隐丹参酮调节TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路对高糖诱导的心肌细胞焦亡的影响

目的:探讨隐丹参酮调节Toll样受体4/核转录因子κB/NOD样受体蛋白3(TLR4/NF-κB/NLRP3)信号通路对高糖诱导的心肌细胞焦亡的影响。方法:将H9c2细胞分为对照组(正常葡萄糖5.5 mmol/L)、高糖组(葡萄糖33 mmol/L)、2.5μmol/L隐丹参酮组(葡萄糖33 mmol/L+2.5μmol/L隐丹参酮)、5μmol/L隐丹参酮组(葡萄糖33 mmol/L+5μmol/L隐丹参酮)和脂多糖(LPS)组(葡萄糖33 mmol/L+5μmol/L隐丹参酮+1μg/mL TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路激活剂LPS),各组细胞培养在相应的培养基中48 h。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞存活率;2′,7′-二乙酰二氯荧光素(DCFH-DA)法检测细胞活性氧(ROS)水平;半胱氨酸天冬氨酸酶-1抑制剂(FLICA)-半胱氨酸天冬氨酸酶-1(Caspase-1)/碘化丙啶(PI)双染法检测细胞焦亡情况;酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞上清白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-1β(IL-1β)水平;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测细胞GSDMD蛋白N端片段(GSDMD-N)、TLR4、NLRP3、磷酸化NF-κB p65(p-NF-κB p65)、NF-κB p65、Cleaved Caspase-1、Caspase-1蛋白表达。结果:与对照组比较,高糖组H9c2细胞存活率下降(P<0.05),细胞ROS水平、焦亡细胞比例、细胞上清IL-1β和IL-18水平及细胞TLR4、NLRP3、p-NF-κB p65/NF-κB p65、GSDMD-N、Cleaved Caspase-1/Caspase-1蛋白表达升高(P<0.05);与高糖组比较,2.5μmol/L隐丹参酮组、5μmol/L隐丹参酮组H9c2细胞存活率升高(P<0.05),细胞ROS水平、焦亡细胞比例、细胞上清IL-1β和IL-18水平及细胞TLR4、NLRP3、p-NF-κB p65/NF-κB p65、GSDMD-N、Cleaved Caspase-1/Caspase-1蛋白表达降低(P<0.05)。TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路激活剂LPS可逆转隐丹参酮对高糖诱导细胞增殖和焦亡的抑制作用。结论:隐丹参酮可抑制TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路减轻高糖诱导的心肌细胞焦亡。

苦豆碱通过抑制TLR4/NF-κB/NLRP3通路改善香烟烟雾诱导的人支气管上皮细胞损伤

目的探究苦豆碱(Alo)对香烟烟雾诱导的人支气管上皮细胞损伤的作用及其可能的作用机制。方法16HBE人支气管上皮细胞经100 mL/L香烟烟雾提取物(CSE)和(50、100、200)μmol/L Alo共处理后,CCK-8法检测细胞活力,试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)活性;原位末端转移酶标记技术(TUNEL)、Western blot法检测细胞凋亡,ELISA检测炎性因子水平;2′,7′-二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)荧光探针和相关试剂盒检测氧化应激水平;Western blot法检测Toll样受体4(TLR4)/核因子κB(NF-κB)/含pyrin结构域核苷酸结合寡聚结构域样受体家族蛋白3(NLRP3)通路相关蛋白表达水平。16HBE细胞经100 mL/L CSE和200μmol/L Alo共处理后,采用上述方法检测过表达TLR4对TLR4/NF-κB/NLRP3通路、细胞LDH活性、凋亡、炎症反应及氧化应激的影响。结果CSE暴露可降低16HBE细胞活力,增加LDH释放和细胞凋亡,增强炎症反应和氧化应激水平,且激活TLR4/NF-κB/NLRP3通路;经Alo处理后,细胞活性升高,LDH释放减少、凋亡降低、炎症减轻、氧化应激水平下降,且TLR4/NF-κB/NLRP3通路失活;TLR4过表达可逆转Alo处理对CSE诱导的16HBE细胞损伤的保护作用。结论Alo可通过抑制TLR4/NF-κB/NLRP3通路减轻CSE诱导的人支气管上皮细胞损伤。

达原饮对Hp感染模型大鼠胃组织和口周皮肤TLR4/NF-κB/NLRP3通路的影响

目的:观察达原饮对幽门螺杆菌(Hp)感染模型大鼠胃组织和口周皮肤Toll样受体4/核因子-κB/NOD样受体蛋白3(TLR4/NF-κB/NLRP3)信号通路,以及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)与白细胞介素-1β(IL-1β)等炎症因子的影响,探讨达原饮治疗Hp感染的机制。方法:选取44只雄性SD大鼠,随机分为空白组8只及造模组36只,造模组予以Hp菌液灌胃造模,造模成功后,将造模组随机分为模型组、达原饮高剂量组、达原饮低剂量组、西药组,每组各8只,分别予以相应药物灌胃,空白组、模型组予以等量生理盐水灌胃,灌胃2周。观察大鼠造模前后一般情况改变,苏木精-伊红(HE)染色观察口周皮肤和胃组织病理学变化,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测大鼠口周皮肤和胃组织TLR4、NF-κB、NLRP3表达以及血清中TNF-α、IL-1β表达水平。结果:给药干预后,与模型组相比,西药组、达原饮高剂量组、达原饮低剂量组大鼠皮毛柔顺光泽,饮食水量增加,大便逐渐成型,胃黏膜上皮细胞层次基本分明,排列较整齐,炎症细胞浸润减少,口周皮肤角化过度、棘层增厚、毛囊周围轻度炎症细胞浸润等情况均有不同程度改善。与模型组相比,西药组、达原饮高剂量组、达原饮低剂量组大鼠胃组织和口周皮肤TLR4、NF-κB、NLRP3蛋白表达水平均有不同程度的下调(P<0.05或P<0.01),血清炎症因子TNF-α、IL-1β表达明显下降(P<0.01)。结论:达原饮可能通过干预TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路,抑制TLR4、NF-κB、NLRP3及下游炎症因子的表达,减轻Hp感染模型大鼠胃组织和口周皮肤炎症损伤。

