薏苡附子败酱散通过抗三结构域蛋白21-Toll样受体4-t-核因子-κB信号通路对类风湿关节炎MH7A细胞的影响

目的观察不同浓度薏苡附子败酱散对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的类风湿关节炎成纤维细胞(MH7A)增殖、凋亡及炎症反应的影响,探究其作用机制。方法2022年2―8月,大鼠用不同浓度薏苡附子败酱散及蒸馏水灌胃制备含药血清;20μg/L的TNF-α处理的MH7A细胞记为TNF-α组,TNF-α+含药血清处理的MH7A细胞记为薏苡附子败酱散低浓度组、薏苡附子败酱散中浓度组、薏苡附子败酱散高浓度组,正常培养的MH7A细胞标记为对照组。细胞计数试剂盒(CCK8)、流式细胞术、酶联免疫吸附测定(ELISA)检测细胞的存活、凋亡及白细胞介素(IL)-1β、干扰素(IFN)-γ;蛋白质印迹法(WB)检测基质金属蛋白酶(MMP)-3、MMP-9、抗三结构域蛋白21(TRIM21)、Toll样受体4(TLR4)、t-核因子(NF)-κB p65、磷酸化(p)-NF-κB p65、p-NF-κB抑制因子(IκB)-α和t-IκB-α蛋白表达。pcDNA 3.1组(转染空载体)、pcDNA+TRIM21组(转染pcDNA 3.1+TRIM21)、薏苡附子败酱散中浓度+si-con组(转染si-con+4.70 g/kg含药血清)、薏苡附子败酱散中浓度+si-TRIM21组(转染si-TRIM21+4.70 g/kg含药血清)。结果与对照组相比,TNF-α组细胞存活率(105.07±1.90比185.67±3.06)、TRIM21(0.56±0.02比0.68±0.04)、MMP-3(0.18±0.00比0.63±0.02)、MMP-9(0.39±0.01比0.82±0.01)、TLR4(0.25±0.02比0.68±0.07)、p-NF-κB p65(0.24±0.01比0.68±0.06)、p-IκB-α(0.22±0.01比0.55±0.04)蛋白表达和IL-1β(31.65±0.66比101.93±0.60)、IFN-γ(8.53±0.16比63.76±1.35)含量均显著升高,凋亡率(6.54±0.06比1.17±0.08)均显著降低;与TNF-α组相比,薏苡附子败酱散低浓度组(185.67±3.06比153.77±3.09;0.68±0.04比0.37±0.02;0.63±0.02比0.47±0.02;0.82±0.01比0.73±0.01;103.2±0.7比92.93±0.85;66.3±1.45比54.47±1.46;0.68±0.07比0.53±0.05;0.68±0.06比0.53±0.06;0.55±0.04比0.47±0.01;1.84±0.07比6.67±0.28)、薏苡附子败酱散中浓度组(185.67±3.06比136.23±1.57;0.68±0.04比0.57±0.02;0.63±0.02比0.37±0.02;0.82±0.01比0.57±0.00;103.2±0.7比86.4±0.75;66.3±1.45比38.1±0.92;0.68±0.07比0.43±0.07;0.68±0.06比0.59±0.01;0.55±0.04比0.40±0.03;1.84±0.07比9.59±0.29)、薏苡附子败酱散高浓度组(185.67±3.06比143.47±1.50;0.68±0.04比0.47±0.02;0.63±0.02比0.41±0.05;0.82±0.01比0.62±0.00;103.2±0.7比89.63±0.42;66.3±1.45比40.17±0.90;0.68±0.07比0.51±0.06;0.68±0.06比0.69±0.07;0.55±0.04比0.41±0.02;1.84±0.07比8.89±0.08)细胞存活率、TRIM21、MMP-3、MMP-9蛋白和IL-1β、IFN-γ含量及TLR4、p-NF-κB p65、p-IκB-α蛋白表达均显著降低,凋亡率均显著升高(P<0.05);与pcDNA组相比,pcDNA+TRIM21组细胞TRIM21蛋白表达(0.24±0.03比0.51±0.04)、细胞凋亡率(1.61±0.11比12.43±0.61)均显著升高,MMP-3(0.64±0.02比0.41±0.04)、MMP-9(0.82±0.03比0.45±0.02)、IL-1β(110.63±0.55比90.93±0.60)、IFN-γ(64.5±0.82比48.1±1.25)及细胞存活率(179.03±0.74比120.07±0.60)均显著降低;敲减TRIM21显著抑制薏苡附子败酱散中浓度对损伤细胞的治疗作用且显著升高TLR4(0.45±0.06比0.61±0.02)、p-NF-κB p65(0.49±0.02比0.56±0.02)、p-IκB-α(0.38±0.01比0.62±0.01)的蛋白表达。结论薏苡附子败酱散增强TNF-α诱导的MH7A细胞的生存能力,其作用机制与上调TRIM21抑制TLR4-NF-κB信号通路活性有关。

