Toll样受体-3在干细胞成骨各阶段作用的贯续性

目的探索在骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨过程各阶段中Toll样受体-3(TLR-3)的作用及变化趋势。方法全骨髓培养法分离原代大鼠BMSCs,流式细胞术鉴定,常规传代。取第3代细胞,分为TLR-3激活组和空白对照组,TLR-3激活组以Poly(I:C)激活(1μg/mL),空白对照组加入等体积PBS。成骨诱导培养2周,Western blot检测Ⅰ型胶原(Collagen-Ⅰ)和骨钙素(Osteocalcin)的表达。取第3代成骨细胞,同法分组后矿化诱导培养10d,碱性磷酸酶(ALP)和茜素红染色,观察染色强度。结果全骨髓培养法获得原代大鼠BMSCs,CD44、CD29、CD95和HLA-Ⅰ表达阳性,CD14、CD34表达阴性。TLR-3激活组Collagen-Ⅰ和Osteocalcin表达均强于空白对照组。TLR-3激活组ALP和茜素红染色均强于空白对照组。结论在BMSCs成骨的过程中,TLR-3能够促进BMSCs向成骨细胞分化,并促进成骨细胞矿化,作用呈贯续性。

头颈部鳞癌中Toll样受体-3的表达及意义

[目的]探讨Toll样受体-3(TLR3)在人类头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)的表达,及其与NF-κB的关系。[方法]运用Westernblot检测7种HNSCC细胞株、HNSCC组织和癌旁组织、白斑和正常的口鼻腔黏膜中TLR3和NF-κB蛋白的表达。[结果]在HNSCC细胞株中TLR3和NF-κB均表达;在HNSCC组织中TLR3表达率为70%,并与NF-κB的表达呈正相关(r=0.952,P<0.001);在癌旁组织、白斑和正常口鼻腔黏膜中均不表达TLR3。[结论]TLR3可能与头颈部肿瘤的形成有关,有可能为肿瘤治疗提供潜在的新靶点。

Toll样受体-3在人肺腺癌细胞中的表达及意义

目的探讨Toll样受体-3（TLR3）在人肺腺癌细胞（A549细胞）和人支气管上皮细胞（HBE细胞）中的表达及意义。方法体外培养A549细胞和HB_E细胞，采用细胞免疫组织化学技术检测TLR3在2种细胞中的表达；采用实时定量聚合酶链反应（Real—timePCR）检测TLR3mRNA在2种细胞中的表达；利用Westernblot检测TLR3蛋白的表达。结果细胞免疫组织化学染色显示TLR3主要表达于两种细胞的胞膜和胞质中，呈棕黄色颗粒状，A549细胞中TLR3mRNA的表达相对值为1．01680±0．02376，高于HBE细胞，后者为0．04780±0．01792，TLR3蛋白在A549细胞中的表达相对值为0．31930±0．01116，高于HBE细胞，后者为0．16070±0．00303（P〈0．01）。结论TLR3在A549细胞中表达高于HBE细胞，提示TLR3可能参与促进人肺腺癌细胞的生长进展过程。

柯里拉京对小鼠单纯疱疹病毒性脑炎Toll样受体3-干扰素诱导链接蛋白通路的调控机制研究

目的:通过柯里拉京(Cor)干预单纯疱疹病毒性脑炎(HSE)小鼠模型,阐明柯里拉京对Toll样受体3(TLR3)信号通路的调控机制。方法:通过颅内注射单纯疱疹病毒1型(HSV1)建立单纯疱疹病毒性脑炎小鼠模型,每天定时灌胃1次等体积的柯里拉京或生理盐水,在第5天断头处死小鼠,取出右侧颞叶病变脑组织进行苏木精-伊红(HE)染色,在显微镜下观察小鼠脑组织病理改变,通过定时定量PCR检测TLR3及其下游信号分子TLR结构域的干扰素诱导链接蛋白(TRIF)mRNA的表达情况,Western blot检测TLR3、TRIF蛋白表达情况,ELISA法检测炎性组织细胞内干扰素α(IFN-α)的分泌情况。结果:HSE小鼠模型中TLR3及其下游分子TRIF的mRNA、蛋白表达及IFN-α的分泌均高于正常对照组(P<0.01);柯里拉京干预可有效缓解动物脑组织的病理变化,且TLR3及其下游分子TRIF的mRNA、蛋白表达及IFN-α的分泌均低于正常对照组(P<0.01)。结论:柯里拉京能明显抑制小鼠小胶质细胞内TLR3通路达到缓解单纯疱疹病毒1型引起的脑组织的损伤。

