血清转化生长因子β1、白细胞介素-6、Toll样受体-4、核转录因子κB联合评估非小细胞肺癌放射性肺炎病情严重程度的价值

目的探讨血清转化生长因子β1(TGF-β1)、白细胞介素-6(IL-6)、Toll样受体-4(TLR-4)和核转录因子κB(NF-κB)联合评估非小细胞肺癌(NSCLC)放射性肺炎(RP)病情严重程度的价值。方法选取104例NSCLC放疗后继发RP患者作为研究组,另选取52例NSCLC放疗后未继发RP患者作为对照组。比较2组患者放疗前后血清TGF-β1、IL-6、TLR-4、NF-κB水平。比较研究组不同程度RP患者放疗前后血清TGF-β1、IL-6、TLR-4、NF-κB水平,分析各血清指标单独及联合评估NSCLC放疗后RP病情程度的价值。结果放疗结束后,研究组患者血清TGF-β1、IL-6、TLR-4、NF-κB水平均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);放疗结束后,随着RP病情程度的增加,研究组患者血清TGF-β1、IL-6、TLR-4、NF-κB水平呈升高趋势,差异有统计学意义(P<0.05)。受试者工作特征(ROC)曲线分析结果显示,放疗结束后血清TGF-β1、IL-6、TLR-4、NF-κB水平评估1级RP的曲线下面积(AUC)分别为0.787、0.718、0.783、0.801,评估≥2级RP的AUC分别为0.729、0.740、0.793、0.825;血清TGF-β1、IL-6、TLR-4、NF-κB阳性表达患者发生≥2级RP的风险分别是阴性表达患者的2.473、2.275、2.610、5.267倍(P<0.05);血清TGF-β1、IL-6、TLR-4、NF-κB联合评估≥2级RP的AUC为0.939,敏感度为76.00%,特异度为97.47%。结论NSCLC患者放疗结束后血清TGF-β1、IL-6、TLR-4、NF-κB水平均与RP病情严重程度呈正相关,四者联合评估≥2级RP的价值显著,可为临床控制RP病情提供参考依据。

尼可地尔对接受经皮冠脉介入术治疗的急性心肌梗死患者心功能及Toll样受体4/核转录因子-κB信号通路的影响

目的基于Toll样受体4(TLR4)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路探究尼可地尔在急性心肌梗死(AMI)患者急诊经皮冠脉介入术(PCI)中的应用效果。方法选择2020年4月至2022年12月胜利油田中心医院急诊科收治的106例AMI患者,均接受急诊PCI治疗,根据组间基线资料匹配的原则,采用随机数字表法分为联合组和对照组,各53例。对照组接受抗凝调脂治疗,联合组接受抗凝调脂及尼可地尔治疗,两组均治疗1个月,并随访6个月。比较两组治疗前、治疗后6个月心肌损伤相关指标、血管内皮功能、心功能、TLR4/NF-κB信号通路,治疗后6个月主要不良心血管事件(MACE)。结果较治疗前,治疗后6个月两组血清心肌酸激酶同工酶、乳酸脱氢酶及N-末端脑钠肽前体、内皮素-1水平,左心室舒张末期容积及左心室收缩末期容积,TLR4、NF-κB mRNA,TLR4蛋白、NF-κB蛋白水平均明显降低,但联合组各项指标水平均低于对照组(P<0.05)。较治疗前,治疗后6个月两组左心室射血分数、血清一氧化氮、肱动脉血流介导的舒张功能水平均显著升高,但联合组各项指标水平均高于对照组(P<0.05)。治疗后6个月联合组患者左心室重塑低于对照组(P<0.05);两组患者的MACE发生率比较接近,组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论尼可地尔在AMI患者急诊PCI中应用,可提高心功能,减轻心肌损伤,改善血管内皮功能,可调节TLR4/NF-κB信号通路,安全性良好。