基于高迁移率族蛋白B1/Toll样受体4信号通路分析血栓通注射液联合阿替普酶静脉溶栓治疗对急性脑梗死患者的机制研究

目的基于高迁移率族蛋白B1/Toll样受体4(HMGB1/TLR4)信号通路分析血栓通注射液联合阿替普酶静脉溶栓治疗对急性脑梗死(ACI)患者的作用机制。方法将106例ACI患者随机分为对照组(n=53)与研究组(n=53)。对照组进行阿替普酶静脉溶栓治疗,研究组在对照组基础上应用血栓通注射液治疗。比较2组临床疗效与不良反应,治疗前及治疗后7、14 d的美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分,治疗前后的外周血单个核细胞内HMGB1 mRNA、TLR4 mRNA表达水平及血清中HMGB1、TLR4蛋白含量,以及治疗前后炎症因子[白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)]水平。采用Pearson检验和Spearman检验分析ACI患者外周血单个核细胞内HMGB1 mRNA、TLR4 mRNA表达水平及血清中HMGB1、TLR4蛋白含量与NIHSS评分、疗效总有效率的相关性。结果治疗后7、14 d时,研究组NIHSS评分低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后,2组HMGB1 mRNA、TLR4 mRNA表达水平较治疗前降低,且研究组HMGB1 mRNA、TLR4 mRNA表达水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后,2组血清HMGB1、TLR4蛋白含量较治疗前降低,且研究组血清HMGB1、TLR4蛋白含量低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后,2组血清TNF-α、IL-6水平低于治疗前,且研究组血清TNF-α、IL-6水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。对照组总有效率为75.47%,研究组总有效率为94.34%,差异有统计学意义(P<0.05);对照组不良反应总发生率为9.43%,研究组不良反应总发生率为15.09%,差异无统计学意义(P>0.05)。Pearson检验显示,ACI患者外周血单个核细胞内HMGB1 mRNA、TLR4 mRNA表达水平及血清中HMGB1、TLR4蛋白含量与NIHSS评分呈正相关(r=0.431、0.443、0.396、0.375,P均<0.001);Spearman检验显示,ACI患者外周血单个核细胞内HMGB1 mRNA、TLR4 mRNA表达水平及血清中HMGB1、TLR4蛋白含量与疗效总有效率呈负相关(r=-0.536、-0.481、-0.475、-0.506,P均<0.001)。结论血栓通注射液联合阿替普酶静脉溶栓治疗能有效改善ACI患者神经功能并降低机体炎症水平,其机制可能与下调HMGB1/TLR4信号通路有关。

氯替泼诺联合人工泪液对白内障术后干眼症患者Toll样受体-核因子κB信号通路相关因子的影响

目的分析氯替泼诺联合人工泪液对白内障术后干眼症患者Toll样受体(TLR)-核因子κB(NF-κB)信号通路相关因子的影响。方法回顾性分析2020年12月至2023年12月赣州启明星眼科医院收治的110例白内障术后干眼症患者的临床资料,根据治疗方法的不同分为对照组(n=55)与试验组(n=55)。对照组给予人工泪液治疗,试验组给予氯替泼诺联合人工泪液治疗,比较两组患者的治疗总有效率、角膜荧光素染色(FL)评分、美国国家眼科研究所视觉相关生命质量量表(NEI-VFQ-25)评分、泪液肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)水平及血清TLR4、NF-κB水平。结果对照组、试验组患者治疗总有效率分别为74.55%、90.91%,试验组的治疗总有效率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,两组患者的FL评分均低于同组治疗前,且试验组的FL评分低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,两组患者的TNF-α、IL-1β水平均低于同组治疗前,且试验组的TNF-α、IL-1β水平均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,两组患者的TLR4、NF-κB水平均低于同组治疗前,且试验组的TLR4、NF-κB水平均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,两组患者的生活质量各项评分均高于同组治疗前,且试验组的生活质量各项评分均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论氯替泼诺联合人工泪液治疗白内障术后干眼症患者效果较好,可有效提高泪膜稳定性,可提高患者生活质量,与氯替泼诺联合人工泪液治疗通过介导TLR-NF-κB信号通路降低眼表炎症状态有关,可推广应用。

家蚕Toll和IMD信号通路重要基因对不同病原体感染的免疫响应

Toll和IMD通路是昆虫先天免疫的重要信号通路,抗菌肽的产生可以由这些通路激活。通过感染4种不同种类的病原体(球孢白僵菌、大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌),对家蚕Toll通路的BmTube、BmMyD88、BmTollip、BmECSIT、BmTRAF2和BmCactus基因,IMD通路的BmDredd、BmFadd、BmTAB2、BmTAK1、BmRelish1和BmRelish2基因以及4类不同抗菌肽(antimicrobial peptide,AMP)基因BmCecropinA1、BmAttacin1、BmDefensinA和BmGloverin1的表达进行分析,探讨家蚕在感染不同病原后Toll和IMD通路级联反应的免疫响应。结果表明,家蚕Toll和IMD信号通路级联反应基因表达调控与不同种类病原体感染相关;不同类型的病原选择性地激活Toll和IMD通路,进而诱导特定AMP基因的表达,AMP基因表达对细菌的免疫响应快,对真菌的免疫响应慢,其中BmCecropinA1表达强度显著高于其他类型AMP基因。