木犀草素通过TLR4/PI3K/AKT通路对子痫前期大鼠胎盘血管生成及细胞凋亡的影响

目的:探究木犀草素通过Toll样受体4(TLR4)/磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)通路对子痫前期(PE)大鼠胎盘血管生成及细胞凋亡的影响。方法:SD大鼠随机分为对照组、模型组、木犀草素(40 mg/kg)组、TLR4过表达载体组、TLR4空载组、木犀草素(40 mg/kg)+TLR4过表达载体组,每组12只,除对照组外,其余各组大鼠皮下注射L-精氨酸甲酯(LNAME)制备PE模型,以药物分组处理后,测定各组大鼠妊娠晚期平均动脉压及24 h尿蛋白含量,检测各组大鼠平均子代数目、平均子代体质量、胎盘组织CD31(血管标志物)阳性细胞比例、胎盘细胞凋亡比例,血清炎症因子IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-17水平及胎盘组织凋亡相关蛋白、TLR4/PI3K/AKT通路蛋白表达。结果:与对照组相比,模型组大鼠平均动脉压、24 h尿蛋白含量、胎盘细胞凋亡比例、血清IL-6、TNF-α及IL-17水平、胎盘组织p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、TLR4、BCL2相关X蛋白(Bax)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)蛋白水平显著升高(P<0.05),平均子代数目、平均子代体质量、胎盘组织CD31阳性细胞比例、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。与模型组、木犀草素+TLR4过表达载体组分别相比,木犀草素组大鼠平均动脉压、24 h尿蛋白含量、胎盘细胞凋亡比例、血清IL-6、TNF-α及IL-17水平、胎盘组织p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、TLR4、Bax、caspase-3蛋白水平均显著降低(P<0.05),平均子代数目、平均子代体质量、胎盘组织CD31阳性细胞比例、Bcl-2蛋白表达均显著升高(P<0.05),TLR4过表达载体组大鼠平均动脉压、24 h尿蛋白含量、胎盘细胞凋亡比例、血清IL-6、TNF-α及IL-17水平、胎盘组织p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、TLR4、Bax、caspase-3蛋白水平均显著升高(P<0.05),平均子代数目、平均子代体质量、胎盘组织CD31阳性细胞比例、Bcl-2蛋白表达均显著降低(P<0.05)。与模型组相比,TLR4空载组大鼠各指标水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论:木犀草素可通过下调TLR4/PI3K/AKT通路表达,降低PE大鼠平均动脉压,缓解妊娠后期高血压与蛋白尿症状,抑制炎症,增强胎盘血管生成,减轻胎盘组织损伤及细胞凋亡,提高妊娠大鼠子代存活率。

重症手足口病脑炎患儿脑脊液TLR3/NF-κB信号通路蛋白表达及其诊疗价值

目的 探究重症手足口病并发脑炎患儿脑脊液中Toll样受体3(TLR3)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路蛋白表达及其诊疗价值。方法 选择2018年6月-2020年6月海口市妇幼保健院收治的117例重症手足口病并发脑炎患儿为研究组,以同期重症手足口病患儿78例为对照组,检测两组TLR3、NF-κB、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6、IL-1β水平,分析TLR3/NF-κB信号通路相关指标诊断重症手足口病并发脑炎及其预后的临床价值。结果 研究组TLR3、NF-κB、TNF-α、IL-6、IL-1β水平高于对照组(P<0.05),TLR3、NF-κB、TNF-α、IL-6、IL-1β水平诊断重症手足口病患儿并发脑炎的曲线下面积(AUC)分别为0.742、0.708、0.718、0.787、0.627,预后不良组TLR3、NF-κB、TNF-α、IL-6、IL-1β水平高于预后较好组(P<0.05),TLR3、NF-κB、TNF-α、IL-6、IL-1β水平预测不良预后的AUC分别为0.813、0.619、0.616、0.726、0.730。结论 重症手足口病并发脑炎患儿脑脊液中TLR3/NF-κB信号通路相关指标水平均升高,且TLR3、IL-6、IL-1β水平对不良预后具有较高的诊断价值。