梅花入骨丹通过Toll样受体4/核转录因子-κB信号通路调节大鼠退变软骨细胞外基质代谢紊乱的作用机制

目的:探讨梅花入骨丹通过Toll样受体4/核转录因子-κB(TLR4/NK-κB)信号通路调节退变软骨细胞外基质代谢紊乱的作用机制。方法:体外培养大鼠软骨细胞并鉴定,采用CCK-8法检测梅花入骨丹水提物(BCAE)对体外软骨细胞的增殖-毒性,筛选药物作用的最佳浓度和时间。采用10 ng·mL-1白细胞介素-1β(IL-1β)建立软骨细胞炎症退变模型,将软骨细胞分为空白对照组、模型对照组、BCAE组、抑制剂TAK-242组和抑制剂PDTC组,分别进行相应干预后,qRT-PCR及Western blot法检测各组基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、MMP-3、MMP-9、MMP-13、TLR4、IKKβ、IκBα、p-p65、ColⅡ的mRNA、蛋白表达情况。结果:与空白对照组比较,模型对照组MMP-1、MMP-3、MMP-9、MMP-13、TLR4、IKKβ、p-p65的mRNA及蛋白的表达明显升高(P<0.01),而IκBα、ColⅡ表达下降(P<0.01);与模型对照组比较,TAK-242组、PDTC组、BCAE组MMP-1、MMP-3、MMP-9、MMP-13、TLR4、IKKβ、p-p65的mRNA及蛋白的表达明显减少(P<0.01),而IκBα、ColⅡ表达升高(P<0.01)。结论:梅花入骨丹通过TLR4/NK-κB信号通路抑制MMPs的关键调控因子表达,从而抑制IL-1β介导的退变软骨细胞外基质代谢紊乱,发挥抗炎和保护软骨细胞的作用。

溶血磷脂酸对人单核细胞株基质金属蛋白酶-9和Toll样受体4表达的影响以及核因子-κB抑制剂的干预作用

目的探讨溶血磷脂酸(LPA)对人单核细胞株(THP-1)基质金属蛋白酶(MMP)-9和Toll样受体4(TLR-4)表达的影响以及核因子(NF)-κB抑制剂的干预作用。方法分别以0、0.1、0.5、1、5、10μmol/L的LPA加入人THP-1细胞4 h,以及将NF-κB抑制剂咖啡酸苯乙酯(CAPE)20 mg/L预处理THP-1细胞1 h后,再加入LPA1μmol/L4 h。应用酶联免疫吸附法测定细胞上清液的MMP-9含量,RT-PCR法测定TLR-4mRNA表达,Western Blot检测NF-κB p65活性。结果 LPA0、0.1、0.5、1、5、10μmol/L组细胞上清液MMP-9水平分别为(256.63±20.51)ng/ml、(296.57±10.92)ng/ml、(330.73±9.05)ng/ml、(367.8±6.4)ng/ml、(316.4±4.87)ng/ml及(303.00±6.45)ng/ml,各组间差异有统计学意义(均P<0.01);各组TLR-4 mRNA表达的差异有统计学意义(均P<0.01)。CAPE干预组细胞上清液MMP-9含量、TLR-4 mRNA表达及NF-κBp65活性显著低于LPA1μmol/L组(均P<0.01)。结论 LPA能促进THP-1细胞MMP-9和TLR-4的表达,NF-κB抑制剂预处理可以降低其表达水平。

红景天苷对百草枯中毒大鼠肺组织Toll样受体4和核转录因子-κB表达的影响

目的:研究红景天苷(SDS)对百草枯(PQ)中毒大鼠肺组织Toll样受体4和核转录因子κB(TLR4-NF-κB)mRNA表达的影响。方法:将120只SD大鼠随机分为生理盐水(NS)对照组、PQ模型组和SDS干预组(低、中、高剂量),每组24只。采用一次性腹腔注射PQ溶液的方法,制备PQ中毒ALI模型,PQ溶液20 mg/kg。PQ模型组和SDS干预组注射PQ溶液,NS对照组腹腔注射等容积NS。染毒1 h后,SDS干预组腹腔注射SDS,低、中、高剂量分别为1、5和10 mg/kg,NS对照组、PQ模型组腹腔注射等容生理盐水,每24 h注射1次。分别在染毒后6 h、24 h、48 h和72 h麻醉处死大鼠,测定肺湿/干重比,测定肺组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、血清中白介素-6(IL-6)含量,检测TLR4和NF-κB的mRNA表达情况。结果:与NS组相比,各时间点PQ模型组肺湿/干重比明显增加(P<0.01),肺组织TLR4和NF-κB的mRNA表达水平明显提高(P<0.01),肺组织中TNF-α、血清中IL-6含量显著增加(P<0.01);而在SDS干预组中,与PQ模型组相比,中、高剂量组各时间点的肺湿/干重比明显减少(P<0.05),中、高剂量组在染毒后24、48、72 h肺组织TLR4和NF-κB的mRNA表达水平明显减少(P<0.05),各剂量组TNF-α的水平于染毒后各时间点均有显著降低(P<0.05)。高剂量组血清IL-6水平于染毒后6、24、48、72 h明显减低(P<0.05)。结论:TLR4-NF-κB通路参与了PQ中毒大鼠肺损伤的早期病理生理过程,SDS能抑制TLR4-NF-κB活化,减轻PQ中毒大鼠肺损伤。

