Toll样受体10基因rs10004195位点多态性与Hp感染以及相关疾病的关系

目的探讨Toll样受体10(TLR10)基因rs10004.195位点多态性与幽门螺杆菌(Hp)感染以及相关疾病的关系。方法收集行胃镜活检的患者652例,同时采集患者外周血标本。采用免疫胶体金法检测患者外周血中Hp抗体,DNA直接测序方法检测TLR10基因rs10004195位点基因型。结果 TLR10基因rs10004195位点AA、TT和AT基因型分别为30.98%、20.71%、48.31%;Hp抗体阳性组TT基因型频率明显高于Hp抗体阴性组(P<0.05)。Hp抗体阳性组中各疾病组与对照组基因型分布的比较,以及Hp抗体阴性组中各疾病组与对照组基因型分布的比较,差异均无统计学意义。结论 TLR10基因rs10004195位点多态性与Hp感染有易感相关性,而与Hp感染相关疾病无相关性。

Toll样受体10基因启动子区rs10004195基因多态性与幽门螺杆菌感染的相关性分析

目的探讨Toll样受体10（TLR-10）基因启动子区rs10004195基因多态性与幽门螺杆菌（H.pylori）感染的相关性。方法选取13C-尿素呼气试验确诊的H.pylori阳性201例与阴性182例,用测序方法检测TLR10启动子区rs10004195基因型。结果病例rs10004195基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡（P〉0.05）。H.pylori阳性组AA基因型频率（26.9%）明显高于H.pylori阴性组（18.1%）（χ2=4.150,P〈0.05,OR=1.66,95%CI：1.02~2.71）。结论 TLR10启动子区rs10004195基因多态性与H.pylori的易感性有关,AA基因型者易感染H.pylori。

Toll样受体10基因多态性与甲状腺乳头状癌的相关性

目的：探讨Toll样受体10（TLR10）基因rs11466653、rs11096956、rs11096955位点基因多态性与甲状腺乳头状癌（PTC）的相关性。方法分别选择甲状腺乳头状癌患者86例作为病例组，结节性甲状腺肿患者84例作为对照组，用Hardy-Weinberg平衡检验样本群体代表性，采用单链测序方法对TLR10基因rs11466653、rs11096956、rs11096955位点的基因多态性进行检测。结果 TLR10基因rs11096956位点在两组对比中发现T等位基因频率在病例组与对照组中分别为0.58和0.43，差异有统计学意义，OR（95%CI）=1.81（1.18，2.78），P=0.007；rs11466653、rs11096955位点的基因型及等位基因频率在病例组和对照组之间差异均无统计学意义（P〉0.05）。病例组T-G-C单体型频率与对照组对比分别为0.052，0.12，差异有统计学意义，OR（95%CI）=0.41（0.18，0.92），P=0.027；病例组T-T-C单体型频率与对照组对比分别为0.51，0.38，差异有统计学意义，OR（95%CI）=1.71（1.11，2.63），P=0.015。结论在甲状腺存在结节的患者中，TLR10基因rs11096956位点T等位基因可能是发生甲状腺乳头状癌的易感因子，T-G-C单体型可能是甲状腺乳头状癌的保护标记，T-T-C单体型可能是甲状腺乳头状癌的易感标记。

湖北人群Toll样受体4基因多态性研究

目的 研究湖北人群Toll样受体 4 (TLR4 )Asp2 99Gly和Thr399Ile基因多态性分布特征。 方法 采用等位基因特异性聚合酶链反应 (ASPCR) 限制酶片断长度多态性 (RFLP)检测TLR4Asp2 99Gly和Thr399Ile基因多态性。结果 在所有的 2 5 3例中国湖北人群样本中 ,没有检测到TLR4Asp2 99Gly和Thr399Ile基因多态性存在。 结论 TLR4基因多态性在不同地区和人群发生的频率是不同的 ,与白种人相比 ,中国湖北人群的TLR4Asp2 99Gly和Thr399Ile的基因多态性非常罕见。