枸杞多糖对类风湿关节炎大鼠炎症反应及TLR4/NF-κB信号通路的影响

目的 研究枸杞多糖对类风湿关节炎(RA)大鼠炎症反应及Toll样受体(TLR)4/核因子(NF)-κB信号通路的影响。方法 采用Ⅱ型胶原联合完全弗氏佐剂诱导建立关节炎大鼠模型,并随机分为模型组、枸杞多糖低、高剂量组及氨甲蝶呤组,另设正常组(不建模),每组10只。枸杞多糖低、高剂量组灌胃200、400 mg/kg的枸杞多糖,氨甲蝶呤组灌胃3.8 mg/kg氨甲蝶呤,1次/d,持续28 d。记录足趾肿胀度、关节炎评分、机械性痛阈及热刺激缩足反射潜伏期,苏木素-伊红染色观察足关节滑膜组织病理,酶联免疫吸附试验及实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β、IL-6含量及mRNA表达,Western印迹检测TLR4、髓样分化因子(MyD)88、磷酸化p-NF-κB蛋白表达。结果 与正常组比较,模型组足趾肿胀度、关节炎评分明显升高,机械性痛阈及热刺激缩足反射潜伏期明显降低,足关节滑膜组织病理形态明显,血清TNF-α、IL-1β、IL-6含量明显增加,足关节滑膜组织TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA及TLR4、MyD88、p-NF-κB蛋白表达明显增加(P<0.01);与模型组比较,枸杞多糖低、高剂量组足趾肿胀度、关节炎评分明显降低(P<0.05,P<0.01),机械性痛阈及热刺激缩足反射潜伏期明显升高,足关节滑膜组织病理形态明显减轻,血清TNF-α、IL-1β、IL-6含量明显降低(P<0.01),足关节滑膜组织TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA及TLR4、MyD88、p-NF-κB蛋白表达明显降低(P<0.05,P<0.01)。结论 枸杞多糖可通过抑制TLR4/NF-κB信号通路介导的炎症反应,改善RA症状。

高迁移率蛋白1/Toll样受体4信号通路与下肢动脉硬化闭塞症介入治疗后复发的相关性分析

目的研究高迁移率蛋白1/Toll样受体4信号通路(HMGB1/TLR4)与老年下肢动脉硬化闭塞症(ASO)介入治疗后复发风险的相关性。方法2020年1月~2021年1月间收治的行介入治疗的ASO病人84例,共96条病变血管,采用逆转录实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法于术后1周检测病人外周血单个核细胞(PBMCs)内HMGB1及TLR4 mRNA表达水平,放射免疫法及免疫比浊法检测血清内皮素-1(ET-1)及高敏C反应蛋白(hs-CRP)水平。术后随访12个月,统计靶血管再狭窄情况,将血管再狭窄者纳为复发组,无狭窄者纳为对照组,比较两组外周血PBMCs内HMGB1、TLR4水平及血清hs-CRP及ET-1水平,分析以上指标与ASO介入术治疗病人血管再狭窄之间的关系。结果介入治疗后,84例病人96条病变血管均开通,随访12个月后经双下肢超声及CTA检查提示有16例病人共18条病变血管再狭窄。复发组病人外周血PBMCs内HMGB1及TLR4表达水平及血清ET-1及hs-CRP高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。复发组病人外周血PBMCs的HMGB1及TLR4表达量与血清ET-1及hs-CRP水平均呈正相关(r=0.393,0.378,0.411,0.407,P<0.05)。结论HMGB1/TLR4信号通路可能通过激活炎症因子释放,促进血管损伤,参与ASO病人介入术后复发。

五味子对对氯苯丙氨酸致失眠大鼠Toll样受体7信号通路相关基因mRNA表达的影响

目的:研究五味子对对氯苯丙氨酸(PCPA)致失眠大鼠Toll样受体7(TLR7)信号通路相关基因mRNA表达的影响。方法:将32只大鼠随机分为空白组、模型组、五味子组、安定组,每组8只。模型组、五味子组、安定组大鼠腹腔注射PCPA建立失眠模型。五味子组给予五味子提取物灌胃,安定组给予地西泮混悬液灌胃,余组不予处理。采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)法检测各组大鼠脾脏TLR7、干扰素调节因子7(IRF7)、干扰素α(IFN-α)的mRNA水平。结果:造模后,模型组大鼠体质量下降,出现毛少无光、易受惊、烦躁易怒、昼夜节律消失等现象。模型组、安定组大鼠体质量均低于空白组(P<0.05)。给予五味子提取物灌胃后,五味子组与空白组大鼠体质量比较,差异无统计学意义(P>0.05),两组大鼠身体状态均相对较好,毛发有光泽,白天安静倦卧,无烦躁、易怒等症状。荧光定量PCR仪检测结果显示,模型组TLR7、IRF7、IFN-α的mRNA表达水平均明显高于空白组(P<0.01);五味子组、安定组TLR7、IRF7 mRNA表达水平均明显低于模型组(P<0.01);安定组IFN-α mRNA水平低于模型组(P<0.05)。结论:五味子能改善PCPA诱导失眠大鼠的睡眠,其机制可能是通过下调TLR7信号通路的相关基因发挥治疗作用。

