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Toll样受体4接头分子对乳酸诱导巨噬细胞M2极化的促进作用及其机制 被引量:3
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作者 陈为 沈楠 +4 位作者 韩宛娜 郗艳丽 任旷 金连海 许娜 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期1190-1199,共10页
目的:探讨Toll样受体4 (TLR4)接头分子髓样分化因子88 (MyD88)和诱导β干扰素的Toll/白细胞介素1 (IL)受体(TIR)结构域衔接蛋白(TRIF)基因敲除后对乳酸诱导巨噬细胞极化的促进作用,初步阐明乳酸免疫调控的可能机制。方法:体外培养小鼠... 目的:探讨Toll样受体4 (TLR4)接头分子髓样分化因子88 (MyD88)和诱导β干扰素的Toll/白细胞介素1 (IL)受体(TIR)结构域衔接蛋白(TRIF)基因敲除后对乳酸诱导巨噬细胞极化的促进作用,初步阐明乳酸免疫调控的可能机制。方法:体外培养小鼠巨噬细胞Raw264.7,采用慢病毒法构建CRISPR/Cas9基因编辑载体,定向敲除MyD88和TRIF基因(MyD88-KO组和TRIF-KO组),设未感染的Raw264.7细胞为对照组,实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法和Western blotting法检测基因敲除效果。实验分为未处理Raw264.7细胞组、Raw264.7+乳酸组、MyD88-KO组、MyD88-KO+乳酸组、TRIF-KO组和TRIF-KO+乳酸组。15 mmol·L^(-1)乳酸诱导24 h后进行各指标检测。RT-qPCR法检测各组细胞中M2极化表型分子巨噬细胞甘露糖受体CD206和精氨酸酶1(Arg1) mRNA表达水平,光学显微镜下观察各组细胞形态表现,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测各组细胞上清中肿瘤坏死因子α (TNF-α)、γ干扰素(INF-γ)和白细胞介素10 (IL0)水平,Western blotting法检测各组细胞中核因子κB (NF-κB)信号通路相关蛋白表达水平。采用Autodock软件将乳酸分别与TLR4、MyD88和TRIF分子对接并观察其结合情况。结果:采用CRISPR/Cas9技术进行基因定向敲除后,与对照组比较,MyD88-KO组和TRIF-KO组细胞中MyD88和TRIF mRNA及蛋白表达水平明显降低(P<0.05或P<0.01)。乳酸作用24 h后,与未处理Raw264.7细胞组比较,Raw264.7+乳酸组细胞中M2极化标志物CD206和Arg1 mRNA表达水平明显升高(P<0.05);与MyD88-KO组比较,MyD88-KO+乳酸组细胞中CD206和Arg1 mRNA表达水平均升高(P<0.05);与TRIF-KO组比较,TRIF-KO+乳酸组细胞中CD206和Arg1 mRNA表达水平均降低(P<0.05)。细胞形态表现,Raw264.7+乳酸组细胞表现出M2极化形态,即体积增大、明显突起伪足和偏锥形细胞比例增加;MyD88-KO+乳酸组细胞同样表现出M2极化形态变化;TRIF-KO+乳酸组细胞形态变化不明显。ELISA法检测,与未处理Raw264.7细胞组比较,Raw264.7+乳酸组细胞中TNF-α水平明显降低(P<0.05),INF-γ和IL0水平差异无统计学意义(P>0.05);与MyD88-KO组比较,MyD88-KO+乳酸组细胞中TNF-α水平明显降低(P<0.05),INF-γ水平差异无统计学意义(P>0.05),IL0水平明显升高(P<0.05);与TRIF-KO组比较,TRIF-KO+乳酸组细胞中TNF-α水平明显升高(P<0.05),INF-γ和IL0水平差异无统计学意义(P>0.05)。Western blotting法检测,与未处理Raw264.7组比较,Raw264.7+乳酸组、MyD88-KO组、MyD88-KO+乳酸组、TRIF-KO组和TRIF-KO+乳酸组细胞中TLR4蛋白表达水平差异均无统计学意义(P>0.05),Raw264.7+乳酸组细胞中核因子κB抑制蛋白α (IκB-α)和p65蛋白表达水平明显降低(P<0.05);与MyD88-KO组比较,MyD88-KO+乳酸组细胞中IκB-α和p65蛋白表达水平明显降低(P<0.05);与TRIF-KO组比较,TRIF-KO+乳酸组细胞中IκB-α和p65蛋白表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。分子对接,乳酸分别与TLR4、MyD88和TRIF形成氢键数为2、4和4,结合能分别为-2.72、-3.24和-3.66。结结论论:乳酸作用巨噬细胞后,可通过调控TRIF抑制IκB-α活性进而抑制NF-κB,促进M2极化。 展开更多
关键词 toll样受体4 髓样分化因子88 诱导β干扰素的TIR结构域衔接蛋白 乳酸 巨噬细胞
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藻蓝色素蛋白诱导非小细胞肺癌H1299细胞凋亡的机制
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作者 郝帅 李前程 +3 位作者 李爽 刘媛璞 王静 王成涛 《中国食品学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2020年第12期8-15,共8页