Toll样受体2与白介素-10在痤疮瘢痕形成过程中的作用及相关性

痤疮是一种慢性毛囊皮脂腺感染性疾病，轻度痤疮时由于主要以粉刺为临床表现．因此极少形成瘢痕。重度痤疮由于部分正常毛囊皮脂腺已经溶解坏死，最终形成瘢痕。其中炎症反应是痤疮发病的重要原因，痤疮丙酸杆菌是首要致病菌。据相关的组织病理研究显示，有瘢痕形成的痤疮患者皮疹在炎症消退期呈现CDl4＋淋巴细胞过度浸润，提示患者机体免疫应答异常。

失血性休克鼠肺组织Toll样受体基因的表达

目的探讨单纯性失血性休克(无复苏)对肺组织中Toll样受体(TLR)mRNA表达的影响及意义。方法C57BL/6小鼠45只,随机分为失血组、脂多糖(LPS)组(阳性对照组,尾静脉注射LPS5mg/kg)、假手术组(阴性对照组),每组15只。心脏穿刺复制失血性休克模型,在不同时间点取出肺组织,提取总RNA,通过逆转录聚合酶链反应(RTPCR)半定量方法检测肺组织TLR2mRNA和TLR4mRNA的表达水平。结果在失血性休克和LPS刺激后肺出现明显的中性粒细胞浸润、红细胞渗出。正常肺组织中有TLR2mRNA、TLR4mRNA表达;在失血性休克和LPS刺激后0、1、2、4和6h肺组织TLR2mRNA、TLR4mRNA表达均逐渐增加;而假手术组未发生明显改变。结论失血性休克后肺组织TLR2mRNA、TLR4mRNA表达增加与急性肺损伤(ALI)的发生有密切关系,除增强了机体非特异性免疫能力外,同时增加了宿主对随后各种刺激的易感性。过度表达的TLR2、TLR4可能造成组织、器官结构和功能损害。

猪Toll样受体基因的变异及其与支原体肺炎感染的关系

Toll样受体(TLRs)作为重要的模式识别受体,在动物的天然免疫中发挥重要作用,是机体抵抗感染的第一道屏障;TLRs基因变异会改变机体对病原的抗性或易感性,本试验旨在探讨TLR2、TLR4基因突变与支原体肺炎感染的关系。试验以国外引进猪品种(长白、大白、皮特兰)、中国地方猪品种(梅山、二花脸、姜曲海、金华)以及江苏省培育猪品种(苏钟猪)为材料,通过PCR-SSCP技术检测实验猪群TLR2、TLR4基因SNPs分布,结合动物攻毒实验及文献报道,对其中部分SNP不同基因型猪的肺部巨噬细胞做LPS感染实验,借助RT-PCR跟踪不同时间点猪TLR2、TLR4基因以及促炎性因子TNF-α、IL-1β的表达变化,揭示猪Toll样受体基因的变异与支原体肺炎感染的关系。结果表明,本实验猪群TLR4基因存在4个SNP位点:T611A、G960A、G962A、C1027A,其中G960A为同义突变,其余为有义突变;位点C1027A在中、外猪品种间呈现明显的碱基分布差异。LPS诱导下的猪肺部巨噬细胞TLR2、TLR4基因及促炎性因子TNF-α、IL-1β均表现不同程度的表达上调;其中,位点C1027A的CC型猪TLR2、TLR4基因表达水平及增速均显著高于AC型猪(P<0.01),TNF-α、IL-1β的表达水平则显著低于AC型猪(P<0.01),提示C等位基因极可能是猪抗支原体肺炎感染的优势基因。

白念珠菌支气管肺感染大鼠肺组织Toll样受体2和IL-10的表达及意义

目的建立大鼠白念珠菌支气管肺感染模型,观察感染后肺Toll样受体2(TLR2)和IL-10水平的变化,探讨TLR2和IL-10在念珠菌支气管肺感染中的作用及意义。方法建立白念珠菌支气管肺感染大鼠模型,观察感染后肺病理学改变,用免疫组化法检测感染后3 d、7 d肺组织TLR2的表达,应用ELISA法测定肺组织匀浆上清液中IL-10的水平。结果感染后肺组织TLR2和IL-10的水平较对照组比较显著升高(P<0.05),且IL-10随着感染的进程,有升高趋势(P<0.05);但两指标之间无显著统计学相关性(P>0.05)。结论白念珠菌支气管肺感染后肺组织TLR2和IL-10水平升高,可能参与白念珠菌感染的发生和炎症的加重。