基于miR-155/TLR4/MyD88信号通路探讨蛇伤胶囊对竹叶青蛇伤的抗炎作用

目的探讨蛇伤胶囊对竹叶青蛇伤miR-155/Toll样受体4(TLR4)/髓样分化因子88(MyD88)信号通路及炎症的影响。方法将18只雄性新西兰大白兔分为对照组、模型组和蛇伤胶囊组,每组6只。对照组正常饮食饮水,另两组注射7.5 mg/kg竹叶青蛇毒液6 h后,模型组灌胃348 mg/(kg·d)生理盐水,蛇伤胶囊组灌胃348 mg/(kg·d)蛇伤胶囊,均连续灌胃1周。观察实验兔的一般行为学,qRT-PCR检测外周血中miR-155a-5p、TLR4和MyD88表达,ELISA检测血清中白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、γ干扰素(IFN-γ)和白细胞介素-4(IL-4)含量。结果与对照组比较,模型组精神和食欲变差,排便稀软带血,伤口溃烂,miR-155-5p、TLR4 mRNA、MyD88 mRNA、IL-6和TNF-α表达均显著增加(均P<0.01),IFN-γ和IL-4表达显著下降(均P<0.01)。蛇伤胶囊组较模型组情况明显好转,miR-155a-5p、TLR4 mRNA、MyD88 mRNA、IL-6和TNF-α表达显著下降(均P<0.01),IFN-γ和IL-4表达显著增加(均P<0.01)。结论蛇伤胶囊抑制竹叶青蛇伤造成的炎症反应,维持Th1/Th2细胞平衡,其作用机制可能与抑制miR-155/TLR4/MyD88轴的表达有关。

LncRNA UNC5B-AS1通过调控Toll样受体信号通路对宫颈癌细胞增殖及上皮间质转化的影响

目的探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)UNC5B-AS1对宫颈癌细胞增殖及上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响。方法利用GEO和TCGA数据库进行差异表达分析,采用qRT-PCR在正常与癌变宫颈组织中进行验证,筛选出差异表达lncRNA UNC5B-AS1。在宫颈癌细胞株中转染lncRNA UNC5B-AS1干扰和过表达质粒,通过平板克隆、CCK-8、EdU实验检测lncRNA UNC5B-AS1对宫颈癌细胞增殖的影响;通过Transwell实验检测其对宫颈癌细胞迁移、侵袭能力的影响;通过Western blot检测EMT相关蛋白E-Cadherin、N-Cadherin、Vimentin的表达水平;通过转录组测序得到lncRNA UNC5B-AS1调控的信号通路,验证其相关基因的表达水平。结果RNA微阵列和生物信息学分析显示,lncRNA UNC5B-AS1在宫颈癌中的表达水平明显高于正常宫颈组织,并与患者的总生存时间相关。与阴性对照组相比,敲低lncRNA UNC5B-AS1可降低宫颈癌细胞增殖、迁移、侵袭,而过表达则促进宫颈癌细胞增殖、迁移及侵袭。Western blot显示,lncRNA UNC5B-AS1能调控宫颈癌细胞EMT。转录组测序表明lncRNA UNC5B-AS1能调控Toll样受体(Toll-like receptor,TLR)信号通路。qRT-PCR及Western blot结果提示,敲低及过表达lncRNA UNC5B-AS1组中TLR相关基因IL6、TICAM2表达水平明显改变(P<0.05)。结论LncRNA UNC5B-AS1在宫颈癌中高表达,高表达lncRNA UNC5B-AS1可通过增强TLR信号通路活性,促进宫颈癌细胞增殖及EMT能力。

LEASO患者血清miR-21、miR-126水平与HMGB1/TLR4信号通路活性和术后复发的关系

目的 探讨股腘型下肢动脉硬化闭塞症(LEASO)患者血清微小核糖核酸(miR)-21、miR-126水平与高迁移率族蛋白B1(HMGB1)/Toll样受体4(TLR4)信号通路活性和术后复发的关系。方法 选取行介入手术的股腘型LEASO患者120例,根据术后是否复发将股腘型LEASO患者分为复发组和未复发组。RF-qPCR剂检测血清miR-21、miR-126表达和外周血单个核细胞HMGB1 mRNA、TLR4 mRNA表达。采用Pearson相关性分析法分析股腘型LEASO患者血清miR-21、miR-126与外周血单个核细胞HMGB1 mRNA、TLR4 mRNA表达的相关性。多因素Logistic回归分析股腘型LEASO患者介入术后复发的影响因素。结果 120例股腘型LEASO患者随访2年,术后复发率为34.17%。与未复发组比较,复发组血清miR-21和外周血单个核细胞HMGB1 mRNA、TLR4 mRNA表达升高,血清miR-126表达降低(P均<0.05)。Pearson相关性分析显示,股腘型LEASO患者血清miR-21与外周血单个核细胞HMGB1 mRNA、TLR4 mRNA表达呈正相关(r分别为0.660、0.649,P均<0.05),miR-126与外周血单个核细胞HMGB1 mRNA、TLR4 mRNA表达呈负相关(r分别为-0.632、-0.641,P均<0.05),外周血单个核细胞HMGB1mRNA与TLR4 mRNA表达呈正相关(r=0.742,P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,高血压、糖尿病和miR-21、HMGB1 mRNA、TLR4 mRNA升高为股腘型LEASO患者介入术后复发的独立危险因素,miR-126升高为独立保护因素(P均<0.05)。结论 股腘型LEASO患者血清miR-21高表达和miR-126低表达与HMGB1/TLR4信号通路激活有关,是股腘型LEASO患者术后复发的独立影响因素。