大黄附子汤对重症急性胰腺炎肺损伤大鼠肺组织Toll样受体4／核转录因子-κB的影响

目的探讨大黄附子汤治疗重症急性胰腺炎-急性肺损伤（SAP—ALI）的作用机制。方法将128只SD大鼠随机分为假手术组、SAP—ALI组、大黄附子汤组和血必净组，每组再按处死时间点分为术后3、6、12、24h4个亚组，每个亚组8只。假手术组开腹后翻动胰腺数次，行空肋造瘘；SAP—ALI组采用胰胆管逆行注入牛磺胆酸钠1ml／kg制模，行空肠造瘘；大黄附子汤组和血必净组于制模后0．5h经空肠造瘘管分别注入大黄附子汤或血必净注射液2ml，其他两组注入等量生理盐水。各组在处死大鼠前从心脏取血，用全自动生化仪检测血清淀粉酶水平，动态比浊法测定血清内毒素含量。处死大鼠后取肺脏，观察肺组织病理学变化、计算肺损伤评分和湿／干重（W／D）比值；用蛋白质免疫印迹法（Western blotting）检测肺Toll样受体4（TLR4）／核转录因子-κB p65（NF—κB p65）的表达。结果SAP—ALI组各时间点血清淀粉酶、内毒素，肺损伤评分及W／D比值较假手术组均明显升高（P均〈0．05）；大黄附子汤组各指标均显著下降（P均〈0．05）。Western blotting结果显示，SAP—ALI组TLR4、NF—κBp65表达于术后3h开始较假手术组升高，12h达高峰（P均〈0．05）；大黄附子汤组TLR4于术后3h、NF—κB p65于术后6h表达较SAP—ALI组显著降低，12h达峰值（P均〈0．05）。结论TLR4／NF-κB信号转导通路在SAP—ALI早期炎症级联反应中发挥了重要作用；大黄附子汤通过降低血清内毒素水平、降低肺组织TLR4的活化、抑制下游NF-κB p65转导路径，从而减轻SAP—ALI的进程。

丹参多酚酸盐治疗慢性心力衰竭后外周血单核细胞Toll样受体4/核转录因子-κB信号通路变化观察

目的:探讨丹参多酚酸盐治疗慢性心力衰竭(CHF)后外周血单核细胞Toll样受体4/核转录因子-κB(TLR4/NF-κB)信号通路变化情况。方法:选取2016年11月至2020年1月我院收治的CHF患者172例,采用随机数表法分为对照组和观察组,每组86例。对照组患者给予常规治疗,观察组患者在对照组治疗基础上给予丹参多酚酸盐治疗,两组患者均持续治疗2周。比较两组患者治疗前后超声参数(包括LVEF、LVEDD、LVESD)、6分钟步行距离(6MWD),分析两组患者治疗前后TNF-α、IL-1β、IL-6、TLR4、NF-κB mRNA和蛋白表达,并观察两组患者临床疗效。结果:两组患者治疗后LVEF显著高于治疗前(P<0.05),LVEDD、LVESD显著低于治疗前(P<0.05);观察组患者治疗后LVEF显著高于对照组(P<0.05),LVEDD、LVESD显著低于对照组(P<0.05)。两组患者治疗后TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA和蛋白表达显著低于治疗前(P<0.05);观察组患者治疗后TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA和蛋白表达显著低于对照组(P<0.05)。两组患者治疗后TLR4、NF-κB mRNA和蛋白表达显著低于治疗前(P<0.05);观察组患者治疗后TLR4、NF-κB mRNA和蛋白表达显著低于对照组(P<0.05)。观察组患者临床疗效优于对照组(P<0.05)。结论:丹参多酚酸盐治疗CHF临床疗效确切,能有效抑制外周血单核细胞TLR4/NF-κB信号通路,减轻炎性反应,改善心功能。