鹰嘴豆芽素A通过调节TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路减轻卵清蛋白诱导哮喘大鼠的气道炎症

[目的]探讨鹰嘴豆芽素A(BCA)通过调节Toll样受体4(TLR4)/核因子-κB(NF-κB)/NOD样受体蛋白3(NLRP3)信号通路对卵清蛋白(OVA)诱导哮喘大鼠气道炎症的影响。[方法]将SD大鼠分为对照(CK)组、模型(Model)组、低剂量BCA组(BCA-L组,25 mg/kg)、高剂量BCA组(BCA-H组,100 mg/kg)、地塞米松阳性对照组(Dex组,1 mg/kg)、BCA-H+LPS(TLR4激活剂)组(100 mg/kg+0.1 mg/kg),每组12只。除CK组,其他组均通过OVA诱导构建哮喘大鼠模型。建模成功24 h后,进行给药处理,给药每日1次,持续10 d。利用动物肺功能测定仪检测大鼠吸气阻力、呼气阻力、肺通气顺应性的变化;吉姆萨(Giemsa)染色检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞总数、淋巴细胞数、嗜酸性粒细胞数、中性粒细胞数;酶联免疫吸附剂测定(ELISA)检测BALF中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、干扰素-γ(IFN-γ)水平;苏木精-伊红染色法(HE)染色检测大鼠肺组织病理变化;免疫组化检测大鼠肺组织中嗜酸性粒细胞趋化因子(Eotaxin)表达;蛋白质印迹法(Western Blot)检测大鼠肺组织中TLR4、p-NF-κB p65、NLRP3蛋白表达。[结果]与CK组比较,Model组大鼠吸气阻力、呼气阻力、BALF中细胞总数、淋巴细胞数、嗜酸性粒细胞数、中性粒细胞数、TNF-α、IL-1β、IFN-γ水平升高,肺组织中的支气管及血管周围炎性细胞浸润明显,肺组织中Eotaxin阳性染色面积百分数、TLR4、p-NF-κB p65、NLRP3蛋白表达升高,肺通气顺应性降低(P<0.05);与Model组比较,BCA-L组、BCA-H组、Dex组对应指标变化趋势与上述相反(P<0.05);LPS减弱了高剂量BCA对哮喘大鼠气道炎症的改善作用。[结论] BCA可能通过抑制TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路减轻OVA诱导哮喘大鼠的气道炎症。

基于TLR4/MyD88/NF-κB信号通路探讨积雪草酸对急性肺损伤大鼠氧化应激和NLRP3炎症小体的影响

目的 观察积雪草酸对脂多糖(LPS)诱导的急性肺损伤大鼠氧化应激和核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体相关蛋白的影响,并探讨其相关分子机制。方法 将60只SD雄性大鼠随机分为对照组、模型组、积雪草酸低剂量组、积雪草酸高剂量组和地塞米松组,每组12只。除对照组外,其余组大鼠均采用LPS气管滴注法建立急性肺损伤模型。模型建立成功后第2天,积雪草酸低、高剂量组大鼠分别腹腔注射25 mg/kg和75 mg/kg积雪草酸溶液,地塞米松组大鼠腹腔注射2 mg/kg地塞米松注射液,对照组和模型组大鼠腹腔注射等量生理盐水,均1次/d,连续注射8周。HE染色观察大鼠肺组织病理形态,称重法计算肺组织湿/干重比值,TUNEL染色检测大鼠肺组织细胞凋亡情况,试剂盒检测大鼠支气管肺泡灌洗液中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)含量,Western blot法检测肺组织中NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)、Toll样受体4(TLR4)、髓样分化蛋白88(MyD88)、核转录因子-κB(NF-κB)和磷酸化NF-κB(p-NF-κB)表达情况。结果 与对照组比较,模型组大鼠肺组织可见明显病理损伤,肺组织湿/干重比值、细胞凋亡率、支气管肺泡灌洗液中MDA含量和肺组织中NLRP3、ASC、Caspase-1、TLR4、MyD88蛋白相对表达量及p-NF-κB/NF-κB比值均显著升高(P均<0.05),支气管肺泡灌洗液中SOD、GSH-Px含量均显著降低(P均<0.05)。与模型组比较,积雪草酸低、高剂量组和地塞米松组大鼠肺组织病理损伤显著改善,肺组织湿/干重比值、细胞凋亡率、支气管肺泡灌洗液中MDA含量和肺组织中NLRP3、ASC、Caspase-1、TLR4、MyD88蛋白相对表达量及p-NF-κB/NF-κB比值均显著降低(P均<0.05),支气管肺泡灌洗液中SOD、GSH-Px含量均显著升高(P均<0.05),且积雪草酸高剂量组和地塞米松组大鼠上述指标变化均显著优于积雪草酸低剂量组(P均<0.05)。结论 积雪草酸可通过抑制氧化应激和NLRP3炎症小体激活减轻LPS诱导的急性肺损伤,其作用机制可能与调控TLR4/MyD88/NF-κB信号通路有关。