藻蓝色素蛋白是一种被广泛认可的天然食品着色剂,也是一种重要的功能性食品,具有优良的抗炎、抗氧化及抗肿瘤特性。前期试验表明:藻蓝蛋白能够诱导非小细胞肺癌H1299细胞的凋亡。本研究以高通量转录组技术为手段,对藻蓝蛋白处理前、后的... 藻蓝色素蛋白是一种被广泛认可的天然食品着色剂,也是一种重要的功能性食品,具有优良的抗炎、抗氧化及抗肿瘤特性。前期试验表明:藻蓝蛋白能够诱导非小细胞肺癌H1299细胞的凋亡。本研究以高通量转录组技术为手段,对藻蓝蛋白处理前、后的H1299细胞进行差异基因的筛选,探究藻蓝蛋白在非小细胞肺癌中的调控机制。转录组分析显示:藻蓝蛋白能够显著降低H1299细胞内toll-白介素1受体域接头蛋白(TIRAP)基因的表达;采用siRNA干预TIRAP的表达后,H1299细胞出现凋亡,细胞形态发生非正常改变,细胞增殖能力显著降低,促凋亡蛋白Bax表达上调,抑凋亡蛋白Bcl-xL表达下调;同时,沉默TIRAP的表达能够显著降低H1299细胞中NF-κB信号通路的活性。本研究表明:藻蓝蛋白能够抑制TIRAP的表达,通过降低NF-κB信号通路的活性而诱导H1299细胞的凋亡。此结果揭示了藻蓝蛋白在非小细胞肺癌中的作用机制,为肺癌的潜在治疗和藻蓝类功能性食品添加剂的开发和利用提供一定的理论依据。 展开更多
关键词 藻蓝蛋白 H1299细胞 转录组 toll-白介素1受体域接头蛋白(TIRAP) 细胞凋亡
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中国汉族人群TIRAP基因编码区多态性与结核病易感性的相关性研究
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作者 李松 丁志鑫 +7 位作者 车南颖 张旭霞 程君 张林波 时广利 张杰 王雪玉 李传友 《结核病与胸部肿瘤》 2011年第2期103-107,共5页
目的筛选中国汉族人群TIRAP基因编码区多态性位点,并分析其与结核病易感性的相关性。方法在小样本中测序筛选TIRAP基因编码区多态性位点,再用连接酶特异检测技术在大样本中进行SNP分型,并通过统计学方法分析基因多态性与结核病易感... 目的筛选中国汉族人群TIRAP基因编码区多态性位点,并分析其与结核病易感性的相关性。方法在小样本中测序筛选TIRAP基因编码区多态性位点,再用连接酶特异检测技术在大样本中进行SNP分型,并通过统计学方法分析基因多态性与结核病易感性的相关性。结果共筛选到4个TIRAP基因编码区多态性位点。G394A位点在结核病人中的突变频率高于健康人,该位点等位基因频率在两组人群中差异具有统计学意义(P〉0.05)。G164A位点跟结核病病情有关,复治病人与健康人该位点等位基因差异具有统计学意义(P〈0.05),同时肺部形成空洞病人与菌阳病人突变率均比健康人要低。结论TIRAP基因编码区多态性可能是中国汉族人群结核病发生发展的危险因素。 展开更多
关键词 结核病 toll/介素1受体结构域衔接蛋白 易感性 单核苷酸多态性
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氟西汀调节TLR4/NF-κB/NLRP3炎症体信号通路改善CUMS大鼠抑郁样行为 被引量:8
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作者 吕霞 黄丽 +3 位作者 张美琳 樊珺婷 马泽微 刘欢 《天津医药》 CAS 北大核心 2023年第2期160-165,共6页
目的基于Toll样受体4(TLR4)/核因子κB(NF-κB)/NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)炎症体信号通路探究氟西汀对慢性不可预知性轻度应激(CUMS)模型大鼠抑郁样行为的作用。方法18只SD大鼠随机分为对照组、模型组和氟西汀组。模型组... 目的基于Toll样受体4(TLR4)/核因子κB(NF-κB)/NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)炎症体信号通路探究氟西汀对慢性不可预知性轻度应激(CUMS)模型大鼠抑郁样行为的作用。方法18只SD大鼠随机分为对照组、模型组和氟西汀组。模型组和氟西汀组大鼠随机给予不可预知性轻度刺激11周,制备抑郁症模型。氟西汀组于第7~11周灌胃氟西汀(10 mg·kg^(-1)·d^(-1)),其余组大鼠灌胃1 mL生理盐水。干预结束后进行行为学检测,酶联免疫吸附试验检测脑组织中白细胞介素(IL)-1β和IL-18的含量,免疫荧光染色观察海马CA3区和皮质区中NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)和胱天蛋白酶1(Caspase-1)的表达情况。Western blot测定脑组织TLR4、NF-κB、NLRP3、Caspase-1和活化的Caspase-1(cleaved Caspase-1)蛋白的表达水平。结果与模型组比较,氟西汀组大鼠在旷场的运动距离及站立次数显著增多,在高架十字迷宫的运动距离增加,且在闭臂的停留时间减少,大鼠脑组织中IL-1β和IL-18含量显著降低,TLR4、NF-κB、NLRP3、ASC、Caspase-1和cleaved Caspase-1蛋白的表达降低(P<0.05)。结论氟西汀可能通过抑制TLR4/NF-κB/NLRP3炎症体信号通路,降低脑组织中炎性因子IL-1β和IL-18的水平,从而改善CUMS大鼠的抑郁样行为。 展开更多
关键词 抑郁症 氟西汀 toll样受体4 NF-ΚB NLR家族 热蛋白结构域包含蛋白3 白细胞介素1β 白细胞介素18 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1 ASC
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Relationship between the expression of TLR4 and TIRAP and sepsis in peripheral blood
