MP感染合并哮喘患儿血清miR-424-5p、MCP-1、TLR4水平联合检测预测预后的效能

目的探讨肺炎支原体(MP)感染合并哮喘患儿血清miR-424-5p、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、Toll样受体4(TLR4)水平联合检测预测预后的效能。方法回顾性选取2021年8月至2023年8月濮阳市人民医院收治的107例MP感染合并哮喘患儿作为研究对象,所有患儿均给予对症治疗,根据6个月预后分为预后良好组86例和预后不良组21例。比较两组患儿的基线资料和血清miR-424-5p、MCP-1、TLR4水平,采用Logistic回归分析各血清指标对预后的影响,绘制受试者工作特征(ROC)曲线及曲线下面积(AUC)分析血清miR-424-5p、MCP-1、TLR4对预后的预测效能。结果两组患儿的病程、发热天数、呼吸道感染史比较差异均有统计学意义(P<0.05);预后不良组患儿的血清miR-424-5p、MCP-1、TLR4水平分别为1.56±0.41、(84.29±15.19)μg/L、(95.21±13.52)ng/mL,明显高于预后良好组的1.23±0.33、(70.38±11.36)μg/L、(83.10±10.17)ng/mL,差异均有统计学意义(P<0.05);校正前Logistic回归分析结果显示,病程、发热天数、呼吸道感染史、血清miR-424-5p、MCP-1、TLR4均是MP感染合并哮喘患儿预后的独立影响因素(P<0.05),校正后Logistic回归分析结果显示,血清miR-424-5p、MCP-1、TLR4仍是MP感染合并哮喘患儿预后的独立影响因素(P<0.05);ROC曲线结果显示,血清miR-424-5p、MCP-1、TLR4联合检测预测MP感染合并哮喘患儿预后的AUC为0.900,优于各血清指标单独预测。结论MP感染合并哮喘患儿血清mi R-424-5p、MCP-1、TLR4与预后密切相关,三者联合检测预测MP感染合并哮喘患儿预后具有良好的参考价值。

急性脑梗死患者PBMC中TRAM、TLR4、IRF-3 mRNA水平与NIHSS评分关系及预测预后的价值

目的探究急性脑梗死(acute cerebral infarction,ACI)患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中Toll样受体相关分子(TRAM)、Toll样受体4(TLR4)、干扰素调节因子-3(IRF-3)mRNA表达水平与斑块稳定性、神经功能缺损(NIHSS)评分关联性及其预测预后不良的价值。方法选取延安大学附属医院2018年1月~2020年9月ACI患者115例作为研究对象,均行静脉溶栓治疗,随访90 d,根据改良Rankin评分(mRS)分为预后良好组(78例)与预后不良组(37例)。分析两组的临床资料、比较两组PBMC中TRAM、TLR4、IRF-3 mRNA表达情况,评价两组PBMC中各指标相关性及其与斑块稳定性、NIHSS评分关联性。采用COX回归分析PBMC中TRAM、TLR4、IRF-3 mRNA水平与预后关系,受试者工作特征(ROC)曲线评价PBMC中各指标预测预后不良的价值。结果两组发病至溶栓时间、斑块稳定性、NIHSS评分、糖尿病比例有显著性差异(P<0.05);预后不良组PBMC中TRAM、TLR4、IRF-3 mRNA表达水平高于预后良好组(P<0.05);Pearson相关性分析显示,PBMC中TRAM、TLR4、IRF-3 mRNA水平与NIHSS评分呈正相关(P<0.05);Spearman相关性分析显示,TRAM、TLR4、IRF-3 mRNA水平与斑块稳定性呈负相关(P<0.05);COX回归分析,将发病至溶栓时间、斑块稳定性、NIHSS评分、糖尿病等混杂因素调整后,PBMC中TRAM、TLR4、IRF-3 mRNA与不良预后显著相关(P<0.05);ROC曲线分析中,将TRAM、TLR4、IRF-3 mRNA进行Logistic二元回归拟合,返回预测概率Logit(P)作为独立检验变量,获取联合预测的AUC为0.886,95%CI为0.824~0.948,P<0.001,预测敏感度为83.78%,特异度为78.21%,优于各指标单一预测。结论ACI患者PBMC中TRAM、TLR4、IRF-3 mRNA水平与斑块稳定性、NIHSS评分显著相关,联合检测在预测预后不良方面具有可靠价值。