TSNⅡA对大鼠IRI肾脏TLR4/NF-κB信号通路的影响

目的探讨丹参酮ⅡA(TSNⅡA)对大鼠肾脏缺血再灌注损伤(IRI)肾脏Toll样受体4(TLR4)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路的影响及对炎症因子水平的下调作用,并分析其对肾脏IRI保护作用机制。方法选取雄性Wistar大鼠建立大鼠肾IRI模型,采用随机数字表表法随机分为五组,每组12只,其中A组大鼠为假手术组;B组为IRI模型组;C组为ST2825干预组,注射ST2825(100 mg/kg);D组为Bay-7082干预组,注射Bay-7082(50μg/kg);E组为TSNⅡA干预组:实验前3 d开始TSNⅡA干预组股静脉注射丹参酮ⅡA注射液(5 mg/kg),每天1次。18 h后,取大鼠下腔静脉血液2 ml,检测血清肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素1(IL-1)、白细胞介素6(IL-6)浓度,并处死大鼠,应用免疫组化法检测肾脏TLR4和NF-κB阳性表达率。结果 B、C、D和E组TLR4和NF-κB阳性率均高于A组,C、D和E组TLR4和NF-κB阳性率均低于B组,E组TLR4和NF-κB阳性率分别为(38.27±2.87)%和(40.76±4.20)%,均高于C和D组,差异均具有统计学意义(P<0.05)。B、C、D和E组血清TNF-α、IL-1和IL-6水平均高于A组,C、D和E组血清TNF-α、IL-1和IL-6水平均低于B组,E组血清TNF-α、IL-1和IL-6水平分别为(76.02±4.28)pg/L、(86.41±6.32)ng/L和(80.28±5.60)ng/L,均高于C和D组,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论TSNⅡA能够下调大鼠肾脏TLR4和NF-κB水平,抑制TLR4/NF-κB信号通路,降低炎症因子水平,实现对肾脏IRI的改善与保护作用。

木犀草素对心力衰竭大鼠心肌炎症反应和TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的影响

目的观察木犀草素对心力衰竭大鼠心肌炎症反应和Toll样受体4/髓样分化因子88/核转录因子-κB(TLR4/MyD88/NF-κB)信号通路的影响,阐明木犀草素对心力衰竭的可能作用机制。方法将51只雄性SD大鼠采用随机数字表法分为假手术组(S组)、心力衰竭组(H组)和木犀草素治疗组(L组),各17只大鼠。采用开胸手术建立心力衰竭动物模型,L组大鼠给予50 mg/(kg·d)木犀草素(体积3 mL)灌胃。心脏超声测定左室射血分数(LVEF)、短轴缩短率(FS)、左室舒张末期内径(LVEDD)、左室收缩末期内径(LVESD)、左室舒张末期容积(LVEDV)、左室收缩末期容积(LVESV)。苏木精-伊红(HE)染色观察心脏组织形态学变化;Masson染色观察心肌组织胶原形成情况。采用双抗夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)测定血清脑钠肽(BNP)、白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。采用蛋白免疫印迹法测定心肌组织IL-1β、IL-6、TNF-α、TLR4、MyD88、NF-κB p65蛋白表达水平。结果与S组比较,H组LVEF、FS降低(P<0.05),LVEDD、LVESD、LVEDV、LVESV增加(P<0.05);与H组比较,L组LVEF、FS升高(P<0.05),LVEDD、LVESD、LVEDV、LVESV降低(P<0.05)。HE染色:S组大鼠心肌组织正常;H组大鼠心肌坏死和炎症浸润严重;L组大鼠心肌坏死和炎症浸润明显减轻。Masson染色:与S组比较,H组胶原面积比增加(P<0.05);与H组比较,L组胶原面积比降低(P<0.05)。与S组比较,H组血清BNP、IL-1β、IL-6、TNF-α水平及心肌组织IL-1β、IL-6、TNF-α、TLR4、MyD88、NF-κB p65蛋白水平升高(P<0.05);与H组比较,L组血清BNP、IL-1β、IL-6、TNF-α水平及心肌组织IL-1β、IL-6、TNF-α、TLR4、MyD88、NF-κB p65蛋白水平降低(P<0.05)。结论木犀草素可抑制心力衰竭大鼠心肌炎症反应和TLR4/MyD88/NF-κB信号通路,发挥对心力衰竭的保护作用。

生姜通过TLR4/NF-κB信号通路对脂多糖诱导的小鼠急性肺损伤的保护作用

目的:探讨生姜醇提液对脂多糖(LPS)诱导的小鼠急性肺损伤(ALI)的保护作用及作用机制。方法:将Balb/c小鼠随机分为正常组、模型组、地塞米松组、生姜低、高剂量组,每组10只,正常组小鼠经鼻滴入生理盐水,其余各组经鼻滴入含LPS(50μg)的生理盐水。造模30 min后,地塞米松组灌胃5 mg·kg^(-1)醋酸地塞米松溶液,生姜低、高剂量组分别灌胃不同剂量(7、14 g·kg^(-1))的生姜醇提液,正常组及模型组灌胃等体积纯水。造模24 h后取材,细胞计数仪检测肺泡灌洗液(BALF)中白细胞总数,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、超氧化物歧化酶(SOD)、髓过氧化物酶(MPO)水平,苏木素-伊红(HE)染色法观察各组肺组织病理学变化,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肺组织核转录因子-κB p65(NF-κB p65)、磷酸化(p)-NF-κB p65及Toll样受体4(TLR4)蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组小鼠BALF白细胞计数、TNF-α、IL-1β、IL-6、MPO水平升高(P<0.01),SOD水平降低(P<0.05),肺组织病理损伤明显,NF-κB p65、p-NF-κB p65及TLR4蛋白表达升高(P<0.01);与模型组比较,给药组小鼠BALF白细胞计数、TNF-α、IL-1β、IL-6、MPO水平降低(P<0.05,P<0.01),SOD水平升高(P<0.05,P<0.01),肺组织损伤均减轻,NF-κB p65、p-NF-κB p65及TLR4蛋白表达降低(P<0.01)。结论:生姜醇提液可能通过抑制TLR4/NF-κB信号通路发挥对LPS诱导小鼠ALI的保护作用。