脂多糖刺激前后小鼠肺肝脾组织中Toll样等受体基因表达情况

目的 了解脂多糖 (L PS)对肺、肝、脾组织中与 L PS信号转导有关的受体的基因表达情况的影响。方法 L PS刺激前后取小鼠肺、肝、脾组织总 RNA,采用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)半定量测定脂多糖结合蛋白 (L BP)、CD1 4、Toll样受体 2 (TL R2 )、TL R4和肿瘤坏死因子 α(TNFα)等基因的表达情况。结果 正常组织中 ,肺有 TL R2的表达 ,肝有 TL R2、CD1 4、L BP的表达 ,脾有 TL R2的表达 ;注射 L PS后的 5 h内 ,肺组织 TL R2、TL R4、CD1 4和 TNFα,肝组织 TL R2、CD1 4、L PB和 TNFα,脾组织 TL R2、TL R4、CD1 4和TNFα的基因表达均呈逐渐增加趋势。结论 正常情况下 TL R2等基因在不同组织中的表达有差异 ,L PS刺激 5 h内各基因的表达提高 ,从而提高机体对 L PS等病原体模式识别分子的反应性。

Toll样受体及其基因多态性与感染性疾病关系的研究进展

Toll样受体是近年来发现的跨膜信号传递受体,他作为一种重要的模式识别受体(PRRs)在先天免疫中通过对病原体相关的分子模式(PAMPs)的识别发挥作用,通过刺激信号的级联反应诱导炎症因子和细胞因子产生,在抗感染中起重要作用.基因多态性影响机体对疾病的遗传易感性,TLRs的位点多态性与炎性应答损伤和感染性疾病的遗传易感性相关.目前多数研究表明TLR4的Asp299Gly和Thr399Ile,TLR2的Arg753Gln和Arg667Trp多态性与感染性疾病的发生相关,其他TLRs的基因多态性也有研究.本文就TLRs家族的功能及其基因多态性与感染性疾病的关系作一综述.

肺结核患者Toll样受体基因的表达及意义

目的探讨肺结核患者Toll样受体(TLRs)基因及其产物表达的特征并分析吸烟对TLRs基因表达的影响,为肺结核病的辅助诊断、鉴别诊断及免疫治疗提供理论依据。方法选择肺结核患者31例(其中吸烟8例,未吸烟23例)作为患者组及29例健康体检者作为对照组,利用Real time RT-PCR和ELISA方法检测两组人群TLR2、TLR3、TLR4、TLR8 mRNA相对表达量和TLR2、TLR3、TLR4、TLR8血清浓度。结果 (1)患者组TLR2、TLR4、TLR8 mRNA△Ct值显著低于对照组,而TLR3 mRNA△Ct值则显著高于对照组(均P<0.01)。患者组与对照组TLR2、TLR3、TLR4、TLR8 mRNA相对表达倍数变化分别为:8.40、-13.64、2.11、2.83。患者组TLR2、TLR4、TLR8 mRNA相对表达量显著高于对照组,呈现上调表达,而患者组TLR3 mRNA相对表达量则显著低于对照组,呈现下调表达。(2)两组人群TLR2、TLR3、TLR4、TLR8血清浓度差异存在显著性,患者组显著高于对照组(均P<0.01)。(3)患者组中吸烟者与未吸烟者TLR2、TLR3、TLR4、TLR8血清浓度差异均无显著性(均P>0.05),TLR2、TLR3、TLR4、TLR8 mRNA相对表达量差异也无显著性(均P>0.05)。结论 TLR2、TLR4、TLR8 mRNA表达水平是肺结核病诊断的敏感性指标之一,TLR2、TLR4、TLR8 mRNA表达水平和TLR2、TLR3、TLR4、TLR8血清浓度可以作为菌阴肺结核诊断与鉴别诊断的辅助指标。