地佐辛对神经病理性疼痛大鼠的镇痛作用及对Toll样受体4/核转录因子-κB信号通路的影响

目的探讨地佐辛对神经病理性疼痛大鼠的镇痛作用及对Toll样受体4(TLR4)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路的影响。方法将90只Sprauge Dawley大鼠随机分为假手术组、模型组、普瑞巴林组及地佐辛低、中、高剂量组,每组15只。模型组、普瑞巴林组及地佐辛低、中、高剂量组大鼠结扎左侧第5腰神经制备神经病理性疼痛模型,假手术组大鼠不结扎第5腰神经。术后第4天开始,普瑞巴林组大鼠腹腔注射普瑞巴林18 mg·kg^(-1)·d^(-1),地佐辛低、中、高剂量组大鼠分别注射地佐辛6、12、24 mg·kg^(-1)·d^(-1),模型组及假手术组大鼠注射等剂量氯化钠溶液;注射量均为1 m L·kg^(-1),连续给药7 d。分别于术前及术后第4、11天测定各组大鼠机械痛阈值(MWT)和热缩足反射潜伏期(TWL);术后第11天处死各组大鼠并取脊髓组织,采用酶联免疫吸附试验法检测脊髓组织中白细胞介素-6(IL-6)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,Western blot法检测脊髓组织中TLR4、NF-κB蛋白相对表达量。结果各组大鼠术前MWT、TWL比较差异无统计学意义(F=0.261、0.662,P>0.05)。术后第4、11天,模型组、普巴瑞林组及地佐辛低、中、高剂量组大鼠MWT、TWL显著低于术前(P<0.05),模型组、普瑞巴林组及地佐辛低、中、高剂量组大鼠的MWT、TWL显著低于假手术组(P<0.05)。术后第4天,模型组、普瑞巴林组及地佐辛低、中、高剂量组大鼠MWT、TWL比较差异均无统计学意义(P>0.05)。术后第11天,模型组大鼠MWT显著低于术后第4天,普巴瑞林组及地佐辛中、高剂量组大鼠MWT、TWL显著高于术后第4天(P<0.05)。术后第11天,普瑞巴林组及地佐辛低、中、高剂量组大鼠MWT、TWL显著高于模型组(P<0.05),普瑞巴林组及地佐辛中、高剂量组大鼠MWT、TWL显著高于地佐辛低剂量组(P<0.05),普瑞巴林组及地佐辛高剂量组大鼠MWT、TWL显著高于地佐辛中剂量组(P<0.05),地佐辛高剂量组大鼠MWT、TWL与普瑞巴林组比较差异无统计学意义(P>0.05)。模型组、普瑞巴林组及地佐辛低、中、高剂量组大鼠脊髓组织中IL-6、MCP-1、TNF-α水平和TLR4蛋白、NF-κB蛋白相对表达量均显著高于假手术组(P<0.05),普瑞巴林组及地佐辛低、中、高剂量组大鼠脊髓组织中IL-6、MCP-1、TNF-α水平和TLR4蛋白、NF-κB蛋白相对表达量显著低于模型组(P<0.05),普瑞巴林组及地佐辛中、高剂量组大鼠脊髓组织中IL-6、MCP-1、TNF-α水平和TLR4蛋白、NF-κB蛋白相对表达量显著低于地佐辛低剂量组(P<0.05),普瑞巴林组及地佐辛高剂量组大鼠脊髓组织中IL-6、MCP-1、TNF-α水平和TLR4蛋白、NF-κB蛋白相对表达量显著低于地佐辛中剂量组(P<0.05),地佐辛高剂量组与普瑞巴林组大鼠脊髓组织中IL-6、MCP-1、TNF-α水平及TLR4蛋白、NF-κB蛋白相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论地佐辛可能通过抑制TLR4/NF-κB信号通路的激活而减轻脊髓炎症反应,提高神经病理性疼痛大鼠MWT,延长TWL,发挥镇痛作用。

硫酸镁通过Toll样受体4/核转录因子-κB通路抑制慢性肾衰竭大鼠血管钙化的机制研究

目的探究硫酸镁通过Toll样受体4(toll-like receptor 4,TLR4)/核转录因子-κB(nuclear transcription factor-κB,NF-κB)通路对慢性肾衰竭(chronic renal failure,CRF)大鼠血管钙化(vascular calcification,VC)的影响。方法将SD大鼠按照随机数字法随机分为对照组、模型组、硫酸镁-L组(25%硫酸镁2 mL)、硫酸镁-H组(25%硫酸镁4 mL)、硫酸镁-H+吡咯烷二硫代氨基甲酸酯(pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC)组(25%硫酸镁4 mL+100 mg/kg NF-κB抑制剂PDTC),10只/组;除对照组外,造模大鼠使用硫酸腺嘌呤混悬液灌胃3周,于4~12周,硫酸镁-L组、硫酸镁-H组、硫酸镁H+PDTC组灌胃相应剂量药物,模型组使用等体积生理盐水灌胃(1次/d),全程用高磷饲料饲喂;对照组于1~3周进行1.5%甲基纤维素灌胃,4~12周使用等量生理盐水灌胃,整个试用期均使用基础饲料喂养;全自动生化分析仪检测大鼠血清生化指标;HE染色观察大鼠肾组织病理学情况;钙盐染色液染色观察腹主动脉钙化情况;邻甲酚酞络合酮比色法检测大鼠腹主动脉血管壁钙含量;蛋白质印迹法检测大鼠腹主动脉核心结合因子α1(core binding factorα1,Cbfα1)、骨形态发生蛋白2(bone morpho⁃genic protein2,BMP2)及TLR4/NF-κB通路蛋白表达情况。结果与对照组相比,模型组大鼠血清中血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、血肌酐(serum creatinine,Scr)、血磷、钙水平、肾组织病理损伤程度、腹主动脉钙化程度、Cbfα1、BMP2、TLR4、p-NF-κB p56/NF-κB p56表达显著增加,血清中镁水平显著降低(P<0.05);与模型组相比,硫酸镁-L组、硫酸镁-H组、硫酸镁-H+PDTC组BUN、Scr、血磷、钙水平、肾组织病理学程度、腹主动脉钙化程度、Cbfα1、BMP2、TLR4、p-NF-κB p56/NF-κB p56表达显著降低,镁水平显著增加(P<0.05);与硫酸镁-L组相比,硫酸镁-H组、硫酸镁-H+PDTC组BUN、Scr、血磷、钙水平、肾组织病理损伤程度、腹主动脉钙化程度、Cbfα1、BMP2、TLR4、p-NF-κB p56/NF-κB p56表达显著降低,镁水平显著增加(P<0.05);与硫酸镁-H组相比,硫酸镁-H+PDTC组BUN、Scr、血磷、钙水平、肾组织病理学程度、腹主动脉钙化程度、Cbfα1、BMP2、TLR4、p-NF-κB p56/NF-κB p56表达显著降低,镁水平显著增加(P<0.05)。结论硫酸镁可能通过抑制TLR4/NF-κB通路来改善CRF大鼠VC。