中医药调控TLR4/NF-κB信号通路治疗帕金森病的研究进展

帕金森病(PD)是一种以黑质多巴胺能神经元进行性退变和路易小体形成为病理变化的常见的中老年神经系统退行性疾病,患病率高且病程长。西医治疗PD以药物为主,早期疗效显著;但随着疾病进展和药物的长期使用,药效会明显减退,或可出现运动并发症等,远期疗效欠佳。中医药作为一种传统的医学体系,对帕金森病有着独特的认识。中药在PD的治疗中发挥着重要的作用,其具有天然、温和、安全有效的特点,可以与西药相配合,协同增强疗效、减轻西药的不良反应。PD发病机制复杂,涉及线粒体功能障碍、细胞凋亡等多个层面,神经炎症也参与PD的多巴胺能神经元的进行性退化。Toll样受体4(TLR4)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路是经典的炎症通路,其表达变化在机体炎性反应发生发展过程中发挥重要作用,近年来中医药在该通路方面的研究日渐增多。笔者对近10年中西医文献进行总结梳理,从中药单体、复方、其他中医疗法方面围绕中医药调控TLR4/NF-κB通路治疗PD的相关作用机制进行综述,以期为寻找药物治疗和基因治疗的新靶点,及中医药防治PD的深入研究提供一些参考。

基于NLRP3炎性小体和TLR4/NF-κB信号通路探讨黄连解毒汤治疗急性痛风性关节炎的作用机制

目的:观察黄连解毒汤对急性痛风性关节炎(AGA)模型小鼠炎性损伤的影响,探讨黄连解毒汤治疗AGA的作用机制。方法:40只雄性C57BL/6J小鼠随机分为正常组、模型组、秋水仙碱组和黄连解毒汤组。采用踝关节注射单钠尿酸盐(MSU)晶体混悬液建立小鼠AGA模型,给药组分别给予黄连解毒汤水煎液(5 g·kg^(-1))和秋水仙碱(0.83 mg·kg^(-1)),每天测量小鼠右踝关节肿胀程度,7 d后苏木素-伊红(HE)染色检测踝关节组织病理改变。另外40只C57BL/6J小鼠同样分组处理,造模18 h后,取右踝关节,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测关节炎症因子白细胞介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α、IL-6和NOD样受体蛋白3(NLRP3)炎性小体NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、胱天蛋白酶-1(Caspase‑1)mRNA的表达;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测炎症因子IL-1β、TNF-α和IL-6含量;蛋白免疫印迹法(Western bolt)检测NLRP3炎性小体和Toll样受体4/核转录因子-κB(TLR4/NF-κB)信号通路蛋白的表达。结果:与正常组比较,模型组小鼠右踝关节显著肿胀(P<0.01),HE染色观察到踝关节明显异物肉芽肿,其间有炎症细胞浸润,黄连解毒汤干预后可以缓解踝关节肿胀(P<0.05,P<0.01),异物肉芽肿减小。与正常组比较,模型组踝关节组织中炎症因子IL-1β含量和IL-1β、TNF-α、IL-6 mRNA表达显著升高(P<0.01),NLRP3炎性小体、Caspase‑1 mRNA表达明显升高(P<0.05,P<0.01),NLRP3、Caspase-1、TLR4和NF-κB蛋白表达明显升高(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,黄连解毒汤干预明显降低炎症因子IL-1β、TNF-α、IL-6和NLRP3炎性小体、Caspase‑1 mRNA表达(P<0.05,P<0.01),显著降低关节组织中炎症因子IL-1β、TNF-α和IL-6含量(P<0.01),下调NLRP3、Caspase‑1、TLR4、NF-κB蛋白的表达(P<0.05,P<0.01)。结论:注射MSU晶体导致AGA小鼠关节局部炎性免疫损伤,黄连解毒汤干预减轻炎性免疫损伤,可能与其调控NLRP3炎性小体和TLR4/NF-κB信号通路相关。

基于NF-κB/NLRP3信号通路探讨益气通脉方干预ApoE-∕-小鼠肝脏炎症及脂质沉积的影响

目的:探究益气通脉方(YQTM)通过调控核转录因子-κB(NF-κB)/NOD样受体蛋白3(NLRP3)信号通路对载脂蛋白E-∕-敲除(Apo E-∕-)小鼠肝脏炎症的影响。方法:将40只Apo E-∕-小鼠随机分为模型组、阿托伐他汀组(阳性药组)、YQTM低、中、高剂量组(0.39、0.78、1.56 g·kg^(-1))。各给药组在高脂饲料喂养基础上分别给予相应剂量药物灌胃,连续12周。8只C57BL/6J小鼠为空白组,普通饲料喂养。12周后,采用油红O(oil red O)染色、马松(Masson)染色法观察小鼠主动脉病变情况并判断是否造模成功;oil red O染色观察小鼠肝脏中脂肪沉积;苏木素-伊红(HE)染色观察小鼠肝脏组织病变情况;Masson染色观察小鼠肝脏胶原蛋白纤维分布;酶标仪检测小鼠血清中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)和丙氨酸氨基转移酶(ALT)的表达水平;肝脏中TC、TG水平;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测小鼠肝脏白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-18(IL-18)的表达水平;免疫组化法(IHC)观察小鼠肝脏NF-κB、NLRP3的表达区域;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测小鼠肝脏中NF-κB、NF-κB抑制蛋白(IκB)、IκB激酶β(IKKβ)、磷酸化(p)-NF-κB、pIκB、p-IKKβ、NLRP3和胱天蛋白酶-1(Caspase-1)蛋白表达水平。结果:与空白组比较,模型组小鼠主动脉脂质沉积严重,肝脏细胞内脂肪滴积大量聚集且细胞质内充满脂肪空泡(P<0.01),小鼠血清中TG、TC、LDL-C、AST和ALT水平均显著升高(P<0.01),肝脏中TG、TC水平升高(P<0.01);肝组织IL-1β和IL-18含量,肝脏NF-κB、IκB、IKKβ、p-NF-κB、p-IκB、p-IKKβ、NLRP3和Caspase-1蛋白表达水平均显著升高(P<0.01);与模型组比较,YQTM各剂量组小鼠主动脉斑块减轻,肝脏内脂肪聚集减少,炎症细胞浸润得到缓解(P<0.05,P<0.01)。小鼠血清中TG、TC、LDL-C、AST和ALT水平均明显降低(P<0.05,P<0.01);肝脏中TG、TC水平有所减少;肝组织 L^(-1)β、IL-18水平,肝脏NF-κB、IκB、IKKβ、p-NF-κB、p-IκB、p-IKKβ、NLRP3和Caspase-1蛋白表达水平均明显降低(P<0.05,P<0.01)。结论:YQTM对Apo E-∕-小鼠肝脏炎症的干预机制可能是与下调NF-κB/NLRP3信号通路有关。