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作者 Minglu Qi Jingping Yang +2 位作者 Xue Yin Si Chen Xiyuan Xu 《Discussion of Clinical Cases》 2016年第4期9-13,共5页
Objective:To explore the relationship between the expression of TLR4 and TIRAP and sepsis severity.Methods:The study selected 30 healthy examinees as the control group and 53 patients with sepsis as the observation gr... Objective:To explore the relationship between the expression of TLR4 and TIRAP and sepsis severity.Methods:The study selected 30 healthy examinees as the control group and 53 patients with sepsis as the observation group.The patients in the observation group were assessed by Acute Physiology and Chronic Health Evaluation Ⅱ(APACHE Ⅱ).40 patients with APACHE Ⅱ score≤20,were classified into the low-score sepsis group;13 patients with APACHE Ⅱ score>20,were classified into the high-score sepsis group.The levels of TLR4 and TIRAP in venous serum were detected in all subjects by enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA).Results:The levels of TLR4 and TIRAP in serum were 0.886±0.058 ng/ml and 5.216±0.410 ng/ml in the control group;2.253±0.379 ng/ml and 9.540±2.294 ng/ml in the low-score sepsis group;4.494±0.709 ng/ml and 19.206±1.755 ng/ml in the high-score sepsis group.The observation group(low-score and high-score sepsis groups)was significantly different from the control group(p=.000),and the low-score sepsis group was significantly different from the high-score sepsis group(p=.000).With APACHE II score of 20 as the cut-off point,the low-score sepsis group was consisted of low-risk patients and the high-score group was consisted of the high-risk,which can indicate the sepsis severity.According to Pearson’s correlation analysis,the level of TLR4 was positively correlated with sepsis severity(r=0.931,p<.05),the level of TIRAP was also positively correlated with the sepsis severity(r=0.972,p<.05);the level of TLR4 was positively correlated with the level of TIRAP(r=0.936,p<.05).Conclusions:The levels of TLR4 and TIRAP in septic patients can be used to predict and determine the severity of sepsis. 展开更多
关键词 SEPSIS toll-like receptor-4 toll/interleukin-1 receptor adapter protein
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中国汉族人群TIRAP基因编码区多态性与结核病易感性的相关性研究 被引量:1
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作者 李松 车南颖 +7 位作者 丁志鑫 张旭霞 程君 张林波 时广利 张洁 王雪玉 李传友 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期502-506,共5页