脂多糖对家蚕幼虫Toll样受体基因BmToll9-2表达的影响

【目的】Toll样受体是昆虫Toll信号传导途径的一个重要组成成员,对激活昆虫机体对入侵病原微生物的先天免疫应答起着至关重要的作用。本研究旨在探究脂多糖对家蚕Bombyx mori幼虫中Toll样受体基因BmToll9-2基因表达的影响。【方法】利用RT-PCR分析BmToll9-2基因在家蚕大造品系4龄和5龄幼虫表皮、脂肪体、马氏管、中肠、神经、丝腺、胸部肌肉共7种组织中的表达特征;将脂多糖和大肠杆菌Escherichia coli注射到5龄幼虫体腔内,诱导其免疫系统响应,采用实时荧光定量PCR分析注射后不同时间BmToll9-2基因在中肠中的表达水平。【结果】RT-PCR结果表明,BmToll9-2基因在家蚕4龄幼虫的脂肪体、马氏管、神经和丝腺中高度表达,在5龄幼虫脂肪体、中肠、马氏管和神经中均有较高表达。实时荧光定量PCR结果显示,注射脂多糖能诱导5龄幼虫中肠中BmToll9-2基因转录,在注射后6 h时的诱导效果最好;注射大肠杆菌也能诱导BmToll9-2基因转录,在注射后3和6 h时的诱导效果最好。【结论】家蚕幼虫BmToll9-2基因在脂多糖和大肠杆菌处理后上调表达,提示BmToll9-2受体可能参与昆虫Toll样受体对脂多糖和细菌的识别过程。

猪Toll样受体2基因的克隆和序列分析

本研究从猪肠系膜淋巴细胞中,克隆了猪Toll样受体2基因(pTLR2)。基因序列分析表明,克隆的pTLR2基因ORF为2358bp,编码785个氨基酸,含15.01%的亮氨酸,含有一段21个氨基酸的信号肽序列;与GenBank中登录的pTLR2序列(NM_213761)的同源性为99.2%;与牛、马、绵羊和人的同源性较高,与家鼠、中国仓鼠相比次之,而与鱼类的最低。蛋白分子结构预测表明,该分子由胞外区(588个氨基酸)、跨膜区(23个氨基酸)和胞内区(174个氨基酸)组成,其胞外结构域由多个串联重复的LRR基序(XLXXLXLXX)组成,而胞内区含有与人白细胞介素1受体(IL-1R)高度同源的区域即TOLL/IL-1受体同源区(TIR),说明pTLR2分子具有病原分子模式识别和信号传导的作用,这为其结构与功能的进一步研究奠定了基础。

中国荷斯坦牛Toll样受体4基因的遗传多态性与体细胞评分的关联分析

试验旨在研究中国荷斯坦牛Toll样受体4(toll-like receptor 4,TLR4)基因的遗传多态性及其与体细胞评分(somatic cell score,SCS)的关联性,寻找与乳房炎相关的分子标记,加快中国荷斯坦牛的抗病育种。利用PCR-RFLP和PCR-SSCP技术对30个公牛家系的610头中国荷斯坦牛TLR4基因进行多态性检测,用最小二乘均数法对TLR4基因的多态位点与SCS进行相关分析。结果发现,试验共检测到2个单核苷酸多态(single nucleotide polymorphisms,SNPs),TLR4基因5′侧翼区存在SNP-226G>C突变,经PCR-RFLP检测发现3种基因型:GG、GC和CC,基因型频率分别为0.208、0.482和0.310;外显子3存在SNP 1760C>T突变,经PCR-SSCP检测发现3种基因型:CC、TC和TT,基因型频率分别为0.738、0.225和0.007,以上2位点均偏离Hardy-Weinberg平衡。对于SNP-226G>C位点,基因型个体的SCS差异不显著;对于SNP 1760C>T位点,CC基因型个体的SCS最小二乘均值极显著低于TT和TC基因型个体(P<0.01)。SNP 1760C>T的CC基因型对于中国荷斯坦牛的SCS有较大的遗传效应,可作为分子标记应用于奶牛乳房炎抗性筛选。