基于TLR4/NF-κB/NLRP3通路探讨补阳还五汤调控巨噬细胞极化的作用机制

目的:基于Toll样受体4(TLR4)/核转录因子-κB(NF-κB)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体3(NLRP3)通路探讨补阳还五汤调控巨噬细胞极化的作用机制。方法:本实验通过采用不同浓度(0、1.25、2.5、5、10、20、40、80 mg·L^(-1))脂多糖(LPS)对RAW264.7巨噬细胞干预24 h,细胞增殖与活性检测(CCK-8)法检测RAW264.7巨噬细胞存活率,筛选最适浓度建立体外LPS诱导RAW246.7巨噬细胞炎症模型。将实验分为空白组(20%空白血清),模型组(20%空白血清+10 mg·L^(-1)LPS),模型对照组(20%FBS+10mg·L^(-1)LPS),低、中、高(5%、10%、20%)补阳还五汤含药血清组及NLRP3抑制剂MCC950(50μmol·L^(-1))、活性氧(ROS)抑制剂NAC(10μmol·L^(-1))、NF-κB抑制剂PDTC(10μmol·L^(-1))联合补阳还五汤高剂量(20%)组。酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测RAW264.7巨噬细胞白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-18(IL-18)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达情况;流式细胞术检测巨噬细胞ROS水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测M1型巨噬细胞相关细胞因子诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、M2型巨噬细胞相关细胞因子精氨酸酶1(Arg-1)、白细胞介素-10(IL-10)蛋白表达,TLR4/NF-κB/NLRP3通路的相关蛋白表达。结果:CCK-8结果显示,在10 mg·L^(-1)LPS的刺激下,RAW264.7巨噬细胞的细胞活力值最高(P<0.01)。与空白组比较,模型组IL-1β、IL-18、TNF-α水平显著升高(P<0.01);ROS表达量显著上升(P<0.01);M1型巨噬细胞iNOS、TNF-α蛋白表达显著升高(P<0.01),M2型巨噬细胞Arg-1、IL-10蛋白表达显著降低(P<0.01);TLR4、髓样分化因子88(Myd88)、磷酸化核转录因子-κB抑制蛋白(p-IκB)/核转录因子-κB抑制蛋白(IκB)、磷酸化核转录因子-κB(p-NF-κB)p65/NF-κB p65、NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、胱天蛋白酶-1前体(pro-Caspase-1)蛋白表达水平明显升高(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,补阳还五汤各给药组及抑制剂组均可明显降低IL-1β、IL-18、TNF-α水平(P<0.05,P<0.01),抑制RWA264.7巨噬细胞炎症因子的表达;降低细胞ROS表达水平(P<0.01);下调M1型巨噬细胞iNOS、TNF-α蛋白(P<0.01),上调M2型巨噬细胞Arg-1、IL-10蛋白表达(P<0.05,P<0.01);降低TLR4、Myd88、p-IκB/IκB、p-NF-κB p65/NF-κB p65、NLRP3、ASC、pro-Caspase-1蛋白表达水平(P<0.05,P<0.01)。结论:补阳还五汤可改善巨噬细胞炎症反应,可能与降低巨噬细胞ROS水平,抑制RAW264.7巨噬细胞极化,下调TLR4/NF-κB/NLRP3通路蛋白表达水平有关。

