作用，从而显著减少心肌作功和耗氧，可能是其抗心肌缺血的另一作用机制。

飞龙掌血提取物抑菌作用初步研究

选择蒸馏水、无水乙醇、乙酸乙酯、石油醚4种提取剂,采用冷浸、加热回流两种方法萃取飞龙掌血,比较提取物对枯草杆菌、痢疾杆菌、啤酒酵母菌的抑菌效果。结果表明,冷浸72 h和加热回流5 h的飞龙掌血提取物对该3种菌的抑菌作用无显著差异,无水乙醇、乙酸乙酯提取物较水提物有显著差异;生药质量浓度为0.25 g/mL的乙醇提取物对3种菌都有极显著的抑菌效果,适宜抑菌生药质量浓度为0.5 g/mL;pH值对该提取物的抑菌效果影响较大,3个菌种适宜抑菌的pH值不同。

土家族药三百棒提取物对大鼠肢体缺血再灌注损伤血清SOD与MDA水平的影响

目的观察血清超氧化物歧化酶(SOD)与丙二醛(MDA)变化,探寻三百棒提取物对大鼠肢体缺血再灌注损伤的保护作用机制。方法 66只SD大鼠随机分为对照组、缺血再灌注组和三百棒提取物干预组。对照组动物不给药物,缺血-再灌注组于缺血前12 h、缺血时和再灌注时各给予0.9%氯化钠注射液1 mL灌胃;三百棒提取物干预组于缺血前12 h、缺血时和再灌注时各给予三百棒提取物1 mL灌胃,分别于相应时间点在麻醉下抽取各组动物下腔静脉血,测量血清中SOD和MDA的含量。结果与缺血-再灌注组相比,三百棒提取物干预组各时间点大鼠血清SOD水平明显上升,而MDA水平明显下降(P<0.05)。结论三百棒提取物能增加SOD信号通路表达,减少MDA通路启动,对大鼠肢体缺血再灌注损伤具有保护作用。

飞龙掌血水提取物对大鼠实验性心肌梗死的保护作用

目的：观察飞龙掌血（ Ｔｏｄｄａｌｉａ ａｓｉａｔｉｃａ ｌａｍ） 水提物（ 飞龙一号， Ｆ０１） 对冠脉动脉阻塞性心肌缺血性损伤的保护作用。方法：结扎冠脉动脉前降支制备 Ｓ Ｄ 大鼠心肌缺血模型，观察药物对动物心电图 Ｔ 波、 Ｓ Ｔ 段、病理性 Ｑ 波等变化和心肌梗死范围的影响。结果： Ｆ０１（１７５ 、３００ ｍｇ·ｋｇ１） 能明显缓解 Ｔ 波、 Ｓ Ｔ 段、病理性 Ｑ 波的心电图改变，并使心肌梗死范围缩小，其效应与剂量相关，并与维拉帕米相似。结论： Ｆ０１ 对结扎冠脉前降支所致心肌梗死有显著保护作用，该作用可能与抑制 Ｃａ２ ＋

响应面法优化三百棒多糖提取工艺

[目的]采用响应面法优化提取三百棒多糖的工艺条件。[方法]选择料液比、提取温度、提取时间、提取次数4个因素进行单因素试验,基于单因素试验结果,使用BBD响应面对三百棒多糖的提取工艺进行优化,并建立回归模型。[结果]最佳提取工艺条件:料液比1∶15(g∶m L),提取温度93℃,提取时间4 h,提取次数3次,在此条件下,三百棒多糖的提取率为4.75%,与模型的预期值4.99%基本相符。[结论]该优化工艺合理可行,具有较高的应用价值。

飞龙掌血总生物碱提取工艺研究

目的:优选飞龙掌血总生物碱的提取工艺。方法:以酸性染料比色法测定的总生物碱含量为指标,采用单因素和正交试验法,考察液料比、乙醇体积分数、提取温度对提取工艺的影响,确定最佳提取工艺。结果:各因素对乙醇回流提取工艺的影响顺序为提取温度、液料比、乙醇体积分数,最佳提取工艺为用25倍量75%乙醇,75℃回流提取40 min。结论:优选的提取工艺稳定可行,提取率高,为飞龙掌血资源的充分利用提供实验依据。