沙棘黄酮通过调控TLR4/NF-κB信号通路改善大鼠多囊卵巢综合征的作用

目的:探究沙棘黄酮改善大鼠多囊卵巢综合征(polycystic ovarian syndrome,PCOS)的作用及机制,为PCOS的防治提供新的思路。方法:采用高脂饲料联合灌胃来曲唑法复制PCOS模型,并随机分为模型组、低、高剂量沙棘黄酮组(200、400 mg/kg)及二甲双胍组(100 mg/kg),灌胃21 d后检测相关指标变化。结果:与模型组比较,低、高剂量沙棘黄酮组大鼠卵巢指数、发情间期时像百分率、空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)含量、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、血清促黄体生成素(LH)活性及睾酮(T)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、C反应蛋白(CRP)含量显著降低(P<0.05,P<0.01),促卵泡刺激素(FSH)活性极显著增加(P<0.01);低、高剂量沙棘黄酮组大鼠卵巢组织病理形态有所改善,Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88(My D88)、核转录因子κBp65(NF-κBp65)mRNA及TLR4、MyD88、p-NF-κBp65蛋白表达显著降低(P<0.05,P<0.01)。结论:沙棘黄酮可以改善PCOS大鼠症状,减轻胰岛素抵抗,调节性激素水平,修复卵巢组织病理改变,其机制与抑制TLR4/NF-κB信号通路介导的炎症反应有关。

Toll样受体信号通路在OSAS及其并发症发生发展中的作用和作用机制研究进展

阻塞性睡眠呼吸暂停综合征(OSAS)是一种多发的临床疾病,常并发多种器官损伤。炎症反应在OSAS及其并发症的发生发展过程中发挥重要作用。Toll样受体(TLRs)是模式识别受体(PRRs),可特异地识别病原体相关分子模式(PAMP),导致细胞内信号转导通路的活化,促进体内炎症介质的释放(CRP、IL-6、TNF-α和IFN-γ等),激活免疫炎性反应。TLRs在OSAS及其并发症患者组织细胞中异常表达,可以通过TLR/MyD88通路促进软腭血管生成、扁桃体肥大等参与OSAS的发生发展;还能够通过损害海马神经元自噬功能等损伤OSAS患者认知功能;通过损伤内皮细胞、刺激泡沫细胞形成等参与OSAS并发心血管损伤的发生发展;通过诱导肾促炎巨噬细胞和成纤维细胞募集等参与OSAS并发肾损伤的发生发展;通过促进炎症因子增多、干扰Treg/Th17平衡等参与OSAS并发肝损伤的发生发展;通过改变肺泡形态及功能等参与OSAS并发肺损伤的发生发展;通过诱导胰岛素抵抗等参与OSAS并发代谢异常的发生发展。

SGLT2抑制剂联合新活素治疗高血压伴心力衰竭的疗效及对患者TLR4/NF-κB信号通路指标的影响

目的研究钠-葡萄糖协同转运蛋白2(SGLT2)抑制剂(达格列净)联合新活素治疗高血压伴心力衰竭(心衰)的临床效果及对患者外周血单核细胞Toll样受体4/核转录因子-κB(TLR4/NF-κB)信号通路指标的影响。方法前瞻性选取2021年5月至2023年6月郑州大学第一附属医院收治的138例高血压伴心衰患者作为研究对象,采用随机数表法分为对照组、单一组和联合组各46例。对照组接受常规基础治疗,单一组在此基础上接受新活素治疗,联合组在此基础上接受达格列净联合新活素治疗。治疗7 d后比较三组患者的临床疗效,以及治疗前后的心功能[左室收缩末期内径(LVESD)、左室射血分数(LVEF)、心率(HR)]、运动耐力[6 min步行试验距离(6 MWT)]、血压[收缩压(SBP)、舒张压(DBP)]、氧化应激指标[丙二醛(MDA)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)]和TLR4/NF-κB信号通路相关指标[TLR4、NF-κB、白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)],同时比较三组患者的不良反应发生情况。结果联合组患者的治疗总有效率为95.65%,明显高于单一组的86.96%和对照组的73.91%,差异均有统计学意义(P<0.05);治疗后,联合组患者的LVEF、6 MWT分别为(43.28±3.16)%、(336.48±32.49)m,明显高于单一组的(40.54±2.68)%、(306.45±40.26)m和对照组的(38.07±2.89)%、(280.69±36.98)m,LVESD、HR分别为(35.29±4.26)mm、(71.34±3.62)次/min,明显低于单一组的(38.75±3.64)mm、(74.25±3.59)次/min和对照组的(42.36±4.05)mm、(76.46±3.98)次/min,且单一组变化幅度大于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);治疗后,联合组患者的SBP、DBP分别为(110.36±5.02)mmHg、(81.42±2.56)mmHg,明显低于单一组的(114.83±4.76)mmHg、(84.39±2.88)mmHg和对照组的(117.25±5.18)mmHg、(86.05±2.62)mmHg,且单一组低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);治疗后,联合组患者的GSH-Px、CAT分别为(105.24±20.29)U/g·Hb、(148.35±32.46)U/mL,明显高于单一组的(90.35±19.45)U/g·Hb、(125.64±26.49)U/mL和对照组的(84.49±17.32)U/g·Hb、(103.29±25.38)U/mL,MDA为(7.39±2.56)mmol/L,明显低于单一组的(11.35±2.95)mmol/L和对照组的(13.08±2.72)mmol/L,且单一组变化幅度大于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);治疗后,联合组患者的TLR4 mRNA、NF-κB mRNA、IL-1βmRNA、IL-6 mRNA、TNF-αmRNA明显低于单一组和对照组,且单一组低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);三组患者的不良反应总发生率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论SGLT2抑制剂联合新活素治疗高血压伴心衰能有效改善患者的氧化应激水平,调节TLR4/NF-κB信号通路,恢复患者血压与心功能,临床应用效果显著,且安全性较高。