鼻息肉组织中核转录因子-κB、Toll样受体2及上皮克隆蛋白的表达及其意义

目的探讨鼻息肉组织中核转录因子-κB(NF-κB)、Toll样受体2(TLR2)和腭、肺及鼻咽上皮克隆蛋白(PLUNC)的表达及其意义。方法采用回顾性研究,收集本院90例鼻息肉组织标本(病例组),另收集45例正常鼻甲黏膜组织标本(对照组)。采用苏木精-伊红染色检测两组嗜酸性粒细胞浸润程度,根据免疫组化法检测两组NF-κB p65、TLR2及PLUNC的分布及其表达水平,对病例组鼻息肉组织中NF-κB p65、TLR2及PLUNC的表达情况进行相关性分析。结果相比对照组,病例组鼻息肉组织中嗜酸性粒细胞阳性率升高(P<0.01)。病例组鼻息肉组织中NF-κB p65和TLR2表达阳性率高于对照组,PLUNC表达阳性率低于对照组(P<0.001)。鼻息肉组织中TLR2与NF-κB p65表达呈正相关,PLUNC与NF-κB p65、TLR2均呈负相关(P均<0.05)。结论鼻息肉组织中NF-κB p65、TLR2表达升高、PLUNC表达降低,三者表达强度有关。

桥本甲状腺炎合并甲状腺乳头状癌患者中Toll样受体3和核转录因子-κB的表达及相关性分析

目的分析桥本甲状腺炎(Hashimoto thyroiditis,HT)合并甲状腺乳头状癌(PTC)患者Toll样受体3(toll-like receptor 3,TLR3)和核转录因子-κB(nuclear transcription factor-κB,NF-κB)表达及相关性。方法收取邯郸市中心医院2020年3月~2022年3月收治的130例行手术切除的甲状腺标本,其中正常甲状腺组织标本43例,HT标本47例,HT合并PTC标本40例,分析TLR3和NF-κB在正常甲状腺组织、HT组、HT合并PTC组中的表达,分析HT合并PTC组中TLR3和NF-κB表达与临床病理参数关系,Pearson相关性分析TLR3和NF-κB的关系。结果TLR3在正常甲状腺组织、HT组、HT合并PTC组中的阳性表达率分别为0(0/43)、80.85%(38/47)、90.00%(36/40);NF-κB在以上三组中的阳性表达率分别为0(0/43)、68.09%(32/47)、85.00%(34/40)。TLR3和NF-κB在HT组、HT合并PTC组中的阳性表达率均高于正常甲状腺组织(P<0.05),TLR3和NF-κB表达与性别、年龄、HT合并PTC病理学特征、病灶类型、淋巴结转移、甲状腺包膜侵犯差异比较均无统计学意义(P均>0.05)。TLR3和NF-κB呈显著正相关(r=0.589,P<0.05)。结论TLR3和NF-κB在HT合并PTC组织中的阳性率高于正常甲状腺组织,且二者表达呈正相关。

Toll样受体4、核转录因子-κB p65在小鼠溃疡性结肠炎中的表达及意义

目的探索Toll样受体4(TLR4)和核转录因子-κB(NF-κB)在小鼠溃疡性结肠炎(UC)中的表达及意义,从而探讨该信号通路在UC发病机制中可能的作用。方法将20只雄性Balb/c小鼠随机分为正常组(N组)和模型组(M组),每组各10只。采用葡聚糖硫酸钠诱导UC模型,各组于造模后7 d取病变处结肠组织,进行组织学评分,HE染色观察大体形态、组织学评分和免疫组化染色观察NF-κB和TLR4的表达情况。结果 TLR4和NF-κB在M组小鼠结肠黏膜表达显著高于N组(P<0.05);且TLR4与NF-κB的表达呈正相关,Pearson相关系数r为0.816。结论TLR4和NF-κB的高表达提示该信号传导通路激活导致下游炎症因子的释放可能是UC发生的机制之一。

