化瘀宁坤汤对盆腔炎大鼠TLR4/NFκB/COX2信号通路及炎症反应的影响

目的探讨化瘀宁坤汤对盆腔炎大鼠炎症反应及Toll样受体4(TLR4)/核转录因子kappaB(NF-κB)/环氧化酶2(COX2)信号通路的影响。方法实验分为假手术组、模型组、化瘀宁坤汤组、TLR4抑制剂组、化瘀宁坤汤+TLR4抑制剂组,每组10只。除假手术组外,其余各组机械损伤子宫内膜组织并混合菌液0.2 mL注入双侧子宫内构建盆腔炎大鼠模型,15 d后治疗。化瘀宁坤汤组、化瘀宁坤汤+TLR4抑制剂组灌肠6.25 mL化瘀宁坤汤;TLR4抑制剂组、化瘀宁坤汤+TLR4抑制剂组腹腔注射1 mg·kg;Tak-242;假手术组和模型组分别腹腔注射和灌肠等体积生理盐水。实验结束后检测各组大鼠子宫系数;苏木素-伊红(HE)检测子宫组织形态;酶联免疫吸附(ELISA)检测血清中炎症因子白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;免疫浊度法检测血清中免疫球蛋白(Ig)G、IgA和IgM水平;蛋白免疫印迹检测子宫组织中TLR4、NF-κB p65、COX2蛋白水平。结果与假手术组相比,模型组大鼠子宫系数,血清中IL-1β、TNF-α水平,子宫粘连扩张、慢性炎症浸润、内膜充血水肿、上皮变性坏死、上皮细胞增生病理评分,子宫组织中TLR4、NF-κB、COX2蛋白水平升高(P<0.05);血清中IgG、IgA水平降低(P<0.05)。与模型组相比,化瘀宁坤汤组、TLR4抑制剂组、化瘀宁坤汤+TLR4抑制剂组大鼠子宫系数,血清中IL-1β、TNF-α水平,子宫粘连扩张、慢性炎症浸润、内膜充血水肿、上皮变性坏死、上皮细胞增生病理评分,子宫组织中TLR4、NF-κB、COX2蛋白水平降低(P<0.05);血清中IgG、IgA水平升高(P<0.05)。分别与化瘀宁坤汤组、TLR4抑制剂组相比,化瘀宁坤汤+TLR4抑制剂组大鼠子宫系数,血清中IL-1β、TNF-α水平,子宫粘连扩张、慢性炎症浸润、内膜充血水肿、上皮变性坏死、上皮细胞增生病理评分,子宫组织中TLR4、COX2蛋白水平降低(P<0.05);血清中IgG、IgA水平升高(P<0.05)。与化瘀宁坤汤组相比,化瘀宁坤汤+TLR4抑制剂组子宫组织中NF-κB蛋白水平降低(P<0.05)。结论化瘀宁坤汤可能是通过抑制TLR4/NFκB/COX2信号通路从而实现对盆腔炎大鼠子宫组织炎症的保护。

小檗碱和大黄酸对LPS诱导巨噬细胞炎症反应及TLR2/NF-κB信号通路的影响

目的观察小檗碱和大黄酸对脂多糖(LPS)诱导巨噬细胞炎症反应及炎性相关信号通路Toll样受体2(TLR2)/核转录因子κB(NF-κB)的影响。方法将巨噬细胞RAW264. 7随机分为4组,空白组以完全培养基常规培养,LPS诱导组加入10 ng/m L LPS诱导4 h,小檗碱组和大黄酸组分别用20μmol/L小檗碱和30μmol/L大黄酸预处理2 h后加入10 ng/m L LPS诱导4 h。ELISA法检测细胞上清液炎性因子IL-1β、IL-6水平,RT-qPCR和Western blotting法分别检测细胞中的TLR2、白细胞介素4受体相关激酶(IRAK4)、NF-κΒp65 mRNA和蛋白。结果与空白组比较,LPS诱导组、小檗碱组和大黄酸组细胞上清液IL-1β、IL-6水平升高(P均<0. 05),细胞中TLR2、IRAK4及NF-κΒp65 mRNA和蛋白表达增加(P均<0. 05);与LPS诱导组比较,小檗碱组和大黄酸组细胞上清液IL-1β、IL-6水平降低(P均<0. 05),细胞中TLR2、NF-κΒp65 mRNA和蛋白及IRAK4 mRNA表达下降(P均<0. 05),小檗碱组IRAK4蛋白表达下降(P <0. 05)。结论小檗碱和大黄酸可通过下调TLR2/NF-κB信号通路分子的表达,从而抑制LPS诱导巨噬细胞炎性因子的产生和释放,以发挥其抗炎作用。