响应面法优化飞龙掌血中总生物碱的提取工艺

以飞龙掌血(Toddalia asiatica(L.)Lam.)的根为实验材料,以总生物碱的含量为检测指标,应用响应面法对飞龙掌血中总生物碱的提取工艺进行了优化。结果显示,当提取条件为乙醇体积分数74.76%、料液比20∶1和提取时间32.87 min时,飞龙掌血提取物中总生物碱的理论含量值可达11.09 mg/g,总生物碱含量达到最高值。按照最佳提取工艺条件进行验证,3次平行实验的均值为(10.74±0.18)mg/g,与理论值差异较小,表明利用响应面法来优化飞龙掌血中总生物碱的最佳提取工艺模型拟合良好,具有一定实用价值。

飞龙掌血醇提物对佐剂性关节炎模型大鼠炎症相关因子的影响

目的:研究飞龙掌血醇提物对佐剂性关节炎(AA)模型大鼠炎症相关因子的影响。方法:将70只SD大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、阳性对照化学药组(来氟米特片,0.012 g/kg)、阳性对照中药组(雷公藤多苷片,0.012 g/kg)和飞龙掌血醇提物低、中、高剂量组[1、4、6 g(生药)/kg],每组10只。除正常对照组外,其余各组大鼠均id弗氏完全佐剂复制AA模型,造模同时各给药组大鼠ig相应药物,正常对照组和模型对照组大鼠ig等容生理盐水,每天2次,连续28 d。检测各组大鼠足趾肿胀度,关节炎指数,血清及关节滑膜组织中白细胞介素(IL)-1β、IL-6、IL-10、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、前列腺素E2(PGE_2)含量。结果:与正常对照组比较,模型对照组大鼠原发性、继发性足趾肿胀度和关节炎指数升高;血清及关节滑膜组织中IL-1β、IL-6、TNF-α、PGE_2含量增加,IL-10含量减少(P<0.01)。与模型对照组比较,各给药组大鼠上述指标均明显改善(P<0.05或P<0.01)。结论:飞龙掌血醇提物通过调节血清及滑膜组织中抗炎、促炎因子的表达,从而发挥对AA模型大鼠的防治作用。

三百棒通过调控TLR4/NF-κB信号通路对脂多糖诱导的RAW264.7细胞极化的影响

目的:探讨三百棒醇提物(TAAE)对脂多糖(LPS)诱导的小鼠单核-巨噬细胞RAW264.7极化趋向以及其对炎症反应的影响。方法:用LPS诱导RAW264.7细胞建立炎症模型。CCK-8法检测细胞活力;ELISA检测细胞因子(TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-10)的水平;Griess法检测细胞培养上清液中一氧化氮(NO)的分泌情况;荧光染色双标法观察巨噬细胞的极化状态;免疫荧光染色检测NF-κB定位及表达;Transwell检测TAAE对RAW264.7细胞迁移和趋化性的影响;RT-qPCR检测TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10、Arg-1、NF-κB和TLR4的mRNA水平;Western blot检测iNOS、COX-2、TLR4、NF-κB、p-NF-κB、IκBα和p-IκBα蛋白水平。使用TLR4通路抑制剂TAK-242进一步验证TAAE对TLR4/NF-κB信号通路的影响。结果:与模型组相比较,TAAE降低LPS诱导的炎症模型RAW264.7细胞中M1型促炎因子(TNF-α、IL-1β和IL-6)及NO水平,促使M2型抑炎因子(IL-10和Arg-1)分泌增加和CD163~+/CD68~+比值升高,降低iNOS、COX-2、p-NF-κB、TLR4和p-IκBα蛋白水平,抑制NF-κB的核易位,同时降低TNF-α、IL-1β、IL-6、NF-κB和TLR4的mRNA水平,升高IL-10和Arg-1的mRNA水平;重要的是,TAAE促进LPS诱导的巨噬细胞向M2型极化,并抑制其迁移和趋化。结论:TAAE能促进巨噬细胞从M1型向M2型转化,并对减轻巨噬细胞炎症反应具有很强的药理活性,其机制可能与抑制TLR4/NF-κB信号通路、促进巨噬细胞极化平衡有关。