Toll样受体4/核转录因子-κB信号通路促进高磷诱导血管平滑肌细胞钙化

目的探讨Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)/核转录因子-κB(nuclear transcription factorκB,NF-κB)信号通路对高磷诱导小鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)成骨样分化以及血管钙化过程的影响。方法体外培养小鼠血管平滑肌细胞系。首先将实验分为正常对照组和高磷组,观察高磷对VSMCs的影响;其次分为正常对照组、NF-κB抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸酯(pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC)组(PDTC组)、高磷组和高磷+PDTC组,观察PDTC对高磷诱导的VSMCs成骨样分化及钙化的抑制作用;最后分为正常对照组、正常对照+control siRNA组、正常对照+TLR4 siRNA组、高磷组、高磷+control siRNA组、高磷+TLR siRNA组,观察TLR4基因的小分子干扰RNA(siRNA)对高磷诱导的VSMCs成骨样分化及钙化的抑制作用。采用茜素红S染色观察高磷对细胞钙盐沉积的影响,Western blot检测TLR4、p-NF-κB、SM22α、骨形态发生蛋白2(bone morphogenic protein2,BMP2)、Runt相关转录因子2(runt-related transcription factor 2,Runx2)的表达变化。结果与正常对照组相比,高磷处理后,VSMCs的钙盐沉积明显增多[(0.079±0.011)vs(0.193±0.017),P<0.01],TLR4[(0.228±0.008)vs(0.526±0.017),P<0.01]、p-NF-κB[(0.271±0.003)vs(0.454±0.008),P<0.01]蛋白的表达明显升高,与成骨样分化及钙化相关的BMP2、Runx2蛋白表达亦明显升高,而平滑肌细胞标志物SM22α表达则减少;加入PDTC处理后,高磷状态下的VSMCs的钙盐沉积明显降低[(0.121±0.013)vs(0.217±0.031),P<0.01],p-NF-κB[(0.094±0.006)vs(0.380±0.009),P<0.01]表达明显受抑制,BMP2和RUNX2表达明显下降,而SM22α的表达则明显上调;高磷状态下,应用TLR4 siRNA转染VSMCs后,VSMCs的TLR4[(0.117±0.047)vs(0.377±0.012),P<0.01]表达明显受抑制,同样,p-NF-κB[(0.264±0.013)vs(0.601±0.027),P<0.01]的表达亦明显下降,BMP2和Runx2(P<0.01)蛋白的表达明显受抑,而SM22α[(0.321±0.011)vs(0.194±0.004),P<0.01]的表达则明显上升。结论高磷可能通过TLR4/NF-κB信号通路诱导VSMCs成骨样分化及钙化。

退热六法对脂多糖致热兔toll样受体4/核转录因子-κB及炎症因子的影响

目的明确退热六法对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)致热幼兔的退热效果及抗炎机制。方法选取24只新西兰幼兔随机分为正常组、模型组、推拿组,每组8只,推拿组和模型组通过耳缘静脉注射0.5μg/kg LPS建立发热模型,1小时内肛温升高0.6℃为造模成功。推拿组于造模后1小时进行手法干预,干预方法为退热六法,即开天门、推坎宫、揉太阳、揉耳后高骨、清天河水、推脊,连续监测6小时肛温变化,比较造模前、造模后1小时、造模后3小时中性粒细胞比率变化,用酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测血清肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素1β(Interleukin-1β,IL-1β)含量变化,用蛋白免疫印迹法(Western blot,WB)检测肝、肺组织toll样受体4(toll-like receptor 4,TLR4)、核转录因子-κB p65(nuclear factor-κB p65,NF-κB p65)表达含量。结果推拿后1小时、2小时、3小时,推拿组肛温显著低于模型组(P<0.05);造模后3小时,模型组中性粒细胞比率(neutrophil granulocyte,NEU%)高于造模前(P<0.05),推拿组NEU%显著低于模型组(P<0.05),推拿组血清中TNF-α、IL-1β含量低于模型组(P<0.05),推拿组肝、肺组织TLR4表达含量低于模型组(P<0.05),推拿组肝、肺组织NF-κB p65表达含量与模型组无明显差异(P>0.05)。结论退热六法降温作用明确,下调中性粒细胞比率、外周炎症因子TNF-α、IL-1β水平,从而影响TLR4信号通路实现调节体温作用,而这一作用不是通过NF-κB信号通路介导。