吴茱萸碱调节HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路对脑梗死大鼠神经炎症的影响

目的:探讨吴茱萸碱调节高迁移率族蛋白B1(HMGB1)/Toll样受体4(TLR4)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路对脑梗死大鼠神经炎症的影响。方法:采用大脑中动脉栓塞法构建脑梗死大鼠模型,随机分为模型组、吴茱萸碱低剂量组、吴茱萸碱高剂量组、吴茱萸碱高剂量+空载质粒组、吴茱萸碱高剂量+HMGB1过表达组,每组15只,另选取15只健康大鼠设为假手术组,以吴茱萸碱和质粒分组处理后,采用改良神经功能缺损评分(mNSS)评估大鼠神经损伤;三苯基氯化四氮唑(TTC)染色检测大鼠脑梗死面积;末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)染色检测大鼠海马神经元凋亡率;透射电镜观察大鼠海马神经元超微结构;酶联免疫吸附法(ELISA)检测大鼠血清及脑组织促炎因子环氧化酶-2(COX-2)、白细胞介素-18(IL-18)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)水平;蛋白免疫印迹法检测大鼠脑组织HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路蛋白表达。结果:与假手术组比较,模型组大鼠海马神经元超微结构发生损伤,mNSS评分、脑梗死面积、海马神经元凋亡率、血清与脑组织COX-2、IL-18、iNOS水平、脑组织HMGB1、TLR4蛋白表达及p-NF-κB p65/NF-κB p65明显升高(P<0.05);与模型组比较,吴茱萸碱低剂量组、吴茱萸碱高剂量组、吴茱萸碱高剂量+空载质粒组大鼠海马神经元超微结构损伤均减轻,mNSS评分、脑梗死面积、海马神经元凋亡率、血清与脑组织COX-2、IL-18、iNOS水平、脑组织HMGB1、TLR4蛋白表达及p-NF-κB p65/NF-κB p65均降低(P<0.05);吴茱萸碱高剂量组大鼠海马神经元超微结构损伤较吴茱萸碱低剂量组进一步减轻,mNSS评分、脑梗死面积、海马神经元凋亡率、血清与脑组织COX-2、IL-18、iNOS水平、脑组织HMGB1、TLR4蛋白表达及p-NF-κB p65/NF-κB p65进一步降低(P<0.05)。与吴茱萸碱高剂量组比较,吴茱萸碱高剂量+HMGB1过表达组大鼠海马神经元超微结构损伤加重,mNSS评分、脑梗死面积、海马神经元凋亡率、血清与脑组织COX-2、IL-18、iNOS水平、脑组织HMGB1、TLR4蛋白表达及p-NF-κB p65/NF-κB p65升高(P<0.05)。结论:吴茱萸碱可通过阻止HMGB1/TLR4/NF-κB信号激活而降低促炎因子表达,从而抑制神经炎症,减轻脑梗死大鼠神经功能损伤。