基因芯片研究云芝糖肽对健康成人外周血单个核细胞Toll样蛋白受体信号转导通路的影响

目的利用基因芯片技术检测PSP对健康成人外周血单个核细胞(PBMC)Toll样蛋白信号转导通路的影响,探索云芝糖肽的免疫调节作用机制。方法体外分离、培养健康成人外周血单个核细胞,摸索云芝糖肽的最佳作用浓度,再分为对照组、云芝糖肽组,72h后收获细胞抽提总RNA,应用Toll样蛋白受体信号转导基因芯片检测PSP对健康成人外周血单个核细胞TLRs信号传导通路中相关基因的变化。结果12.5μg/mL的云芝糖肽可显著促进健康成人PBMC增殖转化(P<0.01);经云芝糖肽作用后上调≥2倍的基因有22个,占18.8%(如γ-干扰素、干扰素-γ-诱导蛋白-10等),下调≥2倍的基因有23项,占19.7%(如Toll作用蛋白、共刺激分子CD86等)。结论云芝糖肽可以调节免疫细胞Toll样蛋白受体转导途径中相关基因的表达,为进一步探讨云芝糖肽的免疫调节作用机理提供了依据。

牦牛Toll样受体5基因的克隆及序列分析

根据GenBank中已公布牛Toll样受体5(toll-like receptors 5,TLR5)基因序列,设计全长引物,并对所得序列进行生物信息学分析和预测。基因序列分析结果表明,克隆得到牦牛TLR5基因全长2582bp,开放阅读框2577bp,编码氨基酸858个,N端含有21个氨基酸组成的信号肽,分子质量为97.981ku,理论等电点为4.85;蛋白预测结果表明,TLR5编码蛋白整体表现为亲水性;同源性分析结果表明,牦牛与野牦牛、黄牛、绵羊、山羊等物种具有较高的同源性,在系统发育树中距离最近,说明TLR5基因序列具有较高的保守性。牦牛TLR5基因序列的成功克隆为今后深入研究牦牛及高原动物抗病及免疫机制提供非常重要的理论基础。

Toll样受体-4基因启动子区多态性与急性心肌梗死发病风险的关系

目的探讨Toll样受体-4(TLR4)基因多态性与急性心肌梗死(AMI)发病风险的关系。方法选取AMI患者244例(AMI组)和非AMI患者284例(对照组),采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性技术检测两组TLR4基因启动子区多态性(rs10116253和rs10983755),比较两组TLR4启动子区多态性的基因型分布差异,采用多因素Logistic回归模型分析TLR4基因启动子区多态性与AMI发病风险的关系。结果TLR4基因rs10116253、rs10983755均符合Hardy-Weiberg平衡。TLR4启动子区rs10116253和rs10983755多态性与AMI的总体发病风险无关(P均>0.05)。对于TLR4基因rs10116253多态位点,男性TC突变杂合型携带者AMI的发病风险是TT野生纯合型携带者的0.50倍,TC+CC突变型携带者AMI发病风险是TT野生纯合型携带者的0.51倍,伴有高血脂的TC杂合型携带者AMI发病风险是TT野生纯合型携带者的0.42倍,TC+CC突变型携带者AMI发病风险是TT野生纯合型携带者的0.46倍,差异均有统计学意义(P均<0.05)。TLR4基因rs10983755多态位点在性别、年龄、有无高血压、有无糖尿病及有无血脂异常等分层分析中均未见统计学差异(P均>0.05)。结论TLR4基因启动子区rs10116253多态性与AMI分层发病风险存在关系;rs10116253突变基因型可以降低男性人群、伴有高血脂人群AMI的发病风险。