补中益气汤调控TLR4/NF-κB/AIM2信号通路改善自身免疫性甲状腺炎小鼠甲状腺炎症损伤的作用机制

目的:基于Toll样受体4(TLR4)/核转录因子-κB(NF-κB)/黑色素瘤缺乏因子2(AIM2)炎性小体信号通路探索补中益气汤改善自身免疫性甲状腺炎(AIT)小鼠炎症损伤的作用机制。方法:选用基因易感8周龄NOD.H-2h4小鼠120只,随机分为空白组、模型组、补中益气汤低、中、高剂量组(4.78、9.56、19.12 g·kg^(-1))、西药组(硒酵母片,3.033×10^(-5) g·kg^(-1))。各组AIT模型小鼠自由饮用0.05%碘化钠水溶液8周,建立AIT模型,空白组自由饮用蒸馏水。依据分组灌胃各给药组小鼠药液8周后取材,肉眼观察甲状腺组织肿胀情况,称量脾脏质量,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清炎症因子白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测甲状腺组织高迁移率族蛋白1(HMGB1)、TLR4、AIM2、NF-κB p65、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、胱天蛋白酶-1(Caspase-1)、IL-1β mRNA的表达,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测甲状腺组织HMGB1、TLR4、AIM2、NF-κB p65、磷酸化(p)-NF-κB p65、ASC、Caspase-1、IL-1β蛋白的表达,免疫荧光染色观察小鼠甲状腺组织HMGB1、AIM2、NF-κB p65的蛋白表达情况。结果:与空白组比较,模型组小鼠甲状腺组织明显肿胀,脾脏质量明显增加,甲状腺组织HMGB1、TLR4、NF-κB p65、AIM2、ASC、Caspase-1、IL-1β表达显著升高(P<0.01);与模型组比较,补中益气汤各剂量组小鼠甲状腺组织肿胀情况好转,脾脏质量明显下降,甲状腺组织HMGB1、TLR4、AIM2、NF-κB p65、p-NF-κB p65、ASC、Caspase-1、IL-1β表达明显降低(P<0.05,P<0.01)。结论:补中益气汤可有效改善AIT的炎症损伤,调控TLR4/NF-κB/AIM2炎性小体信号通路的异常活化可能是其干预机制之一。

穴位贴敷通过TLR4/MyD88/NF-κB通路调节原发性痛经大鼠的免疫功能

目的:基于Toll样受体(TLR)4/髓样分化因子(MyD)88/核转录因子κB p65(NF-κB p65)信号通路探讨石墨烯暖宫穴位贴对原发性痛经(PD)模型大鼠免疫功能的影响及对辅助性T淋巴细胞(Th)1/Th2免疫平衡的调节作用。方法:将SD雌性大鼠随机分成正常组、模型组和穴贴组,每组10只。股部皮下注射苯甲酸雌二醇制备PD模型。在造模的同时予穴贴组大鼠石墨烯暖宫穴位贴贴敷“关元”“子宫”(双侧)和“三阴交”(双侧)干预,连续10 d、1次/d、5 h/次。第11天腹腔注射缩宫素观察各组大鼠的扭体潜伏时间、30 min内的扭体次数,进行扭体评分;计算脾脏和胸腺的脏器指数;HE染色法观察大鼠脾脏和胸腺组织的病理变化;ELISA法检测血清免疫球蛋白(Ig)A、IgG、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-2、干扰素-γ(IFN-γ)、IL-4和IL-10含量;Western blot法和实时荧光定量PCR法分别检测大鼠子宫组织中TLR4、MyD88、NF-κB p65的蛋白及mRNA的相对表达量。结果:与正常组比较,模型组大鼠出现扭体反应(P<0.01),30 min内扭体次数和扭体评分显著增加(P<0.001);脾脏指数和胸腺指数均显著降低(P<0.01,P<0.05);脾脏和胸腺均出现了明显的病理变化;血清IgA、IgG、TNF-α、IL-2、IFN-γ含量显著升高,IL-4和IL-10含量显著降低(P<0.001,P<0.01);子宫组织TLR4、MyD88、NF-κB p65蛋白及mRNA表达均显著升高(P<0.001)。与模型组比较,穴贴组大鼠扭体潜伏时间延长(P<0.001),其他指标均逆转(P<0.001,P<0.01,P<0.05)。结论:石墨烯暖宫穴位贴可通过调控TLR4/MyD88/NF-κB p65信号通路,调节Th1/Th2的免疫平衡,修复免疫组织的病理损伤,改善免疫功能,从而有效缓解PD大鼠的疼痛症状。

基于TLR2/4-NF-κB/iNOS-NO信号通路研究秦艽水提物对胶原诱导型关节炎大鼠的影响及作用机制

目的:研究秦艽水提物对胶原诱导型关节炎(CIA)大鼠的疗效,并从Toll样受体2/4-核转录因子/诱导型一氧化氮合酶一氧化氮(TLR2/4-NF-κB/iNOS-NO)信号通路探讨其可能的作用机制。方法:SD大鼠随机分为6组,即正常对照组、模型对照组、雷公藤多苷0.005 g/kg组、秦艽水提物8 g/kg、4 g/kg、2 g/kg组。除正常对照组外,其余大鼠均建立CIA大鼠模型。模型成功后,药物组按对应剂量灌胃给药,正常对照组及模型对照组以等体积(10 ml/kg)灌胃双蒸水,每天1次,共28 d。观察并记录实验期间大鼠体重变化及右踝关节肿胀程度;Elisa法检测大鼠血清中白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)及一氧化氮(NO)含量;Western blot测定大鼠足跖软组织中核转录因子-κB(NF-κB)、Toll样受体2(TLR2)和Toll样受体4(TLR4)相关蛋白表达变化。结果:与正常对照组相比,模型对照组血清中IL-1β、IL-6、TNF-α、iNOS及NO含量显著升高;足跖软组织中NF-κB、TLR2及TLR4相关蛋白表达明显上调(P<0.05或P<0.01)。药物干预28 d后,与模型对照组相比,除秦艽水提物2 g/kg组外,其余各给药组大鼠体重显著升高,踝关节肿胀程度显著降低;血清中IL-1β、IL-6、TNF-α、iNOS及NO含量显著下降;足跖软组织中NF-κB、TLR2及TLR4相关蛋白的表达明显下调(P<0.05或P<0.01)。结论:秦艽水提物对大鼠胶原诱导型关节炎有显著的治疗作用,其作用机制可能与抑制TLR2/4-NF-κB/iNOS-NO信号通路,进而抑制炎症反应有关。