飞龙掌血的止血活性及其机制的研究

目的研究民族药飞龙掌血Toddalia asiatica Lam.的止血活性及其作用机理。方法采用小鼠出血时间和凝血时间作为测定指标,进行飞龙掌血提取物止血药的效学研究;连续给药3周后,测定大鼠血液凝集参数和血小板形态等指标,继而阐明其止血作用机理。结果飞龙掌血氯仿层提取物为最佳止血活性部位,给药大鼠血液的凝血酶时间显著缩短,纤维蛋白原含量显著增加(P<0.05),血小板数目显著增加,血小板形态发生延展,部分生出伪足。结论通过增加纤维蛋白原含量、促进内源性凝血途径和改变血小板形态数目可能是飞龙掌血发挥止血活性的主要作用机理。

飞龙掌血醇提物对类风湿性关节炎“肠-免疫-关节轴”中Th17/Treg平衡的影响

目的:探讨飞龙掌血醇提物(ethanol extract of Toddalia asiatica,TAE)对类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的干预影响,基于“肠-免疫-关节轴”中Th17/Treg平衡研究其抗关节炎的作用及机制。方法:32只雄性大鼠随机分4组,正常组、模型组、甲氨蝶呤(methotrexate,MTX)组和TAE组(n=8)。使用完全弗式佐剂(complete freund’s adjuvant,CFA)建立佐剂型关节炎(adjuvant-induced arthritis,AIA)大鼠模型,造模成功后,正常组与模型组灌服等体积5%CMC-Na,MTX组灌服0.9 mg·kg^(-1)MTX,TAE组灌服3 g·kg^(-1)TAE,除MTX组每周给药1次,其余3组每日1次,连续给药28 d。测量每组大鼠体质量、足趾容积值、脾脏指数、胸腺指数,观察HE染色踝关节病理变化,统计踝关节病理学评分。ELISA法检测大鼠血清中IL-17A、IL-10含量,Western blot法检测大鼠肠系膜淋巴结和关节滑膜中IL-17A、RORC、IL-10和FOXP3蛋白表达,RT-PCR法检测大鼠肠系膜淋巴结中IL-17A、RORC、IL-10和FOXP3 mRNA表达。结果:与正常组比较,模型组AIA大鼠出现体质量增长减慢(P<0.05),足趾容积值增加(P<0.05),脾脏和胸腺指数升高(P<0.01),踝关节出现关节破坏、滑膜增生和炎细胞浸润等病理改变,病理评分明显升高(P<0.01),大鼠肠系膜淋巴结中IL-17A、RORC蛋白和mRNA表达量升高(P<0.01),FOXP3、IL-10蛋白和mRNA表达量降低(P<0.05);血清中IL-17A含量升高(P<0.01),IL-10含量降低(P<0.05);关节滑膜中IL-17A、RORC蛋白表达量升高(P<0.01),FOXP3、IL-10蛋白表达量降低(P<0.01)。与模型组比较,MTX组和TAE组给药28 d后,能显著缓解AIA大鼠体质量下降(P<0.05),降低足趾容积值(P<0.05),降低脾脏和胸腺指数(P<0.01),抑制踝关节组织病理改变,降低踝关节病理评分(P<0.01),大鼠肠系膜淋巴结中IL-17A、RORC蛋白和mRNA表达量降低(P<0.01),FOXP3、IL-10蛋白和mRNA表达量升高(P<0.05);血清中IL-17A含量降低(P<0.01),IL-10含量升高(P<0.01);关节滑膜中IL-17A、RORC蛋白表达量降低(P<0.01),FOXP3、IL-10蛋白表达量升高(P<0.05)。结论:飞龙掌血醇提物通过调节“肠-免疫-关节轴”中Th17/Treg平衡,改善AIA大鼠关节炎症状。