rno-miR-30b-5p在葡萄膜炎发病过程中对白细胞介素-10和Toll样受体4表达的调控作用

目的探讨rno-miR-30b-5p在葡萄膜炎中对白细胞介素10(interleukin-10,IL-10)和Toll样受体4(toll-like receptor 4,TLR4)表达的调控作用。方法构建IL-10、TLR4基因的3’端非编码区域(3’UTR)荧光素酶质粒载体以及结合位点突变质粒载体,将rnomiR-30b-5p模拟物(mimic)与构建好的报告基因载体共转染293T细胞,通过报告基因相对荧光值的表达改变检测rno-miR-30b-5p对IL-10、TLR4表达的调控作用;制备实验性自身免疫性葡萄膜炎(experimental autoimmune uveitis,EAU)模型,通过注射视网膜光感受器间维生素A类结合蛋白乳糜液,在造模后12 d分离EAU大鼠的脾脏和淋巴结,实时荧光定量PCR检测rno-miR-30b-5p和IL-10、TLR4基因的表达情况;ELISA检测IL-10和TLR4蛋白的表达情况。结果双荧光素酶报告基因表达结果表明,经rno-miR-30b-5p mimic干预后IL-10、TLR4野生型的报告荧光有明显的下调作用,对其预测靶位点进行突变后,突变型载体中的报告荧光也存在明显的下调作用,与阴性对照相比,差异均有统计学意义(均为P<0.01)。实时荧光定量PCR检测结果发现rno-miR-30b-5p在EAU大鼠脾脏和淋巴结中的表达均较对照组明显降低(均为P<0.01),而IL-10 mRNA、TLR4 mRNA表达明显升高(均为P<0.01);ELISA检测发现IL-10、TLR4蛋白表达升高,与对照组相比,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论rno-miR-30b-5p对带有IL-10、TLR4基因片段3’UTR基因表达的调控作用可能不是通过预测到的位点起作用而是通过其他的调控结合位点发挥作用;rno-miR-30b-5p在EAU大鼠脾脏和淋巴结的下调表达导致IL-10和TLR4的表达水平升高,进而调控葡萄膜炎的发展。本研究为进一步探索microRNA在葡萄膜炎发生发展进程中的调控作用、治疗葡萄膜炎奠定了基础。

痛风性关节炎患者外周血白细胞中Toll样受体4表达与基因多态性研究

目的对痛风性关节炎患者外周血白细胞中Toll样受体4(TLR4)表达与基因多态性予以分析,为痛风性关节炎的早期诊断和治疗提供参考。方法选择2015年1月—2016年6月右江民族医学院附属医院确诊为痛风性关节炎患者及同期体检健康者为观察组和对照组,每组各80例。均行外周血白细胞中TLR4表达测定和基因型鉴定并进行比较和评价。结果观察组外周血白细胞中TLR4 mRNA、核因子-κBD65、血浆IL-1β及血尿酸水平均显著高于对照组(P<0.05);观察组GGb、GT及G等位基因b与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),观察组TT和T等位基因均显著高于对照组(P<0.05)。结论痛风性关节炎患者外周血白细胞中TLR4表达与TT和T等位基因均表现出较强的表达及较高的的比率,对临床诊断及治疗具有一定的指导价值。

猪Toll样受体5基因cDNA克隆、蛋白质序列分析及其意义

为了解猪Toll样受体5(TLR5)蛋白的结构特征和进化关系,本研究从肠系膜淋巴结组织总RNA中克隆出猪Toll样受体5基因的cDNA序列。序列全长2641bp,其中2571bp的开放阅读框编码856个氨基酸残基的猪TLR5,含17.4%的亮氨酸,并有一段19个氨基酸的信号肽序列;同源性分析结果显示,TLR5在进化过程中具有高度保守性,与人、牛、山羊、绵羊、小鼠和大鼠的氨基酸序列同源性分别为77.5%、79.6%、78.3%、81.0%、69.2%和68.9%。蛋白分子结构预测结果表明,该分子由胞外区(642个氨基酸)、跨膜区(23个氨基酸)和胞内区(191个氨基酸)组成,胞外区具有LRR结构域,胞内区具有TIR结构域,表现出典型的TLR家族结构特征。表明猪TLR5分子具有病原分子模式识别和信号传导的作用,这为其结构与功能的进一步研究奠定了基础。