TLR2、TLR4和TLR9在慢性重型肝炎患者及肝衰竭大鼠中的表达

目的:观察重型肝炎患者及肝衰竭大鼠中TLR2、TLR4和TLR9的表达,为重型肝炎肝衰竭发病机制的研究提供思路.方法:免疫组织化学法检测慢性重型肝炎患者肝组织及外周血单个核细胞(PBMC)中TLR2、TLR4和TLR9表达,同时平行设立慢性乙型肝炎、肝硬化患者和正常人作为对照.免疫组织化学法检测急性肝衰竭、慢加急性肝衰竭及正常大鼠肝组织中TLR2、TLR4和TLR9表达.阳性对照为大鼠结肠组织.结果:正常人、慢性乙型肝炎和肝硬化患者肝组织中TLR2和TLR9未见表达;慢性重型肝炎患者肝组织中TLR2和TLR9有表达;正常人及慢性乙型肝炎患者PBMC中TLR2、TLR9未见表达,慢性重型肝炎患者PBMC中TLR2和TLR9有表达;正常大鼠肝组织TLR2、TLR9未见表达,急性肝衰竭和慢加急性肝衰竭大鼠肝组织中TLR2、TLR9有表达;TLR4在所有标本中均未见表达,但在阳性对照中有表达;TLR2、TLR9的表达多见于炎性细胞中,在肝实质细胞上表达很少.结论:TLR2、TLR9的高表达与机体的免疫状态密切相关,可能参与了重型肝炎和肝衰竭的发病过程.

肠道免疫因子GM-CSF,NLRP3和TLR4在原发性肝癌中的表达

目的通过检测健康志愿者、肝硬化患者和原发性肝癌患者血清中粒细胞—巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、核苷酸结合寡聚化结构域样受体3(NLRP3)和Toll样受体4(TLR4)的含量,探讨GM-CSF、NLRP3和TLR4在原发性肝癌疾病过程中的可能作用。方法收集肝癌手术切除的50例肝癌组织及癌旁组织标本,以及肝硬化和肝癌患者血清标本各12例,健康志愿者12例。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)和实时荧光定量PCR方法分别检测血清中mRNA水平上GM-CSF、NLRP3和TLR4的表达。结果正常肝细胞GM-CSF、NLRP3和TLR4 mRNA的表达水平均显著高于肝癌细胞(P<0.001);原发性肝癌组织GM-CSF、NLRP3和TLR4 mRNA的表达水平均明显低于癌旁组织(P<0.001);健康志愿者血清GM-CSF、NLRP3和TLR4的含量显著高于肝硬化及肝癌患者(P<0.001),但肝硬化患者和肝癌患者血清GM-CSF、NLRP3和TLR4的含量差异无统计学意义(P>0.05)。结论肝癌组织及癌细胞系GM-CSF、NLRP3和TLR4与癌旁组织及人正常肝细胞相比表达显著降低,GM-CSF、NLRP3和TLR4信号途径可能参与了原发性肝癌的免疫过程。

Omega-3鱼油脂肪乳对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠海马组织Toll样受体4和核因子κB的影响

目的探讨Omega-3鱼油脂肪乳对新生7日龄大鼠缺氧缺血性脑损伤是否具有保护作用。方法168只7日龄sD大鼠，按照随机数字表法分为4组，A组：假手术组；B组：Omega-3鱼油脂肪乳组；C组：普通脂肪乳组；D组：模型组，每组42只。按照Rice法制备新生大鼠缺氧缺血性脑损伤模型。于出生1d、3d、7d时取脑组织，Real—timePCR和Westernblot检测大鼠海马组织中Toll样受体4（TLR4）和核因子KB（NF—κB）mRNA及蛋白的表达量，TUNEL染色分别比较观察不同组问大鼠脑组织中细胞凋亡情况。结果3d时海马CAl区HE染色可见A组组织结构基本正常；D组细胞水肿较其他各组严重；1d时D组TLR4和NF-κB的mRNA和蛋白的表达量均高于A组（P均〈0．05）；3d时B组TLR4和NF—κB的mRNA（4．89±0．51，9．30±1．53）及蛋白（1．15±0．10，1．44±0．14）的表达量低于c组（17．58±2．50，20．13±1．00；2．56±0．10，2．82±0．09）和D组（15．94±2．52，26．21±3．00；2．34±0．11，4．51±0．36）（P均〈0．05），与A组（6．30±1．52，5．32±1．06；1．32±0．10，2．42±0．14）比较差异均无统计学意义（P均〉0．05）；7d时B组TLR4和NF-κB的mRNA及蛋白的表达量低于c组和D组（P均〈0．05），与A组比较差异均无统计学意义（P均〉0．05）；3d时脑组织凋亡细胞数：B组细胞凋亡数（13．67±2．52）少于c组（27．67±2．52）和D组（41．00±3．61），差异均有统计意义（P均〈0．05），与A组（6．00±2．00）比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论Omega．3鱼油脂肪乳能够减轻缺氧缺血脑损伤而发挥神经保护作用，其作用机制与下调TLR4、NF—KB表达和减少细胞凋亡有关。