分子对接与体内验证联合探讨穿山龙复方对痛风模型大鼠TLR4/MyD88/NF-kB信号通路的影响

目的:探讨穿山龙复方对痛风性关节炎(GA)合并高尿酸血症(HUA)模型大鼠Toll样受体4(TLR4)/髓样分化因子88(MyD88)/核转录因子-κB(NF-κB)(TLR4/MyD88/NF-κB)信号通路的影响。方法:先运用分子对接技术预测穿山龙复方中主要活性成分与TLR4/MyD88/NF-κB信号通路相关靶蛋白的分子间相互作用,再建立痛风性关节炎合并高尿酸血症大鼠复合模型进行体内实验验证。将48只雄性SD大鼠分为正常对照组、模型对照组、阳性对照秋水仙碱0.3 mg/kg组及穿山龙复方0.2、0.4、0.8 g/kg组。用尿酸钠、氧嗪酸钾和10%酵母饲料造模的同时,分别给予相应的药物灌胃。7 d后取材,测定踝关节肿胀度;HE染色观察踝关节病理学变化,血清白细胞介素-8(IL-8)、IL-1β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量;以Real-timePCR法测定大鼠踝关节中Tlr4、Myd88、Nfkb mRNA表达。结果:分子对接结果表明复方的主要活性成分与TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的靶蛋白均有良好的结合活性,其中薯蓣皂苷与TLR4结合活性最强。体内实验结果表明,与正常对照组相比,模型对照组大鼠血尿酸含量以及踝关节损伤程度均显著增加,血清IL-1、IL-8、TNF-α的含量显著升高(P<0.01),踝关节中Tlr4、Myd88、Nfkb mRNA表达显著上调(P<0.01);与模型对照组比较,穿山龙复方各剂量组和秋水仙碱组对GA&HUA复合模型大鼠血尿酸含量以及踝关节损伤程度显著减轻,血清中IL-1β、IL-8、TNF-α的含量显著降低(P<0.01),踝关节中Tlr4、Myd88、Nfkb mRNA表达显著下调(P<0.01)。结论:穿山龙复方可以通过调节TLR4/MyD88/NF-κB信号通路达到抗痛风性关节炎和高尿酸血症的作用。

黄芩苷通过抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路减轻大鼠肝纤维化的作用

目的观察黄芩苷对肝纤维化(HF)大鼠Toll样受体4(TLR4)/髓样分化因子88(MyD88)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路的相关因子表达,探讨其干预HF的分子机制。方法将清洁级SD雄性大鼠随机分为正常组和造模组,造模组每周2次腹腔注射40%CCl4溶液,连续8周。造模成功后,将造模大鼠随机分为模型组、黄芩苷组和TAK-242组,每组10只。黄芩苷(25 mL·kg^(-1))及TAK-242组(5 mg·kg^(-1))每天给药一次,连续5 d。苏木素-伊红(HE)及Masson染色观察各组大鼠肝组织病理变化;生化仪检测大鼠血清中天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、白蛋白(ALB)、碱性磷酸酶(ALP)含量;ELISA检测大鼠血清中白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、透明质酸(HA)、层粘蛋白(LN)、III型前胶原(PCⅢ)和IV型胶原(CⅣ)及肝组织中羟脯氨酸(HYP)、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的水平;Real-time RT-PCR检测大鼠肝脏中MyD88、TLR4、NF-κB mRNA表达;Western blot检测大鼠肝组织MyD88、TLR4和NF-κB蛋白表达。结果HE及Masson染色结果显示模型组的肝组织有炎性细胞浸润及纤维组织增生,黄芩苷组和TAK-242组的肝组织部分细胞肿胀,有纤维间隔,黄芩苷组改善效果优于TAK-242。生化仪检测结果显示,同正常组比,模型组血清中AST、ALT和ALP含量显著增加(P<0.01),ALB的含量显著降低(P<0.01);同模型组相比,黄芩苷可显著降低血清中AST、ALT、ALP含量(P<0.01),升高ALB含量(P<0.01);ELISA检测结果显示,同正常组比,模型组血清中IL-6、IL-1β、TNF-α、HA、LN、PCⅢ和CⅣ及肝组织中HYP、MDA含量显著增加(P<0.01),SOD的含量显著降低(P<0.01)。同模型组比,黄芩苷可明显降低IL-6、IL-1β、TNF-α、HA、LN、PCⅢ和CⅣ及肝组织中HYP、MDA含量(P<0.01),增加SOD的含量(P<0.01)。与正常组比,模型组TLR4、MyD88和NF-κB表达显著升高(P<0.01)。与模型组比,黄芩苷可显著降低TLR4、MyD88和NF-κB表达(P<0.01)。结论黄芩苷组可通过抑制TLR4/MyD88/NF-κB通路的活化,对HF发挥潜在治疗效果。

复方银花解毒颗粒对脂多糖致幼龄大鼠急性肺炎模型的抗炎作用及TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路的影响

目的研究复方银花解毒颗粒(Compound Yinhua Jiedu Granule)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)致幼龄大鼠急性肺炎模型的抗炎作用及Toll样受体4(Tolllikereceptor4,TLR4)/核转录因子-κB(nuclearfactor-κB,NF-κB)/NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NOD-like receptor thermal protein domain associated protein 3,NLRP3)信号通路的影响。方法将120只幼龄大鼠随机分为6组,分别为对照组、模型组、布洛芬颗粒组(0.8g/kg)及复方银花解毒颗粒低、中、高剂量(1.25、2.5、5 g/kg)组,ig给药1周,末次给药1 h后尾iv LPS(1 mg/kg)制备急性肺炎模型,6 h后采用麻醉后颈椎脱臼处死。采用ELISA试剂盒检测各组大鼠肺泡灌洗液及血清中炎症因子白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、IL-17、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平的变化;HE染色观察肺组织形态学变化;运用免疫组化染色法检测肺组织TLR4,入核NF-κB和NLRP3蛋白的表达,Westernblotting法检测肺组织中TLR4、磷酸化NF-κB(p-NF-κB)、磷酸化核转录因子-κB抑制蛋白α(nuclear factor-κB inhibitor proteinα,p-IκBα)和NLRP3蛋白的表达。结果复方银花解毒颗粒预处理对LPS诱导幼龄大鼠急性肺损伤具有较强的保护作用,可降低模型大鼠肺泡灌洗液及血清中炎症因子IL-1β、IL-17、TNF-α的水平,减少肺组织中TLR4、NF-κB的激活和NLRP3蛋白的表达。结论复方银花解毒颗粒对LPS致幼龄大鼠急性肺炎模型具有抗炎作用,其机制可能与下调TLR4/NF-κB/NLRP3炎症信号通路有关。