目的筛选中国汉族人群Toll/白细胞介素1受体结构域衔接蛋白(TIRAP)基因编码区多态性位点,并分析其与结核病易感性的相关性。方法在小样本中测序筛选TIRAP基因编码区多态性位点,再用连接酶特异检测技术在大样本中进行单核苷酸多态性... 目的筛选中国汉族人群Toll/白细胞介素1受体结构域衔接蛋白(TIRAP)基因编码区多态性位点,并分析其与结核病易感性的相关性。方法在小样本中测序筛选TIRAP基因编码区多态性位点,再用连接酶特异检测技术在大样本中进行单核苷酸多态性(SNP)分型,并通过统计学方法分析基因多态性与结核病易感性的相关性。结果共筛选到4个TIRAP基因编码区多态性位点。G394A位点在结核病病人中的突变频率高于健康人,但是该位点等位基因频率在两组人群中的差异没有统计学意义(P〉0.05)。G164A位点跟结核病病情有关,复治病人与健康人该位点等位基因差异具有统计学意义(P〈0.05),同时肺部形成空洞病人与菌阳病人突变率均比健康人要低。结论TIRAP基因编码区多态性可能是中国汉族人群结核病发生发展的危险因素。 展开更多
关键词 结核病 toll/白细胞介素1受体结构域衔接蛋白 易感性 单核苷酸多态性
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TLR2和TIRAP基因多态性与隐性感染性结核的相关性研究 被引量:1
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作者 孙红梅 薛建昌 +2 位作者 张珣 李曼 孔祥龙 《医学动物防制》 2022年第9期856-860,864,共6页
目的 探讨Toll样受体(toll-like receptors, TLR)2和含Toll白细胞介素-1受体域衔接蛋白(toll interleukin-1 receptor domain contain adapter protein, TIRAP)基因的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism, SNP)与隐性感染性... 目的 探讨Toll样受体(toll-like receptors, TLR)2和含Toll白细胞介素-1受体域衔接蛋白(toll interleukin-1 receptor domain contain adapter protein, TIRAP)基因的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism, SNP)与隐性感染性结核的相关性。方法 研究纳入健康正常人(对照组)316名和隐性感染性结核患者(病例组)322例,采用SNaPshot微测序技术分析TLR2基因2个位点(rs5743708、rs3804099)和TIRAP基因4个位点(rs595209、rs7932766、rs8177374和rs8177400)的多态性,通过比较基因型和等位基因频率的差异,分析TLR2和TIRAP基因位点多态性与隐性感染性结核的相关性。结果 TLR2和TIRAP基因的6个位点的基因频率分布均符合Hardy-Weinberg平衡定律。病例组rs5743708、rs3804099和rs8177374的基因型及等位基因与对照组相比,差异均无统计学意义。rs595209位点的等位基因T相对于G发病风险降低21.5%(OR=0.785,95%CI:0.621~0.992),rs7932766位点的等位基因T相对于C发病风险降低78.7%(OR=0.213,95%CI:0.071~0.633),且差异均有统计学意义(χ^(2)=4.102、9.336,P<0.05)。rs595209位点的基因型TT相对于GG发病风险降低43.2%(OR=0.568,95%CI:0.348~0.928),相对于(GT+GG)发病风险降低42.0%(OR=0.580,95%CI:0.363~0.925),且差异均有统计学意义(χ^(2)=5.178、5.321,P<0.05);rs7932766位点的基因型CT相对于CC发病风险降低79.2%(OR=0.208,95%CI:0.070~0.622),且差异有统计学意义(χ^(2)=9.503,P<0.05)。结论 TIRAP基因的rs595209位点的基因型TT及等位基因T、rs7932766位点的基因型CT及等位基因T均为隐性感染性结核的保护性因素。 展开更多
关键词 隐性感染性结核 toll样受体2 toll白细胞介素-1受体域衔接蛋白 单核苷酸多态性 遗传易感性
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软体动物模式识别受体研究进展
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作者 高倩 赵琴平 +1 位作者 马晓雪 董惠芬 《中国血吸虫病防治杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期440-443,共4页
软体动物建立了复杂的固有免疫系统以对抗病原生物体的入侵。模式识别受体(Pattern recognition receptors,PRRs)是软体动物启动固有免疫应答的首要分子,其种类甚多,如Toll样受体、C型凝集素及半乳凝素、脂多糖葡聚糖结合蛋白、补体相... 软体动物建立了复杂的固有免疫系统以对抗病原生物体的入侵。模式识别受体(Pattern recognition receptors,PRRs)是软体动物启动固有免疫应答的首要分子,其种类甚多,如Toll样受体、C型凝集素及半乳凝素、脂多糖葡聚糖结合蛋白、补体相关分子和肽聚糖识别蛋白等。PRRs具有多种生物学特性,在软体动物的固有免疫中发挥着重要作用。本文对软体动物PRRs的研究进展作一综述。 展开更多
关键词 软体动物 模式识别受体 固有免疫 toll样受体 凝集素 半乳凝素 脂多糖葡聚糖结合蛋白 补体相关蛋白 肽聚糖识别蛋白
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