飞龙掌血的三萜类成分研究

目的:研究飞龙掌血茎的乙酸乙酯部位的化学成分。方法:采用硅胶柱色谱、sephadex LH-20凝胶柱色谱、MCI以及半制备高效液相色谱等多种分离手段进行分离纯化,并结合化合物的理化性质及核磁数据进行结构鉴定。结果:从飞龙掌血茎的乙酸乙酯部位中分离并鉴定出8个三萜类化合物,分别为:2α, 3β, 19α-三羟基-12-烯-28-乌苏酸(1),1β-羟基蔷薇酸(2), 2α, 3α, 19α, 23-四羟基-12-烯-28-乌苏酸(3), 2α, 3α, 19α-trihydroxyurs-12-en-23-formyl-28-oic acid(4),乌苏酸(5), 2α-羟基乌苏酸(6),山楂酸(7),oleanolic acid(8)。结论:化合物1～8均为首次从该属中分离得到。

Carb/NH_2-SPE-GC-MS法快速监测飞龙掌血中4大类农药残留

目的 建立一种Carb/NH2-SPE-GC-MS方法快速监测飞龙掌血根皮中4大类40种农药残留。方法 采用Carb/NH2固相萃取小柱同时处理4类农药样品,采用气相色谱-质谱联用法（GC-MS）进行40种农药残留痕量测定。结果 Carb/NH2-SPE-GC-MS法与《中国药典》收录的农药残留前处理方法比较,都不具有统计学差异（P〉0.05）,在处理飞龙掌血多种农药残留时更为简便可行。4大类40种农药在10~200 ng·m L-1内线性关系良好（r〉0.998 2）,检测限LODs均在2.5 ng·m L-1左右,40种农药的精密度、稳定性和加样回收率基本满足方法学考察要求。结论 本实验建立的Carb/NH2-SPE-GC-MS方法操作简单、快速、灵敏度高,能够对飞龙掌血药材中多组分农药残留进行准确的定性和定量分析。

三百棒醇提物通过抗炎和凋亡作用减轻CIA大鼠的关节炎

探讨三百棒醇提物(Toddalia asiatica alcohol extract,TAAE)通过磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠的治疗作用及其机制研究。首先建立CIA大鼠模型,然后每天口服TAAE和雷公藤多苷片(TGT),每周对后肢关节的肿胀程度进行评分。给药35 d后,苏木素-伊红(HE)染色观察组织病理学变化;酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞因子(TNF-α、IL-6)的水平;TUNEL法检测TAAE对大鼠滑膜组织细胞凋亡的影响;Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、caspase-3及通路相关蛋白PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt的表达水平;RT-qPCR检测Bax、Bcl-2、caspase-3、TNF-α、IL-6、IL-1β及通路相关蛋白PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt的mRNA水平。TAAE可减轻CIA大鼠关节肿胀程度,降低血清炎症因子水平,改善滑膜组织病理改变,促进滑膜组织细胞凋亡,抑制滑膜炎症。此外,RT-qPCR和Western blot实验结果显示TAAE上调促凋亡相关蛋白Bax水平,下调抑凋亡蛋白Bcl-2水平,激活caspase-3促进了滑膜组织细胞凋亡,TAAE还有效地下调了p-PI3K、p-Akt蛋白水平。该研究表明,TAAE对CIA大鼠的关节炎具有很好的治疗作用,并且对降低炎症反应具有很强的药理活性,其机制可能与抑制PI3K/Akt信号通路,促进滑膜细胞凋亡有关。总体而言,该研究为三百棒的抗炎机制的研究提供了新的线索,并为临床更好应用三百棒治疗炎症性及自身免疫性疾病提供理论依据。