基于TLR4炎症信号通路探讨针灸对颈性眩晕大鼠中缝背核神经元细胞活性及血管活性物质的影响

目的基于Toll样受体(TLR)4炎症信号通路探讨针灸对颈性眩晕大鼠中缝背核神经元细胞活性及血管活性物质的影响。方法选取40只SPF级SD雄性大鼠随机分为正常(N)组、模型(M)组、针灸(A)组、西比灵(W)组,每组10只,M、A、W组采用颈椎失稳法建立颈性眩晕模型,N组不建立该模型,建模成功后,对A组给与针灸治疗,对W组灌胃盐酸氟桂利嗪(西比灵)0.5 mg/kg,N、M组灌胃同体积生理盐水,记录各组一般情况,平衡木实验测定行为学,TUNEL法测定缝背核神经元细胞活性,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血管活性物质,Western印迹检测TLR4蛋白表达。结果N组皮毛光泽,活动自如,一般情况均正常,对外界刺激也反应灵敏,M组皮毛光泽可见降低,且活动明显受限,颈部活动受限最为明显,进食、进水量明显减少,对外界刺激反应可见明显降低,而与M组相比,A、W组一般情况明显改善,饮食逐渐恢复正常,颈部活动也明显恢复;与N组相比,M组平衡木得分显著降低(P<0.05);与M组比较,A、W两组平衡木得分显著升高(P<0.05);W组与A组相比无明显差异(P>0.05);与N组相比,M组中缝背核神经元细胞凋亡显著升高(P<0.05);与M组比较,A、W两组中缝背核神经元细胞凋亡显著降低(P<0.05);W组与A组相比无明显差异(P>0.05);与N组相比,M组血浆中降钙素基因相关肽(CGRP)水平显著降低,内皮素(ET)-1、血栓素(TXB)2、神经肽(NP)Y水平显著升高(P<0.05);与M组比较,S、W两组血浆中CGRP水平显著升高,ET-1、TXB2、NPY水平显著降低(P<0.05);W组与A组相比无明显差异(P>0.05);与N组相比,M组脑组织中TLR4蛋白表达显著升高(P<0.05);与M组比较,A、W两组脑组织中TLR4蛋白表达显著降低(P<0.05);W组与A组相比无明显差异(P>0.05);T组与W组相比无明显差异(P>0.05);U组比T组明显降低(P<0.05)。结论针灸可显著抑制颈性眩晕大鼠中缝背核神经元细胞活性并有效调控血管活性物质水平,其作用机制可能与抑制TLR4炎症信号通路有关。

吡咯烷二硫代甲酸铵通过抑制Toll样受体4/核因子κB信号通路改善脂多糖诱导的脓毒症大鼠心肌纤维化

目的探讨脓毒症大鼠心肌纤维化和Toll样受体4(TLR4)/核因子κB(NF-κB)信号通路的关系及吡咯烷二硫代甲酸铵(PDTC)对脂多糖刺激的大鼠心肌成纤维细胞的干预作用。方法将大鼠原代心肌成纤维细胞复苏后,等待细胞贴壁生长至镜下视野内贴壁细胞大于90%后,按1∶3的比例传代培养。采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测第3代细胞在不同浓度脂多糖和PDTC干预下的细胞增殖活力。传代培养并取第3代细胞分为对照组、脂多糖组、PDTC组,对照组细胞培养瓶内加入50μl的二甲基亚砜(DMSO)和4950μl的完全培养基,脂多糖组细胞培养瓶内加入50μl的DMSO和4900μl的完全培养基以及1 mg/L的脂多糖原液50μl,PDTC组加入10 mmol/L的PDTC溶液50μl和4900μl的完全培养基以及1 mg/L的脂多糖原液50μl。比较各组细胞增殖活力和炎症介质水平。采用蛋白质印迹法检测大鼠心肌成纤维细胞中TLR4、NF-κB-p65和磷酸化NF-κB-p65(p-NF-κB-p65)、转化生长因子β1(TGF-β1)蛋白表达水平。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)法检测Ⅰ型胶原和TGF-β1的mRNA相对表达量。结果以脂多糖浓度为0 mg/L的对照组细胞增殖活力为参照,其他不同浓度脂多糖组的细胞增殖活力均高于对照组(均P<0.001)。以含1 mg/L脂多糖的完全培养基为基础再使用不同浓度的PDTC干预24 h,结果显示各浓度PDTC组细胞增殖活力均明显低于脂多糖组(均P<0.001)。脂多糖组IL-6和TNF-α蛋白表达水平均明显高于对照组[(2.02±0.37)比(1.00±0.00)、(2.00±0.38)比(1.00±0.00)](均P<0.05),PDTC组IL-6和TNF-α蛋白表达水平[(1.05±0.19)、(0.72±0.40)]均明显低于脂多糖组(均P<0.05)。脂多糖组TLR4/NF-κB信号通路TLR4蛋白表达水平及p-NF-κB-p65/NF-κB-p65比例均明显高于对照组[(1.51±0.06)比(1.00±0.00)、(1.96±0.38)比(1.00±0.00)](均P<0.05)。PDTC组TLR4蛋白表达水平及p-NF-κB-p65/NF-κB-p65比例[(0.88±0.24)、(0.72±0.40)]均明显低于脂多糖组(均P<0.05)。脂多糖组TGF-β1蛋白和mRNA表达水平及Ⅰ型胶原mRNA表达水平均明显高于对照组[(2.18±0.24)比(1.00±0.00)、(1.24±0.25)比(1.00±0.00)、(4.70±0.52)比(1.00±0.00)](均P<0.05)。PDTC组TGF-β1蛋白和mRNA表达水平及Ⅰ型胶原mRNA表达水平[(1.52±0.29)、(1.12±0.02)、(2.28±0.66)]均明显低于脂多糖组(均P<0.05)。结论PDTC可抑制TLR4/NF-κB信号通路,降低脂多糖刺激的大鼠心肌成纤维细胞的增殖以及炎症介质和纤维化标志物的表达,进而抑制纤维化进程。