中药调控核因子-κB(NF-κB)信号通路治疗银屑病的研究进展

银屑病是一种慢性自身免疫性皮肤病,其核心是免疫反应失调和角质形成细胞增殖异常。核因子-κB(NF-κB)在银屑病中是一种关键的调节信号通路,通过抑制NF-κB信号途径或下游转录因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)或白细胞介素-17(IL-17)/白细胞介素-23(IL-23)成为未来银屑病治疗的一个新方向。中药针对NF-κB信号通路在银屑病治疗中具有疗效确切、手段多样、不良反应小等优势。总结了中药调控丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/NF-κB、NF-κB/信号传导和转录激活因子3(STAT3)、Toll样受体4(TLR4)/NF-κB信号通路治疗银屑病的研究进展,以期为中药治疗银屑病提供更新策略。

基于肠黏膜屏障及TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路探讨燮和饮改善PCOS-IR小鼠炎症反应的影响

目的:探讨燮和饮对改善肥胖型多囊卵巢综合征胰岛素抵抗(PCOS-IR),减缓炎症反应的可能作用机制。方法:将60只SPF级雌性C57BL/6J小鼠随机抽取10只,并设为正常组,其余小鼠均采用粪菌混悬液(2 g·kg^(-1))联合来曲唑溶液(0.002 g·kg^(-1))灌胃4周建立PCOS-IR模型。将模型复制成功的动物随机分为模型组,二甲双胍组(0.25 g·kg^(-1))及燮和饮低、中、高剂量组(10,20,40 g·kg^(-1)),给予相应剂量的药物灌胃,每天1次,连续治疗4周。除空白组外,其余各组小鼠在治疗期间持续灌胃粪菌混悬液和来曲唑溶液以维持模型。动物每周称1次体质量;治疗结束后测量空腹血糖(FBG);酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清睾酮(T),促卵泡生成素(FSH),促黄体生成素(LH),空腹胰岛素(FINS)水平,计算LH/FSH及胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)值;摘取子宫和双侧卵巢称质量后固定,苏木素-伊红(HE)染色观察卵巢组织病理形态学变化;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测小鼠结肠组织中Toll样受体4/核转录因子-κB/NOD样受体蛋白3(TLR4/NF-κB/NLRP3)信号通路及下游炎症相关因子半胱氨酸天冬氨酸水解酶-1(Caspase-1),白细胞介素-1β(IL^(-1)β),紧密连接蛋白-1(ZO-1),闭合蛋白(occludin)表达水平。结果:与正常组比较,模型组小鼠体质量显著升高(P<0.01);血清FBG,FINS和HOMA-IR明显升高(P<0.05);血清T,LH/FSH显著升高(P<0.01);子宫脏器比显著降低(P<0.01),卵巢脏器比显著升高(P<0.01),镜下可见卵巢中囊性扩张卵泡及闭锁小卵泡数量明显增多,黄体数量显著减少,卵泡颗粒细胞层减少,卵泡膜显著增厚;结肠组织中ZO-1,occludin的相对表达量显著下调(P<0.01),炎症相关蛋白TLR4,NF-κB,NLRP3,Caspase-1,IL^(-1)β表达量明显上调(P<0.05)。与模型组比较,燮和饮低、中、高剂量组小鼠体质量显著降低(P<0.01);燮和饮中、高剂量组血清FBG,FINS,HOMA-IR明显降低(P<0.05);高剂量组血清T,LH/FSH显著降低(P<0.01);卵巢脏器比明显降低(P<0.05),子宫脏器比显著升高(P<0.05),卵巢中囊状卵泡明显减少,内见黄体,卵巢颗粒细胞正常排列,卵泡膜略增厚;高剂量组结肠组织TLR4,NF-κB,NLRP3,Caspase-1,IL^(-1)β蛋白表达显著下调(P<0.01),ZO-1,occludin蛋白表达量显著上调(P<0.01)。结论:燮和饮调控肠道TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路,减少下游炎症因子释放,通过重建肠黏膜屏障功能及抑制肠道炎症反应,改善肥胖和IR,从而逆转PCOS-IR。

喘可治对小鼠急性肺损伤TLR4/NF-κB/NLRP3通路的影响

目的:研究喘可治注射液对脂多糖(LPS)诱导的小鼠急性肺损伤(ALI)的防治效果及作用机制。方法:SPF级雌性C57BL/6J小鼠48只,随机分为正常组、模型组、地塞米松组、喘可治组,每组12只。喘可治组每只小鼠腹腔注射0.2 m L·d-1,1次/d,连续7 d;地塞米松组造模前3 d按1 mg·kg^(-1)腹腔注射,1次/d,连续3 d;模型组注射等剂量的生理盐水,正常组不作处理。除正常组外,第8天腹腔注射LPS 0.1 m L(0.5 g·L^(-1)),乙醚吸入麻醉后,各小鼠滴鼻LPS 25μL(0.5 g·L^(-1)),制作ALI模型。24 h后取材检测。酶联免疫吸附法(ELISA)检测小鼠血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-1β(IL^(-1)β),IL^(-1)8的含量;免疫组织化学染色检测核转录因子-κB(NF-κB)p65的蛋白表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肺组织p65,Toll样受体4(TLR4),Nod样受体蛋白3(NLRP3),半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(Caspase)-1蛋白表达;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测肺组织p65和TLR4的mRNA表达。结果:与正常组比较,模型组小鼠血清TNF-α,IL^(-1)β,IL^(-1)8含量升高(P<0.01),肺组织p65,TLR4,NLRP3,Caspase-1蛋白表达升高,p65和TLR4 mRNA的表达升高(P<0.05);与模型组比较,喘可治组小鼠血清TNF-α,IL^(-1)β,IL^(-1)8含量降低(P<0.01),肺组织p65,TLR4,NLRP3,Caspase-1蛋白表达降低,p65和TLR4 mRNA的表达降低(P<0.05)。结论:喘可治注射液能有效改善LPS诱导的急性肺损伤小鼠肺组织的损伤程度,其机制可能通过抑制TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路进而对肺组织起到保护作用。