Toll样受体4单克隆抗体对急性期溃疡性结肠炎小鼠结肠黏膜Toll样受体4介导的核因子-κB信号通路的影响

目的探讨Toll样受体4(TLR4)单克隆抗体(TLR4mAb)对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的急性期溃疡性结肠炎(UC)小鼠肠黏膜TLR4介导的核因子(NF)-κB信号通路中磷酸化IκB激酶(p-IKK)及NF-κB的影响情况。方法30只BALB/c小鼠均分为正常对照组(A组)、UC模型组(B组)及低、中、高剂量TLR4mAb干预组(C、D、E组)。A组小鼠饮用蒸馏水7d;B、C、D、E组小鼠饮用5%DSS水溶液7d以制成UC模型。造模同时,C、D、E组小鼠分别腹腔注射低、中、高剂量TLR4mAb。造模及干预7d后处死小鼠,观察指标包括疾病活动指数(DAI)、结肠组织病理学评分(HPS)。采用Western印迹法检测各组肠黏膜p-IKK的蛋白表达,蛋白凝胶电泳迁移率变动分析法(EMSA法)检测NF-κB的活性变化。结果B组小鼠的结肠黏膜DAI及HPS均显著高于A组(P值均<0.01)。与模型组相比,使用TLR4mAb干预后中、高剂量组HPS有不同程度的缓解(P值均<0.01)。②与B组相比,D、E组的TLR4mAb后p-IKK表达及NF-κB的活性均显著下降(P值分别<0.05、0.01)。结论TLR4mAb可以减轻肠道炎症,发挥干预作用,其机制可能是通过抑制TLR4介导的NF-κB通路关键蛋白的表达,降低NF-κB的活性,继而减少下游炎性因子过度表达。

乌司他丁基于高迁移率族蛋白B1/Toll样受体4/核因子-κB通路对急性胃肠损伤家兔肠屏障功能保护机制

目的探讨乌司他丁基于高迁移率族蛋白B1(HMGB1)/Toll样受体4(TLR4)/核因子-κB(NF-κB)通路对严重多发伤并急性胃肠损伤家兔模型肠屏障功能保护机制。方法40只家兔,平均分为4组,对照组(未建立严重多发伤并急性胃肠损伤),损伤组、药物对照组和干预组均建立严重多发伤并急性胃肠损伤模型。建模成功后药物对照组注射丙氨酰谷氨酰胺1.2 g/kg,干预组腹腔注射100000 U/kg的乌司他丁,8 h一次,连续7 d。其余家兔同部位注射等体积生理盐水。抽取静脉血检测肠黏膜屏障、炎症及应激指标,HE染色检测小肠病理形态,HMGB1、TLR4、NF-κB检测采用免疫印迹及聚合酶链式反应法。结果损伤组肠脂肪酸结合蛋白、二胺氧化酶、D乳酸、降钙素原和C反应蛋白均高于对照组(P<0.05),药物对照组和干预组上述指标均低于损伤组,且干预组低于药物对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,损伤组丙二醛(MDA)升高,超氧化物岐化酶(SOD)降低;与损伤组比较,药物对照组和干预组MDA降低,SOD升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。各组家兔小肠组织中HMGB1、TLR4、NF-κB蛋白及mRNA比较存在差异,损伤组HMGB1、TLR4、NF-κB蛋白及mRNA高于对照组,与损伤组比较,药物对照组和干预组上述指标降低,且干预组低于药物对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论乌司他丁能够提高严重多发伤并急性胃肠损伤家兔模型肠屏障功能,改善炎症及应激,并具有浓度依赖性,其作用机制与抑制HMGB1/TLR4/NF-κB通路相关。

Toll样受体4/核因子-кB信号通路在人颅内动脉瘤形成和破裂过程中的激活

颅内动脉瘤病理过程与免疫炎症反应密不可分,但炎症反应的起源或机制仍不太清楚。核转录因子κB（NF-κB）是炎症细胞因子[如白细胞介素（IL）-1β、肿瘤坏死因子（TNF）-α、IL-6和IL-8]、趋化因子[单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）]、黏附分子[细胞间黏附分子（ICAM）-1和血管细胞黏附分子（VCAM）-1]的主要调节子。