吴茱萸碱对溃疡性结肠炎大鼠HMGB1/TLR-4/NF-κB信号通路的影响

目的探究吴茱萸碱对溃疡性结肠炎(UC)大鼠高迁移率族蛋白(HMG)B1/Toll样受体(TLR)-4/核因子(NF)-κB信号通路的影响。方法制备UC模型采用三硝基苯磺酸(TNBS)/乙醇混合法,将建模成功的50只SD大鼠随机分为5组(n=10),模型组、阳性对照组(0.6 g/kg柳氮磺吡啶片)和吴茱萸碱低、中、高(10、15、20 mg/kg吴茱萸碱)剂量组,另取健康SD大鼠10只为正常组。治疗1 w后,观察各组大鼠的一般情况、结肠组织形态学损伤,苏木素-伊红(HE)染色观察结肠组织的病理学损伤情况;酶联免疫吸附试验检测结肠组织匀浆液中白细胞介素(IL)-6、IL-10、肿瘤坏死因子(TNF)-α含量;Western印迹检测结肠组织中IL-6、IL-10、TNF-α、HMGB1、TLR-4、NF-κB p-p65、NF-κB p65蛋白表达水平。结果与正常组相比,模型组精神倦怠、嗜睡、大便黏腻、肛周污秽、体质量减轻,结肠黏膜明显出现充血、水肿、糜烂情况,肠黏膜损伤评分显著升高,杯状细胞数量减少,有大量炎症细胞浸润,肠长明显缩短、肠重显著增加(P<0.05),MDA、IL-6、TNF-α含量及IL-6、TNF-α、HMGB1、TLR-4、NF-κB p-p65/NF-κB p65蛋白表达水平显著升高,SOD含量及IL-10蛋白表达水平显著降低(P<0.05);与模型组相比,阳性对照组和吴茱萸碱各剂量组一般情况明显好转,肠黏膜组织充血、水肿、糜烂情况减轻,肠黏膜损伤评分显著降低,杯状细胞数量增多、炎症细胞减少,肠长明显增长、肠重显著减轻(P<0.05),MDA、IL-6、TNF-α含量及IL-6、TNF-α、HMGB1、TLR-4、NF-κB p-p65/NF-κB p65蛋白表达水平显著降低,SOD含量及IL-10蛋白表达水平显著升高(P<0.05);吴茱萸碱高剂量组与阳性对照组以上指标无显著性差异(P>0.05);吴茱萸碱各剂量组随着剂量的升高,以上各个指标变化呈剂量依赖性(P<0.05)。结论吴茱萸碱能够缓解UC大鼠肠黏膜损伤,减轻结肠组织炎症反应、氧化应激水平,抑制HMGB1/TLR-4/NF-κB信号通路激活可能为其作用机制。

多囊卵巢综合征伴胰岛素抵抗相关信号通路的研究进展

多囊卵巢综合征(PCOS)是一种好发于青春期及育龄期女性的涉及诸多因素的内分泌代谢性疾病,临床主要表现为闭经、体胖、多毛痤疮以及妊娠率显著降低,但目前其病因病机尚不清楚。胰岛素抵抗(IR)与多种慢性非传染性疾病(高血压、糖尿病、心脑血管疾病、PCOS等)相关,目前已知磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B、肝激酶B1/AMP活化的蛋白激酶、沉默信息调节因子1/叉头框转录因子O1、Toll样因子4/核因子κB信号通路参与了PCOS伴IR(PCOS-IR)的作用机制,因此充分认识PCOS-IR的发病机制在疾病预防中有重要临床意义。

Toll样受体信号通路中MyD88的研究进展

MyD88是Toll样受体信号通路中的重要转导蛋白,其依赖的信号通路以及调控的基因产物在固有免疫和适应性免疫中均发挥着关键作用。本文对MyD88及其依赖的信号通路做一简要综述,以期为临床预防和治疗疾病提供新的思路和方法。

Toll样受体9信号通路在重症急性胰腺炎大鼠肠黏膜屏障功能障碍中的作用

目的探讨Toll样受体9(TLR9)信号通路在重症急性胰腺炎(SAP)大鼠肠黏膜屏障功能障碍发病过程中的作用。方法 24只SD大鼠随机分成观察组(n=18)和对照组(n=6)。观察组采用牛磺胆酸钠逆行注射胰胆管诱导SAP模型,对照组采用生理盐水代替牛磺胆酸钠胰胆管注射。观察组分别在造模后6、12、24 h活杀,每个时间点活杀6只,对照组造模后24 h活杀,分别取回肠黏膜组织检测TLR9的表达情况和核因子-κB(NF-κB)的活性,取外周静脉血测定血清淀粉酶(AMS)、二胺氧化酶(DAO)、D-乳酸(D-Lac)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)水平,取胰腺和小肠组织进行病理评分,比较两组各项指标的差异。结果观察组各时间点小肠组织TLR9表达和NF-κB活性均显示高于对照组(P<0.05),血清AMS、DAO、D-Lac、TNF-α和IL-6水平也明显高于对照组(P<0.05),胰腺组织和小肠组织病理评分也明显高于对照组(P<0.05)。TLR9与NF-κB有较高的相关性(r=0.619,P<0.05),NF-κB与TNF-α也有较高的相关性(r=0.683,P<0.05)。结论 TLR9信号通路通过调节炎症介质水平,在SAP大鼠的肠黏膜屏障功能障碍发病过程中起着重要作用。