正丁酸钠对涎腺腺样囊性癌细胞株ACC-2侵袭、迁移的影响及机制研究

目的探讨不同浓度正丁酸钠对涎腺腺样囊性癌细胞株ACC-2侵袭、迁移的影响与其作用机制。方法噻唑蓝(MTT)法探索正丁酸钠作用ACC-2细胞的最佳浓度,Transwell小室实验检测正丁酸钠对ACC-2细胞侵袭、迁移能力的影响,Western blot和实时荧光定量PCR(RT-PCR)分别检测5组浓度药物作用后ACC-2细胞中高迁移率族蛋白1(HMGB1)、TLR4的mRNA和蛋白的表达。结果与对照组相比,0.625、1.250、2.500、5.000、10.000 mmol/L 5组浓度的正丁酸钠均能抑制ACC-2细胞增殖(P<0.05)且呈明显浓度依赖性;5组浓度正丁酸钠对细胞侵袭能力的影响差异无统计学意义(P>0.05);2.500、5.000、10.000mmol/L浓度正丁酸钠可以抑制ACC-2细胞的迁移能力(P<0.05),同时降低ACC-2细胞HMGB1、TLR4的mRNA及蛋白表达(P<0.05);相关性分析显示TLR4蛋白表达的降低与HMGB1的抑制呈正相关(r=0.810,P<0.05)。结论正丁酸钠能够抑制ACC-2细胞增殖,浓度较高时可以抑制ACC-2细胞的迁移能力,同时降低HMGB1、TLR4的mRNA与蛋白表达,提示NaB对ACC-2迁移能力抑制可能通过下调HMGB1、TLR4的mRNA及蛋白表达来实现。

氯胺酮对心肌缺血再灌注损伤中Toll样受体-4和核因子-κB表达的影响

目的研究氯胺酮对心肌细胞H9c2缺血再灌注损伤的保护作用及对Toll样受体-4(TLR-4)和核因子-κB(NF-κB)表达的影响.方法将处于对数生长期的大鼠心肌H9c2细胞分为3组:正常对照组(Con组)、缺氧复氧组(I/R组)、缺氧复氧+氯胺酮组(I/R+K组).各组细胞处理后采用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖能力,试剂盒检测细胞内活性氧(ROS)水平及细胞外乳酸脱氢酶(LDH)含量,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测TLR-4 mRNA水平.Western印迹检测TLR-4、NF-κB及凋亡相关蛋白活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)蛋白表达水平.结果与Con组相比,I/R组细胞增殖能力显著降低,细胞内ROS水平升高,细胞漏出LDH含量增多,细胞凋亡率显著增加,TLR-4和NF-κB表达水平明显上调,Caspase-3蛋白激活增多(P<0.05).与I/R组相比,I/R+K组细胞增殖能力明显升高,细胞内ROS水平降低,细胞漏出LDH含量减少,细胞凋亡率显著降低,TLR-4和NF-κB表达水平下调,Caspase-3蛋白激活减少(P<0.05).结论氯胺酮能够通过抑制TLR-4和NF-κB的表达,减轻细胞损伤,减少细胞凋亡,对心肌细胞缺血再灌注损伤起保护作用.

宁心痛颗粒含药血清对THP-1源性巨噬细胞TLR4、Syk、ERK、Paxillin蛋白磷酸化水平与细胞吞噬功能的影响

目的观察宁心痛颗粒含药血清对"轻度氧化修饰低密度脂蛋白-Toll样受体4-巨噬细胞"途径的干预作用,探讨其稳定动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)斑块、抑制AS进展的分子机制。方法将THP-1源性巨噬细胞分为空白组、模型组、空白血清组、宁心痛颗粒含药血清组4组。采用免疫印迹法检测脾酪氨酸激酶(spleen tyrosine kinase,Syk)、细胞外信号调节激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK1/2)、桩蛋白(Paxillin)磷酸化水平随时间变化情况,以及宁心痛颗粒含药血清对Syk、ERK、Paxillin蛋白磷酸化水平的影响;采用免疫沉淀联合免疫印迹法检测Toll样受体4(Toll like receptor 4,TLR4)蛋白磷酸化水平随时间变化情况,以及宁心痛颗粒含药血清对TLR4蛋白磷酸化水平的影响;采用中性红吞噬实验检测巨噬细胞吞噬功能改变。结果 TLR4、Syk、ERK、Paxillin分别于15,10,15,30min达到磷酸化水平高峰;与空白组相比,模型组及空白血清组TLR4、Syk、ERK、Paxillin磷酸化水平升高、细胞吞噬功能增强(P<0.05);与模型组和空白血清组相比,含药血清组TLR4、Syk、ERK、Paxillin磷酸化水平降低、细胞吞噬功能减弱(P<0.05),但仍高于空白组。结论宁心痛颗粒含药血清可能通过"mm LDL-TLR4-巨噬细胞"途径影响巨噬细胞吞噬功能从而具有稳定AS斑块、干预AS作用。