大柴胡汤联合隔姜灸对溃疡性结肠炎患者外周血单核细胞Toll样受体-4、核转录因子-κB信号通路的影响

目的:观察大柴胡汤联合隔姜灸对溃疡性结肠炎(ucerative colitis,UC)患者症状改善及外周血单核细胞Toll样受体-4(toll-like receptor 4,TLR-4)、核转录因子-κB(nuclear factor-kappaB,NF-κB)信号通路的影响。方法:选取2016年5月至2018年3月在本院就诊的92例UC患者为研究对象,依据随机数字表法分为对照组和试验组各46例。对照组予以柳氮磺胺吡啶肠溶片治疗,每次500 mg,口服,日3次,饭后30 min服用。试验组予以大柴胡汤联合隔姜灸治疗,日1次,治疗10次,中间休息3 d。两组均连续治疗3个月。结果:治疗后两组UC患者腹泻、腹痛、里急后重及脓血便评分与治疗前比较均有统计学意义(P<0.05),且试验组治疗后腹泻、腹痛、里急后重及脓血便评分均低于对照组(P<0.05)。对照组有效率为78.26%,试验组有效率为93.48%,两组有效率比较,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后两组UC患者外周血单核细胞TLR-4、NF-κB表达水平与治疗前比较均有统计学意义(P<0.05),且试验组治疗后外周血单核细胞TLR-4、NF-κB表达水平均低于对照组(P<0.05)。对照组不良反应发生率为19.57%,复发率为17.39%;试验组不良反应发生率为4.35%,复发率为2.17%。两组患者不良反应发生率和复发率比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗后两组UC患者生活质量评分与治疗前比较有统计学意义(P<0.05),且试验组治疗后生活质量评分高于对照组(P<0.05)。结论:大柴胡汤联合隔姜灸治疗UC患者,可改善患者临床症状,降低不良反应发生率及复发率,下调TLR-4、NF-κB表达水平,改善患者生活质量。

白细胞介素18经toll样受体4/髓样细胞分化因子88/核转录因子-κB通路促进支气管平滑肌细胞增殖与迁移

目的 探讨白细胞介素18 (IL-18)经toll样受体4 (TLR4)/髓样细胞分化因子88 (MyD88)/核转录因子-κB(NF-κB)通路促进支气管平滑肌细胞(BSMC)增殖与迁移。方法 采用不同浓度IL-18、不同时间处理BSMC,确定实验条件。细胞计数试剂盒(CCK-8)测定细胞活性,Transwell小室检测细胞迁移,Western blot法检测相关蛋白的表达。抑制剂Eritoran特异性阻断TLR4/MyD88/NF-κB通路,检测TLR4/MyD88/NF-κB通路阻断后对细胞周期、细胞增殖、细胞迁移及TLR4/MyD88/NF-κB通路相关蛋白的表达的影响。结果 IL-18可促进支气管平滑肌细胞细胞增殖,提高细胞迁移能力,上调TLR4、MyD88和NF-κB p65蛋白水平(P<0.05)。Eritoran可抑制IL-18引起的BSMC细胞增殖,上调G1期细胞百分比,下调S期、G2期细胞百分比,抑制细胞迁移,降低TLR4、MyD88和NF-κB p65蛋白水平(P<0.05)。结论 IL-18可能通过上调TLR4/MyD88/NF-κB通路中信号分子的表达,促进了平滑肌细胞增殖和迁移。

基于TLR4/PI3K/Akt/NF-κB信号通路探讨热毒宁注射液抑制脂多糖刺激的BEAS-2B细胞炎症因子表达的作用机制

目的:基于Toll样受体4(TLR4)/磷脂肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路探究热毒宁注射液(RDN)对脂多糖(LPS)刺激的人支气管上皮细胞BEAS-2B炎症因子表达的影响及机制。方法:采用高效液相色谱法(HPLC)测定RDN冻干粉中栀子苷和绿原酸含量;采用分子对接技术评估栀子苷和绿原酸与TLR4的结合能力。通过体外实验构建LPS(1μg·mL^(–1))刺激的BEAS-2B细胞气道炎症模型;采用噻唑蓝(MTT)法检测LPS诱导的BEAS-2B细胞活力;通过实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)法检测LPS诱导的BEAS-2B细胞炎症因子mRNA的表达;通过免疫印迹法(WB)检测LPS诱导的BEAS-2B细胞TLR4/PI3K/Akt/NF-κB信号通路相关蛋白质的表达;采用免疫荧光法(IF)检测转录因子c-Jun和p65的入核情况。结果:RDN冻干粉中栀子苷和绿原酸的质量分数分别为127.00、70.26 mg·g^(–1);栀子苷和绿原酸均能与TLR4结合,结合能分别为–7.0、–7.9 kcal·mol^(–1)。质量浓度为12.5~400.0μg·mL^(–1)时,RDN对LPS刺激的BEAS-2B细胞活力无显著的抑制作用;质量浓度为200.0~400.0μg·mL^(–1)时,RDN能明显下调白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6、趋化因子CXC配体2(CXCL2)、CXCL5、趋化因子配体5(CCL5)、CCL20 mRNA的表达。此外,RDN能降低TLR4/PI3K/Akt/NF-κB信号通路相关蛋白质PI3K、Akt、TANK结合激酶1(TBK1)、IκB激酶(IKK)α/β、NF-κB抑制因子α(IκBα)、p65、p38、c-Jun N-末端激酶(JNK)、胞外信号调节激酶(ERK)和c-Jun的磷酸化水平,同时抑制LPS激活的BEAS-2B细胞p65和c-Jun的入核。结论:RDN能下调LPS诱导的BEAS-2B细胞炎症因子mRNA的表达,其机制与RDN阻断TLR4/PI3K/Akt/NF-κB信号通路有关。