基于HIF-1α/NF-κB/NLRP3信号通路探讨黄芪百合颗粒对高原低氧模型大鼠急性脑损伤的保护作用

目的:观察黄芪百合颗粒对高原低氧模型大鼠缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)/核转录因子-κB(NF-κB)/NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)信号通路的影响。方法:60只SPF级SD雄性大鼠随机分为正常组、模型组、地塞米松组(5 mg·kg^(-1))、黄芪百合颗粒高、中、低剂量组(4.1、2.05、1.025 g·kg^(-1))。其中各中药组连续灌胃给药14 d,1次/d,连续3 d腹腔注射地塞米松作为阳性药物组;第15天将模型组、地塞米松组、黄芪百合颗粒高、中、低剂量组至动物低压模拟舱中模拟高海拔低压低氧环境进行暴露,持续暴露3 d,腹主动脉采血并分离血清,处死后摘取脑组织;苏木素-伊红(HE)染色法观察脑组织病理变化;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测大鼠血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-1β(IL-1β)的含量;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组大鼠HIF-1α、NLRP3、磷酸化NF-κB(p-NF-κB)、NF-κB、消皮素D(GSDMD)和胱天蛋白酶-1(Caspase-1)蛋白的表达水平;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测各组大鼠HIF-1α、NLRP3、NF-κB p65、GSDMD和Caspase-1 mRNA的表达水平。结果:HE结果显示,与正常组比较,模型组大鼠脑组织病理切片可见锥体细胞排列松散且分布紊乱,大小不一;与模型组比较,地塞米松组及黄芪百合颗粒高、中剂量组锥体细胞病理改变减轻。ELISA结果显示,与正常组比较,模型组大鼠血清中TNF-α、IL-6和IL-1β的含量显著升高(P<0.01);与模型组比较,地塞米松组及黄芪百合颗粒高、中剂量组大鼠血清中TNF-α、IL-6和IL-1β的含量明显降低(P<0.05,P<0.01)。Western blot结果显示,与正常组比较,模型组大鼠脑组织中HIF-1α、NLRP3、p-NF-κB p65、GSDMD、Caspase-1蛋白相对表达水平均显著升高(P<0.01);与模型组比较,地塞米松组及黄芪百合颗粒高剂量组大鼠脑组织中HIF-1α、NLRP3、p-NF-κB p65、GSDMD、Caspase-1蛋白相对表达均明显降低(P<0.05,P<0.01),黄芪百合颗粒中剂量组大鼠脑组织中HIF-1α、NLRP3、p-NF-κB p65、Caspase-1蛋白相对表达均显著降低(P<0.01),黄芪百合颗粒低剂量组大鼠脑组织中HIF-1α蛋白相对表达降低(P<0.05)。Real-time PCR分析显示,与正常组比较,模型组大鼠脑组织HIF-1α、NLRP3、NF-κB p65、GSDMD和Caspase-1mRNA表达水平显著增加(P<0.01);与模型组比较,地塞米松组大鼠脑组织中HIF-1α、NLRP3、NF-κBp65、GSDMD和Caspase-1mRNA表达水平显著降低(P<0.01);黄芪百合颗粒高剂量组大鼠脑组织中HIF-1α、NF-κBp65、GSDMD和Caspase-1 mRNA表达水平显著降低(P<0.01);黄芪百合颗粒中剂量组大鼠脑组织中HIF-1α、NLRP3和Caspase-1 mRNA表达水平降低(P<0.05,P<0.01)。结论:黄芪百合颗粒对低压低氧大鼠急性脑损伤的保护作用可能与HIF-1α/NF-κB/NLRP3信号通路相关。

小青龙汤通过TLR4/MyD88/NF-κB信号通路抑制LPS诱导慢性肾小球肾炎的机制研究

目的探究小青龙汤通过TLR4/MyD88/NF-κB信号通路抑制LPS诱导的慢性肾小球肾炎的机制。方法24只健康Wistar大鼠随机分为对照组、模型组、小青龙汤组。对照组切片在DMEM基础培养基中培养80min,LPS模型组将10μg/mL浓度的LPS加入基础培养基中,切片在基础培养基中培养30min,转入含有LPS的基础培养基中培养50min。小青龙汤组:将含药血清溶解于基础培养基中,继续培养LPS模型组。造模成功后,取出切片进行指标检测。观察肾组织形态学变化;用ELISA检测肾组织中IL-1β、IL-4、TNF-α等含量;RT-qPCR和Western blot检测肾组织TLR4、MyD88、NF-κB mRNA及蛋白表达水平。结果与对照组相比,模型组大鼠肾组织中可见明显的炎性细胞浸润,偶见肾小球体积增大,增生的肾小球内细胞数量增多,肾小管的管腔扩张且内有明显的透明管型,肾组织中IL-1β、TNF-α、IL-6和IL-8的含量显著升高,IL-4显著下降(P<0.01);Western blot检测结果显示,与对照组比较,模型组大鼠肾组织TLR4、MyD88和P-NF-κB-p65蛋白表达升高,NF-κBp65蛋白表达降低(P<0.01);RT-qPCR显示,与对照组比较,模型组大鼠肾组织中TLR4,MyD88,NF-κB p65 mRNA表达水平有不同程度增高(P<0.01)。结论小青龙汤通过TLR4/MyD88/NF-κB信号通路改善LPS诱导的慢性肾小球肾炎大鼠肾组织的炎症损伤。